黄芩苷对仔猪感染副猪嗜血杆菌后血细胞分类计数和血液生化指标的影响

    张佳诚 刘军 付书林

    

    

    摘要：为研究黄芩苷对仔猪感染副猪嗜血杆菌（Glaesserella parasuis，GPS）后血细胞分类计数和血液生化指标的影响，选取48头“杜×长×大”健康断奶仔猪，随机分为6组，分别为：空白对照组、GPS感染模型组、对照药物氟尼辛葡甲胺组和不同剂量黄芩苷处理组（肌内注射，剂量分別为25、50和100 mg/kg）。饲养3 d后进行攻毒及药物处理，攻毒后48 h和96 h分别采集血样进行血细胞分类计数和血液生化指标检测。结果显示，攻毒后48 h，氟尼辛葡甲胺能缓解副猪嗜血杆菌引起的血小板、单核细胞数量的降低（P<0.01），缓解嗜碱性粒细胞数量的降低及谷丙转氨酶含量的升高（P<0.05）;25、50及100 mg/kg黄芩苷能缓解血小板、单核细胞数量的降低（P<0.01）;25、100 mg/kg黄芩苷能缓解谷丙转氨酶含量的升高（P<0.05）;50 mg/kg黄芩苷能缓解红细胞数量的降低（P<0.05）。攻毒后96 h，氟尼辛葡甲胺能缓解副猪嗜血杆菌引起的白细胞、中性粒细胞数量的升高及淋巴细胞数量的降低（P<0.01）;25、50及100 mg/kg黄芩苷能缓解白细胞、中性粒细胞数量的升高;50 mg/kg黄芩苷能缓解血小板数量的降低（P<0.05）;100 mg/kg黄芩苷能缓解葡萄糖、磷含量的降低（P<0.05）。以上结果表明，黄芩苷能在一定程度上缓解仔猪因感染GPS引起的血细胞分类计数和血液生化指标的异常变化。

    关键词：黄芩苷;副猪嗜血杆菌（Glaesserella parasuis，GPS）;仔猪;血细胞分类计数;血液生化指标

    副猪嗜血杆菌病也称格拉泽氏病（Glasser's disease），是近年来严重危害全球养猪业的主要细菌性疾病之一 [1，2]。副猪嗜血杆菌（Glaesserella parasuis，GPS）为该病的病原体，常引发猪的纤维素性多发性浆膜炎、脑膜炎和关节炎，严重感染时出现败血症而导致猪死亡。黄芩苷（Baicalin）是一种黄酮类化合物，从植物黄芩根部分离提纯得到，具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化和抑制肿瘤细胞生长等药理活性[3]。据文献报道，黄芩能通过抑制α-溶血素的溶细胞作用保护感染金黄色葡萄球菌引起肺炎的小鼠[4];黄芩苷与耐甲氧苯青霉素的β-内酰胺类抗生素具有协同抗菌作用[5];黄芩苷能通过调控猪血管内皮细胞感染GPS而激活的TLR4/NF-κB和NLRP3/Caspase-1信号通路，缓解仔猪炎症反应与血管损伤 [6]。氟尼辛葡甲胺是一种兽用非甾体类的抗炎镇痛药物，通过抑制环氧化酶的活性，减少炎性因子的合成，起到抗炎、解热和镇痛的作用[7]。本试验通过建立仔猪GPS感染模型，研究黄芩苷对仔猪感染GPS后血细胞分类计数和血液生化指标的影响，旨在为黄芩苷用于治疗副猪嗜血杆菌引起的炎症反应提供科学依据。

    1 材料与方法

    1.1 试验材料

    黄芩苷，四川泰康药业有限公司，含量 ≥ 90%;黄芩苷钠，本实验室合成，以黄芩苷计含量为92%，注射时按25、50和100 mg/kg称取黄芩苷钠，溶于5 mL生理盐水中肌内注射;氟尼辛葡甲胺，广东温氏大华农生物科技有限公司，含量为50 mg/mL，按2 mg/kg肌内注射;GPS为地方型强毒株SH0165，血清5型，由华中农业大学农业微生物学国家重点实验室惠赠。

    1.2 试验设计

    选取体重8～10 kg、副猪嗜血杆菌抗体阴性的“杜×长×大”健康断奶仔猪48头，随机分为6组，即空白对照组、GPS感染模型组、对照药物氟尼辛葡甲胺（剂量为2 mg/kg）和不同剂量黄芩苷处理组（剂量分别为25、50和100 mg/kg），每组8头。GPS感染模型组及各药物处理组按每头猪2×109 CFU菌量腹腔注射1 mL菌液。对照药物和不同浓度黄芩苷在攻毒前0.5 h给药，每日给药2次。2019年3月9日8：30开始攻毒;3月11日8：30第1次采集血样;3月13日8：30第2次采集血样。

    1.3 饲养管理

    试验仔猪购自武汉市江夏区万年青畜牧有限公司，于国药动保金口分公司动物房负压攻毒舍进行攻毒试验。试验期内仔猪自由采食饮水，调节攻毒舍温度在25～30 ℃，饲养3 d待仔猪适应环境后再进行分组和后续药物处理及攻毒。

    1.4 样品采集

    使用EDTA抗凝负压采血管及普通负压采血管，攻毒后48、96 h于仔猪前腔静脉采集血样。EDTA抗凝负压管采集血样用于血细胞分类计数检测;普通负压采血管采集血样后分离血清用于血液生化指标检测。

    1.5 测定指标与方法

    血细胞分类计数采用 Siemens ADVIA? 2120i 全自动血液分析仪测定，血液生化指标采用HITEC 7100全自动生化分析仪测定。

    1.6 统计分析

    数据分析采用 SPSS 22.0 软件进行单因素方差分析和LSD多重比较。统计结果用平均值和SEM（标准误）表示。P<0.01为差异极显著，P<0.05为差异显著。

    2 结果与分析

    2.1 黄芩苷对仔猪感染GPS后血细胞分类计数变化的影响

    由表1可见，感染 GPS 48 h 后，与空白对照组相比，GPS 模型组红细胞、淋巴细胞数量显著降低（P<0.05），血小板、单核细胞、嗜碱性粒细胞数量极显著降低（P<0.01）。与GPS模型组相比，氟尼辛葡甲胺能极显著增加血小板、单核细胞数量（P<0.01），显著增加嗜碱性粒细胞数量（P<0.05）;25 mg/kg剂量黄芩苷能极显著增加血小板、单核细胞数量（P<0.01）;50 mg/kg剂量黄芩苷能极显著增加血小板、单核细胞数量（P<0.01），显著增加红细胞数量（P<0.05）;100 mg/kg剂量黄芩苷能极显著增加血小板、单核细胞数量（P<0.01）。

    感染GPS 96 h后，与空白对照组相比，GPS模型组血小板、淋巴细胞数量极显著降低（P<0.01），白细胞和中性粒细胞数量极显著增加（P<0.01）。与GPS模型组相比，氟尼辛葡甲胺能极显著降低白细胞、中性粒细胞数量（P<0.01）;25 mg/kg剂量黄芩苷能极显著降低白细胞数量（P<0.01），显著降低中性粒细胞数量（P<0.05）;50 mg/kg剂量黄芩苷能显著增加血小板、淋巴细胞数量（P<0.05），极显著降低白细胞数量（P<0.01）、显著降低中性粒细胞数量（P<0.05）;100 mg/kg剂量黄芩苷能极显著降低白细胞数量（P<0.01）、显著降低中性粒细胞数量（P<0.05）。

    2.2 黄芩苷对仔猪感染GPS后血液生化指标变化的影响

    由表2可见，感染GPS 48 h后，与空白对照组相比，GPS模型组仔猪血液中碱性磷酸酶、总胆固醇含量显著降低（P<0.05），葡萄糖、磷含量极显著降低（P<0.01），谷草转氨酶、谷丙转氨酶含量极显著升高（P<0.01）。与GPS模型组相比，氟尼辛葡甲胺能极显著降低谷草转氨酶含量（P<0.01）且显著降低谷丙转氨酶含量（P<0.05）;25 mg/kg黄芩苷能极显著降低谷丙转氨酶含量并极显著增加磷含量（P<0.01）;100 mg/kg黄芩苷能显著降低谷丙转氨酶的含量（P<0.05）。

    感染GPS 96 h后，与空白对照组相比，GPS模型组仔猪血液中谷丙转氨酶含量显著增加（P<0.05），碱性磷酸酶、葡萄糖、磷含量极显著降低（P<0.01），总胆固醇含量显著降低（P<0.05）。与GPS模型组相比，氟尼辛葡甲胺能极显著增加总胆固醇含量（P<0.01），显著增加总蛋白含量（P<0.05）;25 mg/kg黄芩苷能显著增加总蛋白含量（P<0.05）;100 mg/kg黄芩苷能极显著增加葡萄糖含量（P<0.01）、显著增加磷的含量（P<0.05）。

    3 讨论

    仔猪感染GPS后，各时间点红细胞及血小板数量均有明显下降，与前期仔猪临床症状出现呼吸困难以及剖检中出现肝脏与脾脏出血的症状相符。仔猪感染GPS 48 h时，对照药物及各剂量黄芩苷均能极显著缓解血小板数量的降低，96 h 时50 mg/kg剂量的黄芩苷能显著缓解仔猪感染GPS引起的血小板数量的降低。结果表明，黄芩苷在保护血管损伤与止血凝血方面有一定作用。

    仔猪感染GPS 48 h时单核细胞和嗜碱性粒细胞数量极显著下降，提示血液中白细胞可能迁移到炎症部位[8]，导致外周血液中的白细胞数量降低，对照药物及各剂量黄芩苷均能极显著缓解血液中单核细胞数量降低。仔猪感染GPS 96 h时，白细胞数量极显著增加，其中中性粒细胞数量的增加尤为明显，提示机体因GPS入侵引发的炎症反应加剧。对照药物及各剂量黄芩苷药物组中性粒细胞数量均显著下降，表明其可以有效缓解仔猪炎症。汪洋等[9]研究发现脂多糖（LPS）在短期内可引起仔猪血液白细胞显著降低，24 h后白细胞数量又极剧增加，与本试验仔猪感染GPS后的情况相似。

    谷丙转氨酶和血糖值是动物肝功能的重要指标[10]。本试验中，仔猪感染GPS 48 h 后，血液中谷丙转氨酶的含量显著升高，血糖显著降低，推断GPS引发仔猪肝功能损伤。仔猪感染GPS 48 h时，25 mg/kg剂量的黄芩苷能极显著降低谷丙转氨酶含量，100 mg/kg剂量的黄芩苷和对照药物能显著降低谷丙转氨酶含量;感染后48 h和96 h 时100 mg/kg黄芩苷均能极显著增加血糖含量。结果表明，黄芩苷对GPS引发的仔猪肝功能损伤有一定的缓解作用，对仔猪肝脏有一定的保护作用。

    4 结论

    仔猪感染GPS后，血细胞分类计数和血液生化指标会发出现异常变化，通过肌内注射25～100 mg/kg的黄芩苷，能有效缓解和改善这一现象。

    参考文献：

    [1] WANG Y， LIU C， FANG Y， et al. Transcription analysis on response of porcine alveolar macrophages to Haemophilus parasuis[J]. BMC Genomics， 2012， 13： 68.

    [2] LIU C， WANG Y， ZHANG H， et al. Porcine coronin 1A contributes to nuclear factor-kappa B （NF-κB） inactivation during Haemophilus parasuis infection[J]. PLoS One，2014，9（8）： e103904.

    [3] ZHANG Y， LI X， CIRIC B， et al. Therapeutic effect of baicalin on experimental autoimmune encephalomyelitis is mediated by SOCS3 regulatory pathway[J]. Sci Rep， 2015，5：17407.

    [4] QIU J， NIU X， DONG J， et al. Baicalin protects mice from Staphy-lococcus aureus pneumonia via inhibition of the cytolytic activity of α-hemolysin[J]. J Infect Dis， 2012， 206（2）： 292-301.

    [5] LIU I X， DURHAM D G， RICHARDS R M. Baicalin synergy with beta-lactam antibiotics against methicillin-resistant Staphylococcus aureus and other beta-lactam-resistant strains of S. aureus[J].J Pharm pharmacol， 2000， 52（3）： 361-366.

    [6] FU S， LIU H， XU L， et al. Baicalin modulates NF-κB and NLRP3 inflammasome signaling in porcine aortic vascular endothelial cells infected by Haemophilus parasuis causing Gl?sser's disease[J]. Sci Rep， 2018， 8（1）： 807.

    [7] 孙 健，段素云，马建民，等.氟尼辛葡甲胺的药理作用研究进展[J].山東畜牧兽医，2018，39（1）：65-66.

    [8] GABLER N K， SPURLOCK M E. Integrating the immune system with the regulation of growth and efficiency[J]. J Anim Sci，2008，86（Suppl14）：64-74.

    [9] 汪 洋，王秀英，汪龙梅，等.Necrostatin-1对脂多糖刺激的断奶仔猪血细胞分类计数和血液生化指标的影响[J].中国畜牧杂志，2018，54（8）：80-86.

    [10] ZHU M， LIN K F， YEUNG RY， et al. Evaluation of the protective effects of Schisandra chinensis on Phase I drug metabolism using a CCl4 intoxication model[J]. J Ethnopharmacol， 1999，67（1）：61-68.