| 标题 | 高效液相色谱法测定药用辅料苯甲醇中苯甲酸和苯甲醛的含量 |
| 范文 | 徐辉 摘 要：目的：采用高效液相色譜法对苯甲醇中所含有的苯甲酸以及苯甲醛的含量进行检测，苯甲醇主要应用在药用辅料中。方法：选取Acclaim120C18柱，规格为4.6mm×250mm，5μm，乙腈-0.02%甲酸作为流动相，使用氨水对pH进行调节，使其达到4.5，比例为30∶70，流速是1.0mL·min-1，所检测的波长为230nm，将柱温控制在35℃，此时的进样量是20μL。结果：结果显示当苯甲酸在0.5006与15.02μg·mL-1之间时，能够与峰面积达到良好的线性关系，并且平均回收率在100%以上，RSD的平均值小于1.3%，其中n=3；当苯甲醛在0.5052与15.16μg·mL-1之间时，能够与峰面积达到良好的线性关系，并且平均回收率在108%以上，此时的RSD平均值小于1.15%，其中n=3。结论：采用高效液相色谱检测的方法具有较高的准确性，将其应用在苯甲酸以及苯甲醛的含量检测过程中具有良好的效果。 关键词：高效液相色谱法；苯甲醇；苯甲酸；苯甲醛 中图分类号：R927 文献标识码：A 通常情况下，苯甲醇都是当作药用辅料使用的，主要是在药膏或者药液中应用比较广泛，可以有效防止药膏或者药液变质。想要对其质量进行有效的控制，主要采用了高效液相色谱法进行苯甲醇的检测。 1.仪器与试药 LC-30A超高效液相色谱仪（SPD-M20A二极管阵列检测器、LC Solution色谱数据工作站，岛津公司）；ML204分析天平（Mettler Teledo，精度：万分之一）。苯甲酸、苯甲醛对照品（中国食品药品检定研究院，批号分别为100419-201302、111650-200802，使用前不需干燥处理，含量分别为100%、99.7%）；乙腈为色谱纯（默克公司）；水为自制超纯水；其余所需化学试剂均为分析纯。 2.方法与结果 （1）色谱条件。色谱柱：Acclaim120C18（4.6mm× 250mm，5μm）；流动相：乙腈-0.02%甲酸溶液（用氨水调至pH=4.5）（30∶70）；流速：1.0mL·min-1；检测波长：230nm；柱温：35℃；进样量：20μL。（2）溶液的配制和测定方法。首先对对照品的溶液进行制备，适量的选取苯甲酸与苯甲醛的对照品，将其放入流动相中进行溶解，并且加以稀释，直到每mL中含有0.5mg的对照品储备液为止。紧接着称取对照品储备液1mL，将其放入容积为50mL的量瓶中，使用流动相进行稀释，以达到要求的刻度，均匀的摇匀以后得到苯甲酸以及苯甲醛的混合对照品溶液10μg。其次是对供试品的溶液进行制备，先取样品25mg，加以精密的称量以后，将其放入容积为25mL的棕色量瓶中，向其中加入适量的流动相进行溶解并且经过均匀的稀释以后达到相应的刻度，将其摇匀以后得到供试品溶液。（3）专属性与系统适应性试验。对专属性以及系统适应性进行实验的过程中，先准备好适量的空白溶剂、混合对照品溶剂若干，分别对其进行称量，保证达到20μL，然后放入液相色谱仪器中检测，检测结果表明苯甲醛与苯甲醛以及苯甲醇在理论塔板数上都超过了15000，并且相互谱峰满足基线分离的要求，从峰形的角度来看，效果理想。（4）线性关系。经过对对照品储备液的精密称量，在其中加入适当的流动相以后可以稀释称为不同的溶液，满足实验标准的相关要求，从标准溶液中称量出适量的试液，为20μL，同样将其注入进液相色谱中进行检测，通过色谱图显示出来的内容将苯甲酸还有苯甲醛浓度计算出线性回归，结果显示具有良好的线性回归关系。（5）检出限与定量限。选取2.4项下的最小浓度溶液进行进样，并且对进样的体积加以适当的调整，当SIN为3时，对苯甲酸以及苯甲醛的检出限进行分析，结果分别是0.41ng以及2.10ng，当SIN为10时，对苯甲酸以及苯甲醛的定量限进行分析，结果为1.38ng以及7.01ng。 3.讨论 综上所述，本文主要以乙腈-乙酸铵溶液为系统，发现苯甲醛以及苯甲醛出现了明显的拖尾现象，并且基线存在较大的波动，无法达到理想的分离效果，同时又对乙腈-0.02%甲酸（30∶70）进行了考察，结果显示分离效果良好，基线具有平整性的特点，所以最终选择乙腈-0.02%甲酸（30∶70）作为流动相。在此基础上使用氨水对0.02%的甲酸酸碱值进行调节，对苯甲酸、苯甲醛以及苯甲醇的影响进行分析，结果显示苯甲酸与苯甲醇在pH为4.0时，分离效果不理想，当pH在5.0时，存在明显的峰拖尾现象，并且峰形呈现不对称性，当pH为4.5时，对称因子与1最为接近，分离度能够超过1.5，并且基线相对比较平滑，因此最终选择了乙腈-0.02%甲酸（30∶70）作为流动相。在对波长进行选择的过程中，先选取适当的甲醇样品适量，将其置于25mL的量瓶之中，在量瓶中再加入适量的苯甲酸以及苯甲醛对照品，在其中加入流动相进行溶解，直到稀释到相应的刻度上，均匀的摇晃，精密的称取20μL后将其注入进液相色谱仪中准备检测，采用3D图的形式对两种成分进行观察，结果两种成分在峰形为400nm～200nm时观察分离度以及相应值等情况，结果显示在230nm时能够达到最大的吸收波长，以此作为测定波长，该测定波长符合百分比的特点，具有同等的百分比关系，在基线表现的方面具有平滑性的特点。通过本文的试验结果显示，如果将其用作普通剂型，那么应该确保苯甲醛的含量在1.5%以下，苯甲酸的含量为0.1%以下。如果应用在注射时，那么苯甲醇中苯甲酸的含量应该控制在0.05%以下，苯甲醛的含量应该控制在0.05%以下。 参考文献 [1]孙占松.国内苯甲醇生产及应用分析[J].精细与专用化妆品，2012，20（12）：12-14. |
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