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宾川县2014年-2018年艾滋病HIV抗体检测蛋白免疫印迹法（WB）条带特征分析

范文

杨桂霞

摘要：目的：探讨宾川县2014年-2018年艾滋病HIV抗体检测WB确证条带特征。方法：2014年-2018年宾川县疾病预防控制中心检测的HIV-1抗体阳性样本共332例，采用酶联免疫吸附法（ELISA-丽珠、梅里埃）和快速检测法（RT）开展HIV抗体初次筛查。使用WB法确证检测HIV-1初筛结果为阳性的标本。分析人口学特征、HIV-1抗体阳性样本带型。结果：（1）共332例HIV-1抗体阳性病例，男225例，女107例;<20岁5例，20-39岁119例，40-59岁155例，≥60岁53例;文盲14例;小学153例;初中141例;中专及高中17例;大专及以上5例;不详2例;未婚79例，已婚190例，离异及丧偶63例。2014年-2018年各年年间的性别比例、年龄特征、受教育程度、婚姻状况等无明显差异，P>0.05。（2）gag核心蛋白带型p17阳性数315例（94.88%），p24阳性数331例（99.70%）;pol反转录酶蛋白带型p31阳性数292例（87.95%），p51阳性数330例（99.40%），p66阳性数331例（99.70%）;env膜蛋白带型gp41阳性数299例（90.06%），gp120阳性数325例（97.89%），gp160阳性数332例（100.00%）。结论：宾川县HIV-1抗体阳性主要集中在20-59岁、小学和初中文化水平、已婚男性人群，应当对该类人群进行积极干预;WB带型全条型病例多，提示许多HIV病毒感染者可在活跃期被发现。

关键词：艾滋病HIV抗体检测;WB确证条带;特征

【中图分类号】R415 ??【文献标识码】A ??【文章编号】1673-9026（2020）06-229-02

我国艾滋病低流行，截至2018年，艾滋病病毒感染病例正在逐年增加[1]。其中，高危人群为男男性行为人群。本研究探讨宾川县2014年-2018年艾滋病HIV抗体检测WB确证条带特征。

1.资料与方法

1.1基本资料

2014年-2018年宾川县疾病预防控制中心检测的HIV-1抗体阳性样本共332例，样本源来自我中心自愿咨询检测及宾川县各医疗机构送检的待查样本。

1.2方法

采用酶联免疫吸附法（ELISA-丽珠、梅里埃）和快速检测法（RT）开展HIV抗体初次筛查。使用WB法确证检测HIV-1初筛结果为阳性的标本。试剂包括：ELISA试剂，珠海丽珠、梅里埃;WB试剂，MP生物医学亚太私人有限公司。实验仪器包括：全自动蛋白免疫印迹仪。

配制试剂：将1体积的浓缩洗涤缓冲液（20X）加入到19倍体积的双蒸馏水中，充分混匀。把1体积的浓缩样品稀释缓冲液加入到9倍体积的蒸馏水中，充分混匀，每20毫升加入1g封闭粉，充分混匀。按1：1000比例配好封闭缓冲液稀释酶结合物。

试验步骤：

用镊子小心取出需要的试剂膜，分别放入孵育板槽内。每槽内加入2 ml 稀释的洗涤缓冲液，在室温下（25±3）℃将孵育板置摇床上振荡孵育至少5min，以吸引器吸出缓冲液。在每槽中加入2ml 配好的封闭缓冲液，分别加入20ul患者血清和强阳性、弱阳性、阴性对照。盖上盖子，于室温下（25±3） ℃在摇床上过夜（16～20 h）振荡孵育。小心掀开盖子以避免溅出或样品交叉，以吸引器吸出反应液。每槽中加入 2 ml 的洗涤缓冲液，每次置摇床上振荡5min。弃洗液，再重复两次。每槽中加入2ml酶结合物工作液，盖上盖子，于室温下（25±3）℃在摇床上振荡孵育 30 min。仔细打开盖子，吸出酶结合物溶液，按步骤6洗涤3次。每槽中介入2ml底物液，盖上盖子，于室温下（25±3）℃在摇床上振荡孵育15min。小心打开盖子，吸出底物，以双蒸馏水洗涤3次，以终止反应。用镊子小心取出试剂膜，放在滤纸上，吸干水分，观察并记录结果。

注：结果判断：《全国艾滋病检测技术规范》（2019版本）

1.3观察指标

分析人口学特征、HIV-1抗体阳性样本带型。

1.4统计学方法

采用SPSS20.0统计学软件进行统计分析，对正态分布的数据进行t检验，对非正态分布的数据进行卡方检验，采用平均数±标准差的形式表示数据的分布趋势，P<0.05表示数据的比较差异具有统计学意义。

2.结果

2.1分析人口学特征

共332例HIV-1抗体阳性病例，男225例，女107例;<20岁5例，20-39岁119例，40-59岁155例，≥60岁53例;文盲14例;小学153例;初中141例;中专及高中17例;大专及以上5例;不详2例;未婚79例，已婚190例，离异及丧偶63例。2014年-2018年各年年间的性别比例、年龄特征、受教育程度、婚姻状况等无明显差异，P>0.05。（如表1）

2.2分析HIV-1抗体阳性样本带型

gag核心蛋白带型p17阳性数315例（94.88%），p24阳性数331例（99.70%）;pol反转录酶蛋白带型p31阳性数292例（87.95%），p51阳性数330例（99.40%），p66阳性数331例（99.70%）;env膜蛋白带型gp41阳性数299例（90.06%），gp120阳性数325例（97.89%），gp160阳性数332例（100.00%）。（如表2）

3.讨论与结论

蛋白印迹试验（WB）带型特征的影响因素复杂，包括：个体自身的HIV结构蛋白浓度、抗原性强度、产生抗体的时间、个体对抗原成分的反应敏感度、对抗原的免疫應答等等[2-3]。本研究显示，共332例HIV-1抗体阳性病例，男225例，女107例;<20岁5例，20-39岁119例，40-59岁155例，≥60岁53例;文盲14例;小学153例;初中141例;中专及高中17例;大专及以上5例;不详2例;未婚79例，已婚190例，离异及丧偶63例。2014年-2018年各年年间的性别比例、年龄特征、受教育程度、婚姻状况等无明显差异，P>0.05。gag核心蛋白带型p17阳性数315例（94.88%），p24阳性数331例（99.70%）;pol反转录酶蛋白带型p31阳性数292例（87.95%），p51阳性数330例（99.40%），p66阳性数331例（99.70%）;env膜蛋白带型gp41阳性数299例（90.06%），gp120阳性数325例（97.89%），gp160阳性数332例（100.00%）。

综上所述，宾川县HIV-1抗体阳性主要集中在20-59岁、小学和初中文化水平、已婚男性人群，应当对该类人群进行积极干预;WB带型全条型病例多，提示许多HIV病毒感染者可在活跃期被发现。

参考文献

[1]黄小娟，曹明玉，辛艳泓，等.155例HIV抗体阳性者ELISA与WB结果分析[J].中国艾滋病性病，2017，23（5）：458-460.

[2]吴可可，谢爱蓉，王建，等.利用logistic回归模型对艾滋病病毒抗体不确定者转归分析[J].疾病监测，2018，33（10）：839-843.

[3]张秀娟，张蕾，李霞.HIV-1抗体不确定者跟踪监测结果分析[J].中国卫生检验杂志，2015，25（14）：2396-2398.

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