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保元汤提取工艺研究

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袁玲玲丁丽娜钱如贵卓纯艳黎恒荷刘涛赵明仙

摘要：目的?优化保元汤提取工艺，提高有效成分提取率，降低提取物引湿性。方法?以人参、黄芪、甘草中所含特征成分为评价指标，优选工艺条件。结果?通过试验优选的工艺为：取经破碎药材，按1：10加入70%乙醇，回流提取2次，每次60 min，减压回收乙醇，以原药材0.05～0.1 g/mL浓度通过D101大孔树脂吸附，70～80%乙醇洗脱，浓缩，80℃减压干燥，得到保元汤提取物，得率为2.06%，人参总皂苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草酸的转移率分别为92.17%、46.52%和42.66%，引湿性为9.67%。结论?研究优选的提取工艺，主要成分转移率高，提取物得率和日服用量低，引湿性改善，工艺稳定可行，可为保元汤提取工艺制订提供依据，也可为其它中药方剂开发和现代化研究提供思路。

关键词：保元汤;提取;成分转移率;引湿性

中图分类号：R285.5?文献标志码：A?文章编号：1007-2349（2020）11-0066-05

保元汤为古代经典方剂，主治元气虚弱症，组方包含人参、黄芪、甘草、肉桂、生姜等5味药材，其中人参、黄芪为君臣药味，传统方为水煎剂，与其他传统方剂一样存在提取效率低、服用量大、易吸潮等问题。

现代研究证实，人参中的人参总皂苷具有多种药理功能[1-2];黄芪中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷具有明显的抗氧化、抗病毒、免疫调节活性[3-4];甘草中的甘草酸具有抗病毒、抗肿瘤、抗炎、抗心肌缺血等药理作用[5]。文章以人参总皂苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草酸等3种主要活性成分作为评价和控制指标，对提取工艺加以优化，解决保元汤提取制备过程中存在的主要问题，为保元汤提取和现代制剂开发提供实验依据，具有较好的理论和实践意义。

1?材料与方法

1.1?实验材料?人参、黄芪、甘草、肉桂，购自云南华优中药科技有限公司;毛蕊异黄酮葡萄糖苷（111920-201606），人参皂苷Rg1（110703-201832），人参皂苷Rb1（110704-201525），人参皂苷Re（110754-201122），甘草酸铵（110731-201720），均来源于中国食品药品检定研究院。

甲醇（国药集团化学试剂有限公司，20181102）;甲酸（天津风船化学试剂科技有限公司，20100722）;乙腈（Fisher Chemical，180890，默克，75-05-8）;食用乙醇（云南杨林工业开发区汕滇药业有限公司，20190701）;D101大孔树脂（西安蓝晓科技新材料股份有限公司）;Agilent ZORBAX Eclipse plus C18色谱柱（250mm × 4.6mm，5μm，用于检测毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草酸）;汉邦Phecda C18色谱柱（250mm × 4.6mm，5μm，用于检测人参总皂苷）。

1.2?仪器设备?ME204电子分析天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）;BT125D电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）;Aglient 1260高效液相色谱仪（Agilent Technologies Inc.，G1311C 1260 Quat pump四元泵，G1329B自动进样器，G1316A 1260TCC柱温箱，G1314F 1260VWD紫外检测器）;Waters 2489 高效液相色谱仪（waters Inc.，515泵，2489检测器）;SK250LH7超声波清洗仪（上海科导超声仪器有限公司）;RE-52CS旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）;DZF-6020MBE真空干燥箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）;HH-S4数显恒温水浴锅（江苏科析仪器有限公司）。

1.3?保元汤处方?根据明代医学典籍《简明医彀》记载的用法用量和文献[6]报道的制备方法，保元汤处方为：人参1500 g，黄芪3000 g，甘草750 g，肉桂300 g，生姜1500 g，辅料适量，共制成颗粒剂1000袋，每次1袋、每天2次，相当于每天服用原药材14.10 g。

1.4?分析检测

1.4.1?HPLC检测条件?毛蕊异黄酮葡萄糖苷，参照文献[6]，色谱柱为C18，以乙腈（A）-0.2%甲酸溶液（B）为流动相，梯度洗脱（0～20 min，15%～40%A;20～25 min，40%A），流速1.0 mL/min，柱温25℃，检测波长260 nm。人参总皂苷（包含Rg1、Re、Rb1）、甘草酸，均参照《中国药典》中人参、甘草药材含量测定项下的方法，各成分均为各药材特征成分，专属性较好。

1.4.2?对照品溶液制备?精密称取各对照品适量，其中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、人参皂苷Rg1、Re、Rb1，均用甲醇作為溶剂，甘草酸铵用70%乙醇溶液作为溶剂，配制成对照品贮备液，分别精密量取适量对照品储备液，经稀释得到不同浓度的系列对照品标准溶液。各对照品进样量为10～20 μL。

1.4.3?供试品溶液制备?保元汤提取液：取提取液适量（相当于处方药材10 g），减压浓缩至稠膏，加甲醇超声溶解，将内容物转移至50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

保元汤提取物：取提取物细粉适量（相当于处方药材1～2 g），精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇30 mL，超声处理（功率180W，频率53kHz）30 min，滤过，滤渣同法再处理一次，合并滤液，蒸至近干，残渣加甲醇适量溶解，转移至25～50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。经大孔树脂纯化处理的提取物，精密量入25 mL甲醇，超声处理30 min，放置室温，补重，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2?结果与分析

2.1?药材成分含量测定?按1.4.2方法制备各对照品溶液，按照1.4.1色谱条件检测药材，由于甘草与黄芪同含毛蕊异黄酮葡萄糖苷，在该项成分检测中，取过四号筛甘草粉末约5 g，参照黄芪药材含量测定项下制备方法进行检测;其余成分均按照《中国药典》药材含量测定方法进行检测，进样体积10～20 μl。经检测，人参药材中含人参总皂苷0.6317%（包含Rg1、Re、Rb1），黄芪含毛蕊异黄酮葡萄糖苷0.0478%，甘草含甘草酸2.1678%、毛蕊异黄酮葡萄糖苷0.0098%。

2.2?提取溶剂选择?按50 g药材处方量称取10～50目粒径范围内的各组方药材，共4份，按料液比1：15分别加入水、50%乙醇、70%乙醇、90%乙醇溶液，回流提取1次，每次60min，经减压干燥得到提取物，计算提取物得率，检测主要成分含量，计算成分转移率，结果见表1。

根据结果可知，以水作为提取溶剂，即传统的水提取工艺，提取物得率较高，但3种成分含量和转移率较低;随着乙醇溶液浓度增加，提取物中人参总皂苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷等成分转移率有增加趋势，其中，以70%乙醇为溶剂所得提取物中人参总皂苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的成分转移率最高;而甘草酸成分转移率变化不呈现规律，在兼顾君臣药主成分含量处于较高水平的前提下，选择70%乙醇作为提取溶剂优势较为明显。

2.3?药材粉碎粒度考察?将人参、黄芪、甘草、肉桂药材粉碎后，分为大于10、10～24、24～50目等3个粒度段，生姜分别采取切片、切丝、切丁的处理方式，按50 g药材处方量称取不同粒度段的各味药材，共3份，按料液比1：15分别加入70%乙醇溶液，回流提取1次，每次提取物60min，浓缩、干燥得提取物，计算提取得率，检测主要成分含量，计算成分转移率，结果见表2。

根据结果可知，随着药材粉碎粒度的增加，保元汤提取物得率增加，但各成分转移率的变化并不呈规律，可能是由于根或根茎类药材存在根皮、根体、根须等不同部位成分含量差异，而进一步细化粉碎会导致相互的配比失衡，出现某粒度段某部位占比较多的现象。总体而言，药材粉碎粒度对成分转移率影响不大，在保元汤提取过程中，药材破碎工艺可选取较大的粒径范围。

2.4?提取工艺正交试验?结合2.2、2.3实验结果，取同一粒径范围为24～50目的人参、黄芪、甘草、肉桂等药材，生姜切丁，按处方药材总量100 g称取各药材，共9份，按表3设计的工艺条件进行提取，提取完毕，分别收集各试验提取液，量取1/10体积（即10 g处方药材），减压蒸干，计算提取得率，检测含量，计算成分转移率，各成分检测结果见表4，方差分析見表5。

根据表4～5结果，以均方差最低值所在因素列为误差列进行方差分析，对结果具有统计学意义的因素有A、B、C因素，有明显影响的指标有人参总皂苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷，结合正交试验极差分析结果，得到最佳条件为A2B2C3，D折中选择D2，其中C为提取次数，而根据详细数据来看，差异主要来源于提取1次与提取2、3次数据，提取2、3次之间差异较小，由于提取次数对工艺能耗影响较明显，当C3优势不足以明显时，可降水平选择，人参总皂苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷C2：C3检测结果比值分别为1：1.05、1：1.03，差异并不明显，结合实际工艺，最终选择C2，综上所述，选择A2B2C2D2为最佳提取工艺参数，即提取溶剂为70%乙醇，加10倍量，回流提取2次，每次60min。

2.5?干燥条件考察?取10～50目粒度段的各处方药材，按处方药材总量400 g称取1份，在2.4正交实验得到的最佳工艺条件下进行提取，提取液减压浓缩至稠膏，混合均匀后分成3份，分别在60、70、80℃温度下减压干燥，得到的提取物合计得率为26.57%，各成分检测结果见表6。

以上结果表明，成分含量和转移率的不仅是干燥温度，还与干燥时间相关，当干燥温度提高时，可缩短干燥时间，更利于成分保留，因此选择80℃为减压干燥温度。

2.6?提取工艺小试?按处方称取经破碎得到的大于10目粒度段的各处方药材（其中肉桂为细粉，生姜为丁），称取处方药材总量140 g，共3份，按照2.4正交实验得到的最佳工艺进行提取，在80℃减压干燥得到保元汤提取物，批号分别为20191101、20191102、20191103，提取收率分别为28.44%、32.22%、31.42%，各成分检测结果见表7。

由实验结果可知，保元汤提取得率为28.44～32.22%，平均30.69%，较为稳定;提取物中人参皂苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草酸成分含量较为稳定，人参总皂苷成分转移率能达到90%以上，毛蕊异黄酮葡萄糖苷成分转移率均能达到47～50%，甘草酸成分转移率67～79%，见表7。

2.7?成分富集纯化?通过观察小试样品发现，2.6制备的保元汤提取物引湿性较强，在实验条件下暴露较短时间即出现吸潮现象，可能是由于小分子糖类物质含量过高所致[7]，文章采用大孔树脂纯化方法去除提取物中糖类物质，以降低提取物引湿性。

称取处方总药材140 g，共3份，按2.4正交实验得到的最佳工艺进行提取，提取浓缩至无醇味，加水至1400～2800mL（相当于原药材浓度为0.05～0.1 g/mL），过D101大孔树脂层析柱（内径5.8cm，高20cm，体积530mL，经预处理），流速3～4BV/h，弃去流出液;用1400mL水洗脱，流速4～5BV/h，弃去水洗液;用75%乙醇1400mL洗脱，流速为1～2BV/h，收集洗脱液，减压浓缩后干燥，得提取物，批号为20191104、20191105、20191106，提取收率分别为1.99%、2.10%、2.09%，各成分检测结果见表7。

不同工艺条件下提取物各成分检测结果、转移率结果见表7，不同工艺下得率、服用量和引湿性比较见表8。

经富集纯化的提取物主成分人参总皂苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草酸转移率分别为92.17%、46.52%和42.66%。与传统水提取工艺比较，提取物得率由31.86%降低至2.09%，日服用量由4.49 g降至0.29 g;提取物引湿性由29.12%降至9.67%，吸潮现象得到明显改善。

3?讨论

古代经典方剂研究需要在传承古方的前提下不断优化改进，在同等药效的作用下，可开发更具优势的现代化中药制剂，跨越中药发展的瓶颈。本文针对保元汤提取物传统制备方法中存在的问题，采用乙醇提取，人参、黄芪、甘草中人参总皂苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草酸等主要活性成分转移率明显提高。采用大孔树脂纯化工艺，可去除中藥中所含有的大量单糖或低聚糖，制备提取物日服用量降低，药物引湿性明显降低，可满足不同制剂工艺要求，保证制剂产品的质量稳定、可控，同时方便目标人群使用，达到了预期效果。

4?小结

本文通过单因素实验、正交试验和小试工艺研究，优选得到了保元汤的提取工艺，与传统水提取工艺相比，主要药味中有效成分转移率提高，提取物引湿性降低，日服用量减少，本文不仅为保元汤提取工艺和质量标准制订提供依据，也为其它中药方剂提取和现代制剂研究提供思路。

此外，研究采用D101大孔吸附树脂对保元汤主要成分进行富集和纯化，由于树脂对各成分的选择性不同，纯化前后提取物中人参总皂苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的转移率变化不大，但甘草酸的转移率明显降低。大孔树脂的吸附及解吸工艺受树脂柱径比、样品浓度、吸附流速等多方面因素影响[8]，因此针对各成分的树脂选择和纯化工艺条件还需要进一步研究。

参考文献：

[1]张洁.人参皂苷在心血管系统药理作用的研究进展[J].中医临床研究，2019，11（7）：141-144.

[2]赵远，张凡，曲胜军等.人参主要成分药理研究进展[J].亚太传统医药，2012，8（11）：171-174.

[3]张冬青，王海宝，王淑芳等.毛蕊异黄酮生物活性的研究进展[J].中国中药杂志，2015，40（22）：4339-4345.

[4]李亮亮，黄金智.毛蕊异黄酮葡萄糖苷药理作用的研究进展[J].海南医学院学报，2020，26（2）：156-160.

[5]李想，李冀.甘草提取物活性成分药理作用研究进展[J].江苏中医药，2019，51（5）：81-86.

[6]袁玲玲，钱如贵，丁丽娜等.保元汤颗粒中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定[J].云南中医中药杂志，2019，40（8）：69-75.

[7]邓剑壕，冯豆，许佳楠等.中药固体制剂吸潮问题分析[J].广东药科大学学报，2018，34（1）：124-127.

[8]张玲忠，张贵华，段维杰.大孔吸附树脂在中药活性成分分离纯化中的应用[J].中国民族民间医药，2019，28（14）：51-56.

（收稿日期：2020-05-06）

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