| 标题 | 一种罂粟果提取物中劳丹宁成分的分离方法 |
| 范文 | 赵松福 司朗云 苗庆柱 摘 要：劳丹宁（Laudanine）是鸦片中含有的一类痕量生物碱，分子式为C20H25NO4，其在天然鸦片中的含量很低，大约0.4%左右。目前市场很难买到劳丹宁的对照品或标准品，本文改进吗啡的分离技术，通过使用工业高压制备色谱技术，将罂粟果提取物粉中的吗啡，可待因分别进行分离。将剩余副产物收集，并通过乙酸乙酯的提取，将其中部分有效成分分离，然后通过重结晶将产物进行纯化，纯化后产物可以作为劳丹宁的对照品使用。 关键词：劳丹宁；工业高压制备色谱；分离；结晶 毒品问题一直严重困扰着世界各国，其对社会造成极大的危害。鸦片是用来制备毒品的原材料，其中含有多种常量和痕量生物碱，这些生物碱是区分不同地域的鸦片样品的主要手段之一。 劳丹宁（Laudanine）是鸦片中含有的一类痕量生物碱，分子式为C20H25NO4，其在天然鸦片中的含量很低，大约0.4%左右。目前市场很难买到劳丹宁的对照品或标准品，因而很难在复杂的鸦片生物碱中确定其位置。确定劳丹宁在高效液相色谱上的保留时间，以及实现不同地域鸦片样品的区分具有十分重要的意义。 1 材料与方法 1.1 物料与设备 提取用原料：提取原料采用人工提取的CPS-Ⅰ粉（罂粟果提取物粉），由甘肃药物碱厂生产，质量标准吗啡含量不低于10%，其中劳丹宁作为附属成分，含量约是吗啡的3%左右。 提取设备：工业高压制备色谱系统（DAC300）。 1.2 方法 1.2.1样品前处理 先配置5%的乙醇溶液，向5.0Kg CPS中加入5%乙醇水溶液15L，室温下浸泡30min。在浸泡过的溶液体系中加入硅藻土0.5Kg，开启搅拌至最大，搅拌1分钟； 提取完成，将提取液转移到过滤器中进行过滤，收集滤液；将滤饼重新加入5%的乙醇溶液，重复上述操作2次。将三次过滤后液体混合，最终获得约40L左右滤液。 减压浓缩滤液至20L左右，所得浓缩液以30L/min流速通过预柱过滤，去除油脂及小颗粒杂质。收集滤液，滤液即为前处理所得上样液。多次进行以上操作，将所有批次上样液混合，进行下步操作。 1.2.2色谱条件 制备柱规格：300mm×1200mm（有效装填柱高约300mm至400mm）； 填料种类：200-300目球形硅胶，C18填料； 填料装填量：15Kg； 流动相流速：10L/min； 流速程序见下表。 1.2.3样品分离方法 制备柱安装完成，使用0.75%磷酸水冲洗制备柱10min，平衡制备柱； 10L/min的速度，向制备柱中抽入约30L上述提取液。上样完毕，用10%乙醇和0.75%磷酸水为流动相冲洗约10min，每1min分别收集一次馏分，每份馏分体积约为10L，将所得馏分按照顺序标记F1-F10；改用30%乙醇和0.75%磷酸水为流动相，继续冲洗16min，收集馏分，参照上述方法将所得馏分标记为F11-F26，再用50%乙醇和0.75%磷酸水为流动相，冲洗10min，收集馏分，所得馏分标记为F27-F36，最后用60%乙醇和0.25%磷酸水为流动相冲洗制备柱约10min，冲洗完毕，备用。 以上馏分中，F3-F7共計50L为吗啡馏分，将吗啡馏分合并，浓缩后结晶可获得吗啡，共获得吗啡690g；馏分F10-F15共计60L为可待因馏分，将馏分合并，通过浓缩、提取及重结晶得可待因39.16g；馏分F18-F23，共计60L为其余馏分，用于获得劳丹宁成分。 1.2.4劳丹宁的制备 合并上述F18-F23成分，减压浓缩至1.5L左右，将所得浓缩物加入反应釜中，加氢氧化钠调节pH=10-12；将调节好pH的液体加3L乙酸乙酯进行搅拌提取，分离乙酸乙酯层，并且减压浓缩干； 将浓缩干的油状固体加入100L甲醇搅拌回流，回流30min；将回流液体降温至60℃保温过滤，收集漏斗中的白色固体，母液收集，进行蒂巴因的提取； 将白色固体加甲醇进行重结晶，加入150L甲醇回流溶解固体，回流30分钟，回流过程固体溶清。产物逐渐降温析晶，温度逐步降低过程中晶体缓慢析出，0℃以下搅拌析晶4h以上，过滤获得白色固体，白色固体干燥，获得劳丹宁固体15.42g，纯度96.8%。 2 结果讨论 分离效果及讨论：根据分离出的劳丹宁固体及结晶确证结果，确认劳丹宁可以实现有效分离，分离过程中使用制备色谱技术，将原天然产物中的吗啡、可待因及其他碱类进行分离。在通过提取及结晶，将其中主要的成分劳丹宁分离出。而母液中还含有大量蒂巴因成分，可以继续进行提取。 目前劳丹宁重结晶主要是为了出去蒂巴因，去除蒂巴因的效果较好，目前最终得到的产品纯度为96.8%。产品可以作为杂质对照品使用，并且还可以继续优化，进行产品的纯化。 参考文献： [1]刘翠梅，花镇东，白燕平.UPLC/Q-TOF-MS和PLS-DA在鸦片生物碱检测及分类判别中的应用[J].中国司法鉴定，2014，73（2）：25-38. [2]刘翠梅，白燕平.一种合成劳丹宁的方法[P].CN103965108B. [3]Frydman B，Bendisch R and Deulofeu V.A SYNTHESIS OF LAUDANINE AND（&）-PSEUDOCODAMINE：RESOLUTION IN-TO THE OPTICAL ISOMERS.1958，（4）：342-350. |
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