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标题 金樱子不同炮制饮片化学成分及抗氧化活性分析
范文 邓翀+江迎春+张化为+宋小妹+姜祎+颜永刚



摘要：目的 考察蜜制和麸制对金樱子化学成分的影响。方法 以总多酚、总皂苷、总多糖、总氨基酸为评价指标，考察金樱子生品、蜜制品、麸制品中4类化学成分的变化情况；以体外对1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除率为评价指标，比较金樱子生品、蜜制品、麸制品的抗氧化活性。结果 金樱子生品、蜜制品、麸制品总皂苷含量分别为3.332%、4.880%、4.572%，总酚酸含量分别为1.92%、6.38%、7.30%，总多糖含量分别为35.99%、40.38%、36.86%，总氨基酸含量分别0.67%、0.76%、0.96%。经炮制后金樱子总多酚、总皂苷、总多糖、总氨基酸含量均升高，其中总多酚含量升高最为明显；金樱子生品、蜜制品、麸制品体外清除DPPH自由基的IC50分别为0.47、0.51、0.22 mg。结论 与生品比较，金樱子蜜制品和麸制品化学部位含量增高，抗氧化性增强。
关键词：金樱子；蜜制；麸制；化学部位；抗氧化
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.04.018
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2017）04-0071-04
Analysis on Chemical Compositions and Antioxidant Activity of Different Processing Decoction Pieces of Rosae Laevigatae Fructus DENG Chong， JIANG Ying-chun， ZHANG Hua-wei， SONG Xiao-mei， JIANG Yi， YAN Yong-gang （College of Pharmacy， Shaanxi University of Chinese Medicine， Xianyang 712046， China）
Abstract： Objective To investigate the honey and bran of processing for chemical compositions of Rosae Laevigatae Fructus. Methods With total polyphenols， total saponins， total polysaccharides and amino acids as the evaluation indexes， changes of the chemical compositions of these four chemical components in Raw product， honey products， bran products of Rosae Laevigatae Fructus were studied； in vitro activity of DPPH radical clearance for evaluation index， antioxidant activity of raw products， honey products， bran products of Rosae Laevigatae Fructus were compared. Results Raw products， honey products， and bran products of total saponin content were 3.332%， 4.880%， and 4.572%； total phenolic contents were 1.92%， 6.38%， and 7.30%； total polysaccharide contents were 35.99%， 40.38%， and 36.86%； the total amino acid contents were 0.67%， 0.76%， and 0.96%. Total polyphenol， total saponins， total polysaccharides， and total amino acids of Rosae Laevigatae Fructus after processing increased， in which the total polyphenol was most obvious； DPPH radical scavenging IC50 of raw products， honey products， and bran products were 0.47， 0.51， and 0.22 mg， respectively. Conclusion Compared with raw product， the content of chemical fractions in honey products and bran products of Rosae Laevigatae Fructus increase， and oxidation resistance is enhanced.
Key words： Rosae Laevigatae Fructus； honey； bran； chemical fractions； antioxidant
金櫻子为蔷薇科蔷薇属植物金樱子Rosa laevigata Michx.的成熟果实，具有固精缩尿、涩肠止泻功效，用于治疗遗精滑精、遗尿尿频、崩漏带下、久泻久痢。金樱子的化学成分主要为三萜、有机酸、黄酮、鞣质、多糖等，具有提高机体免疫力、抗氧化、抗肿瘤、抑菌、抗病毒等药理活性[1]。炮制引起中药饮片变化主要包括两方面：一是整体化学成分变化，二是化学成分变化导致生物活性的改变。目前主要以几个单体化学成分含量变化或某一两个化学部位含量为标准评价炮制品质量，无法合理阐释中药炮制变化的内涵。本研究从整体化学成分角度出发，在前期研究[2]基础上，以总多酚、总皂苷、总多糖、总氨基酸为化学评价指标，以抗氧化为生物活性评价指标，研究金樱子不同炮制品的变化，为探讨其炮制原理提供参考。
1 仪器与试药
UV-1102紫外分光光度计（上海天美科学仪器有限公司），GB204型电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司，十万分之一），HH-2型数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司），101型电热鼓风干燥箱（北京科伟永盛实验仪器设备厂），SQ8200HD型超声波清洗器（上海冠特超声仪器有限公司）。
金樱子药材购于西安市万寿路药材市场，经本院王继涛高级实验师鉴定为蔷薇科植物金樱子Rosa laevigata Michx.的干燥成熟果实；没食子酸对照品、齐墩果酸对照品、芦丁对照品、D-葡萄糖对照品、L-谷氨酸对照品（批号分别为110831-200252、125742- 201058、0080-9705、110833-200503、070112，含量均为98%），中国食品药品检定研究院；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH，批号CR0032），日本东京化成工业株式社；维生素C对照品（批号2010608），天津市天力化学试剂有限公司；所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
2 方法和结果
2.1 不同炮制品的制备
2.1.1 麸制金樱子饮片 取金樱子生品饮片100 g，加麸量为20 g，以160 ℃温度炒制12 min，分离金樱子饮片与辅料，收集金樱子麸制饮片。
2.1.2 蜜制金樱子饮片 取金樱子生品饮片100 g，加蜜量为25 g，闷润3 h，以160 ℃温度炒制10 min，收集金樱子麸制饮片。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 分别精密称取干燥至恒重的D-葡萄糖、L-谷氨酸、没食子酸、齐墩果酸对照品15.50、7.50、10.00、9.90 mg，分别以适当的溶剂溶解，并分别配成0.62、0.75、0.20、0.99 mg/mL的对照品溶液。
精密称取DPPH约10 mg，用70%乙醇溶解并定容于25 mL棕色量瓶中，置于4 ℃冰箱备用。
2.2.2 供试品溶液的制备 ①精密称取各供试品饮片粉末约1 g，以13倍量65%乙醇回流提取2次，每次2 h，合并滤液并浓缩挥干，以65%乙醇溶解并定容至25 mL容量瓶中，4 ℃保存，供总多酚、总皂苷、总多糖、总氨基酸及清除DPPH测定。②精密称取各供试品饮片粉末约0.5 g，加10倍量无水乙醇，在微沸状态下回流提取2 h，提取液减压回收乙醇后弃去，滤渣精密加20倍量水，煎煮2次，每次1 h，合并提取液，定容于25 mL容量瓶，4 ℃保存，供多糖含量测定。
2.3 化学部位含量测定
2.3.1 线性关系考察 精密量取齐墩果酸对照品溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL，置于10 mL试管中，70 ℃水浴挥干溶剂，加入5%香草醛-冰乙酸溶液（临用新配）200 ?L及高氯酸溶液800 ?L，混匀，60 ℃恒温水浴加热20 min，取出，立即于冰水中冷却10 min后加入5 mL冰乙酸，混匀，以不加样为空白，在545 nm处测吸光度[3]。以对照品质量为横坐标，吸光度为纵坐标，得回归方程Y=0.962 5X-0.037 3，r2=0.999 8，表明齐墩果酸在0.198～0.693 mg范围内与吸光度呈良好的线性关系。
精密量取没食子酸对照品溶液50、100、150、200、250、300 ?L于10 mL具塞试管中，加乙醇至2 mL，加0.3%十二烷基磺酸钠0.8 mL、0.6%FeCl3- 0.9%K3[Fe（CN）6]（1∶1）混合溶液0.4 mL，摇匀，放置5 min，加0.1 mol/L盐酸至刻度，摇匀，避光放置20 min，以不加样为空白，于744 nm处测定[4]。以对照品溶液质量为横坐标，吸光度为纵坐标，得回归方程Y=10.974X-0.002 6，r2=1，表明没食子酸在0.01～0.06 mg范围内与吸光度呈良好的线性关系。
精密量取L-谷氨酸对照品溶液40、60、80、100、120、140 ?L于10 mL具塞试管中，各加水至1 mL，加磷酸盐缓冲液（pH=6.86）3 mL，加2%茚三酮溶液1 mL，摇匀，沸水浴20 min，流水冷却，以不加样为空白，在570 nm处测定[5]。以对照品质量为横坐标，吸光度为纵坐标，得回归方程Y=8.903 8X-0.104 6，r2=0.999，表明L-氨基酸在0.030～0.105 mg范围内与吸光度呈良好的线性关系。
精密量取D-葡萄糖对照品溶液0.05、0.08、0.10、0.15、0.20 mL于10 mL具塞刻度试管中，加水至2 mL，加5%苯酚溶液（现用现配）1 mL，混匀，迅速加入5 mL浓硫酸，40 ℃水浴15 min，取出，冰水浴冷却5 min，以水为空白，于480 nm处测其吸光度[6]。以對照品质量为横坐标，吸光度为纵坐标，得回归方程Y=5.959 6X-0.005 5，r2=1，表明D-葡萄糖在0.031～0.124 mg范围内与吸光度呈良好的线性关系。
2.3.2 方法学考察 按“2.2.2”项下方法，以没食子酸、齐墩果酸、D-葡萄糖、L-谷氨酸对照品为指标，考察总多酚、总皂苷、总多糖、总氨基酸的方法精密度、稳定性、重复性及加样回收率。结果表明，测定总多酚的方法精密度、稳定性、重复性RSD依次为0.08%、0.26%、0.25%，平均回收率为100.8%±1.97 %；测定总皂苷的方法精密度、稳定性、重复性RSD依次为0.13%、0.67%、0.24%，平均回收率为101.6%±1.32 %；测定总多糖的方法精密度、稳定性、重复性RSD依次为0.36%、0.33%、1.93%，平均回收率为97.65%±1.63%；测定总氨基酸的方法精密度、稳定性、重复性RSD依次为0.65%、1.37 %、1.88 %，平均回收率为100.43%±1.02%。各指标测定方法学考察均符合要求。
2.3.3 样品含量测定 精密量取各供试品溶液适量于10 mL具塞试管中，按“2.3.1”项下测定各化学部位含量方法操作，平行测定3次，测其吸光度，计算各化学部位含量，结果见表1～表4。可知4类化学成分含量炮制品均高于生品，其中总酚酸含量变化最为明显。
2.4 抗氧化活性测定
精密移取不同体积供试品溶液于10 mL试管中，各加DPPH乙醇溶液0.5 mL，混合液用70%乙醇定容至5 mL，混匀，于室温暗处反应1 h，以乙醇为空白，在522 nm处测吸光度（A1），并测定DPPH乙醇溶液0.5 mL定容至5 mL后的吸光度（A0）及不同体积溶液定容后的吸光度（A2），计算DPPH自由基清除率。清除率（%）=[1-（A1-A2）/A0]×100%[7]。结果见图1。计算可得维生素C及金樱子生品、蜜制品、麸制品清除DPPH自由基的IC50依次为0.02、0.51、0.47、0.22 mg。
3 讨论
金樱子三萜类化学成分主要为五环三萜皂苷类[8]，本研究结果表明，生品、蜜制品及麸制品中皂苷类化学成分含量依次为3.33%、4.88%、4.57%；加辅料炮制后皂苷含量变化的原因可能是辅料的引入及加热过程对金樱子组织细胞结构的影响，从而增强了皂苷类化学成分的溶出率。金樱子总多酚类主要包括黄酮类及鞣质类化学成分[9]，本研究结果显示，生品、蜜制品及麸制品中总多酚含量依次为1.92%、6.38%、7.30%，这可能与炮制加热过程使部分鞣质类发生水解，以及辅料麸皮含有的大量多酚类成分[10]在炮制过程中吸附或吸收于药材组织中有关。金樱子生品、蜜制品及麸制品中总多糖含量依次为35.99%、40.38%、36.86%，与文献报道的多糖变化趋势基本吻合[11]；蜜制品多糖含量变化较大的原因可能与炮制辅料蜂蜜中含有80%～90%糖类化学成分有关[12]。金樱子生品、蜜制品及麸制品中总氨基酸含量依次为0.67%、0.76%、0.96%，炮制品总氨基酸含量高于生品原因可能与炮制辅料蜂蜜或麸皮中含有大量氨基酸和蛋白质有关。
从体外抗氧化活性评价结果来看，金樱子生品、蜜制品及麸制品清除DPPH自由基的IC50依次为0.51、0.47、0.22 mg。从化学成分变化趋势来看，金樱子抗氧化活性与总多酚和总氨基酸含量变化趋势一致，这说明金樱子抗氧化活性可能与多酚类，或多酚和氨基酸类含量相关。
综上所述，金樱子炮制过程使其主要化学成分皂苷类、多酚类、多糖及氨基酸类的含量发生变化，其体外抗氧化活性也相应发生变化。目前对金樱子炮制后化学成分变化的研究主要集中在多糖和黄酮，而对皂苷、总多酚、氨基酸含量变化鲜有报道，今后需进一步关注。另外，还应结合药效评价分析化学成分变化与药效变化的关联性，从而揭示金樱子炮制原理。
参考文献：
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更新时间：2024/12/23 6:25:37