基于酶标噬菌体抗体的磁分离免疫分析方法
穆晞惠等
摘 要 [HTSS]以磁微粒偶联多抗为磁性捕获探针，酶标噬菌体抗体为特异信号检测探针，采用“磁性捕获探针待测物酶标噬菌体抗体探针”的检测模式，成功建立了一种基于酶标噬菌体抗体的磁分离免疫分析方法。
1 引 言
噬菌体抗体是利用噬菌体展示技术，将编码抗体分子片段的基因与噬菌体衣壳蛋白基因末端融合，使表达抗体展示在噬菌体颗粒表面，再经抗原抗体特异性结合筛选得到目的噬菌体抗体。该抗体具有产量高、分子量小、稳定性好、亲和力高及特异性强等优点
4 结 论
本研究以磁微粒偶联多抗作为磁性捕获探针，酶标噬菌体抗体作为特异信号检测探针，采用“磁性捕获探针待测物酶标噬菌体抗体探针”的检测模式，建立了基于酶标噬菌体抗体的磁分离免疫分析方法，以βBGT为检测目标物，实现了微量βBGT检测。利用噬菌体表面含有多拷贝的衣壳蛋白与其相应的酶标抗体特异结合特性，酶标噬菌体抗体作为信号检测探针与传统抗体酶标二抗结合形成的酶标抗体复合物探针相比，一个噬菌体抗体能结合更多的酶分子，从而产生针对检测靶分子的特异信号放大效应。
References
1 Smith G P. Science， 1985， 228（4705）： 1315-1317
2 McCafferty J， Griffiths A D， Winter G， Chisweu D J. Nature， 1990， 348（6301）： 552-554
3 Pini A， Ricci C， Bracci L. Comb Chem High Throughput Screen， 2002， 5（7）： 503-510
4 WANG Yun， LIU Yuan， WANG Xiang. Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology， 2009， 25（12）： 1146-1148
王 耘， 刘 媛， 王 祥. 细胞与分子免疫学杂志， 2009， 25（12）： 1146-1148
5 SHAO JianJun， MIAO XiangYang， ZHU RuiLiang， DING ShuYan， CHEN YongFu. Acta Veterinaria et Zootrchnica Sinica， 2005， 36（1）： 98-99
邵建军， 苗向阳， 朱瑞良， 丁淑燕， 陈永福. 畜牧兽医学报， 2005， 36（1）： 98-99
6 Liu R P， Liu J T， Xie L， Wang M X， Luo J P， Cai X X. Talanta， 2010， 81（3）： 1016-1021
7 NIU Mu， DU MeiHong， DENG Yi，GAO MingYuan. Chem. J. Chinese Universities， 2011， 32（2）： 322-326
牛 牧， 杜美红， 邓 奕， 高明远. 高等学校化学学报，2011， 32（2）： 322-326
8 Hayat A， Barthelmebs L， Marty J L. Anal. Chim. Acta， 2011， 690（2）： 248-252
9 LIU Bing， TONG ZhaoYang， HAO LanQun， LIU Wei， MU XiHui， LIU ZhiWei， HUANG QiBin. Chinese J. Anal.Chem.， 2013， 41（12）： 1807-1811
刘 冰，童朝阳，郝兰群，刘 威，穆晞惠，刘志伟，黄启斌. 分析化学，2013， 41（12）： 1807-1811
10 Proczek G ， Gassner A L ， Busnel J M. Anal. Bioanal. Chem， 2012， 402（8）： 2645-2653
11 Thornton C R. Soil Biol. Biochem.， 1996， 28（4/5）： 521-532
12 Ndhlovu P， Cadman H， Gundersen S G， Vennervald B， Friis H， Christensen N， Mutasa G， Haagensen I， Chandiwana S K， Deelder A M. Acta Tropica， 1995， 59（3）： 223-235
13 Liu Z S， Zhang L， Yang H， Zhu Y H， Jin W， Song Q， Yang X L. Anal. Biochem.， 2010， 404（2）： 127-134
14 LI ChengWen. Contemporary Immunochemistry Technology. Shanghai： Shanghai Science and Technology Press， 1990： 79-101
李成文. 现代免疫化学技术. 上海： 上海科学技术出版社， 1990： 79-101
15 XU Yi. Technology of Immunodetection. Beijing： Science Press， 1997： 271-289
徐 宜. 免疫检测技术. 北京： 科学出版社， 1997： 271-289
16 XU ZhiKai. Technology of Monoclonal Antibodies Practicability. Xian： Shanxi Science and Technology Press， 1992： 42-50
徐志凯. 实用单克隆抗体技术. 西安： 陕西科学技术出版社， 1992： 42-50
17 Le V D， Selvanayagam Z E， Gopalakrishnakone P， Eng K H. Journal of Immunological Methods， 2002， 260（12）： 125-136
Magnetic Affinity Immunoassay Based EnzymeLabeled
Phage Displayed Antibody
MU XiHui， TONG ZhaoYang*， HUANG QiBin， LIU Bing， LIU ZhiWei， HAO LanQun， ZHANG JinPing
（Research Institute of Chemical Defence， State Key Laboratory of NBC Protection for Civilian， Beijing 102205， China）
Abstract A new magnetic affinity immunoassay （MAIA） strategy based on enzymelabeled phage displayed antibody was developed. The assay consisted of a sandwich format in which immobilized polyclonal antibody （pcAb） on magnetic microparticle was used for capture probe， and enzymelabeled phage displayed antibody for specific detection probe to increase enzyme amount and enhance detection signal. By the proposed method， βbungarotoxin （βBGT） was successfully detected. A linear relationship between absorbance value and the concentration of βBGT in the range of 0.016-62.5 μg/L was obtained. The linear regression equation was Y=0.641X+1.355 （R=0.9925， n=13， p<0.0001）with a detection limit of 0.016 μg/L. In comparison with the traditional ELISA， this method gave a 10fold better sensitivity in βBGT detection. This strategy also gave a 4fold better sensitivity comparing with the MAIA based on enzyme labeled monoclonal antibody （mcAb）. Due to low detection limit， acceptable reproducibility and high specificity， this method holds great promise in toxin trace detection.
Keywords Enzymelabeled phage displayed antibody； Magnetic affinity immunoassay； βBungarotoxin
（Received 4 November 2013； accepted 21 February 2014）
徐志凯. 实用单克隆抗体技术. 西安： 陕西科学技术出版社， 1992： 42-50
17 Le V D， Selvanayagam Z E， Gopalakrishnakone P， Eng K H. Journal of Immunological Methods， 2002， 260（12）： 125-136
Magnetic Affinity Immunoassay Based EnzymeLabeled
Phage Displayed Antibody
MU XiHui， TONG ZhaoYang*， HUANG QiBin， LIU Bing， LIU ZhiWei， HAO LanQun， ZHANG JinPing
（Research Institute of Chemical Defence， State Key Laboratory of NBC Protection for Civilian， Beijing 102205， China）
Abstract A new magnetic affinity immunoassay （MAIA） strategy based on enzymelabeled phage displayed antibody was developed. The assay consisted of a sandwich format in which immobilized polyclonal antibody （pcAb） on magnetic microparticle was used for capture probe， and enzymelabeled phage displayed antibody for specific detection probe to increase enzyme amount and enhance detection signal. By the proposed method， βbungarotoxin （βBGT） was successfully detected. A linear relationship between absorbance value and the concentration of βBGT in the range of 0.016-62.5 μg/L was obtained. The linear regression equation was Y=0.641X+1.355 （R=0.9925， n=13， p<0.0001）with a detection limit of 0.016 μg/L. In comparison with the traditional ELISA， this method gave a 10fold better sensitivity in βBGT detection. This strategy also gave a 4fold better sensitivity comparing with the MAIA based on enzyme labeled monoclonal antibody （mcAb）. Due to low detection limit， acceptable reproducibility and high specificity， this method holds great promise in toxin trace detection.
Keywords Enzymelabeled phage displayed antibody； Magnetic affinity immunoassay； βBungarotoxin
（Received 4 November 2013； accepted 21 February 2014）
徐志凯. 实用单克隆抗体技术. 西安： 陕西科学技术出版社， 1992： 42-50
17 Le V D， Selvanayagam Z E， Gopalakrishnakone P， Eng K H. Journal of Immunological Methods， 2002， 260（12）： 125-136
Magnetic Affinity Immunoassay Based EnzymeLabeled
Phage Displayed Antibody
MU XiHui， TONG ZhaoYang*， HUANG QiBin， LIU Bing， LIU ZhiWei， HAO LanQun， ZHANG JinPing
（Research Institute of Chemical Defence， State Key Laboratory of NBC Protection for Civilian， Beijing 102205， China）
Abstract A new magnetic affinity immunoassay （MAIA） strategy based on enzymelabeled phage displayed antibody was developed. The assay consisted of a sandwich format in which immobilized polyclonal antibody （pcAb） on magnetic microparticle was used for capture probe， and enzymelabeled phage displayed antibody for specific detection probe to increase enzyme amount and enhance detection signal. By the proposed method， βbungarotoxin （βBGT） was successfully detected. A linear relationship between absorbance value and the concentration of βBGT in the range of 0.016-62.5 μg/L was obtained. The linear regression equation was Y=0.641X+1.355 （R=0.9925， n=13， p<0.0001）with a detection limit of 0.016 μg/L. In comparison with the traditional ELISA， this method gave a 10fold better sensitivity in βBGT detection. This strategy also gave a 4fold better sensitivity comparing with the MAIA based on enzyme labeled monoclonal antibody （mcAb）. Due to low detection limit， acceptable reproducibility and high specificity， this method holds great promise in toxin trace detection.
Keywords Enzymelabeled phage displayed antibody； Magnetic affinity immunoassay； βBungarotoxin
（Received 4 November 2013； accepted 21 February 2014）
摘 要 [HTSS]以磁微粒偶联多抗为磁性捕获探针，酶标噬菌体抗体为特异信号检测探针，采用“磁性捕获探针待测物酶标噬菌体抗体探针”的检测模式，成功建立了一种基于酶标噬菌体抗体的磁分离免疫分析方法。
1 引 言
噬菌体抗体是利用噬菌体展示技术，将编码抗体分子片段的基因与噬菌体衣壳蛋白基因末端融合，使表达抗体展示在噬菌体颗粒表面，再经抗原抗体特异性结合筛选得到目的噬菌体抗体。该抗体具有产量高、分子量小、稳定性好、亲和力高及特异性强等优点
4 结 论
本研究以磁微粒偶联多抗作为磁性捕获探针，酶标噬菌体抗体作为特异信号检测探针，采用“磁性捕获探针待测物酶标噬菌体抗体探针”的检测模式，建立了基于酶标噬菌体抗体的磁分离免疫分析方法，以βBGT为检测目标物，实现了微量βBGT检测。利用噬菌体表面含有多拷贝的衣壳蛋白与其相应的酶标抗体特异结合特性，酶标噬菌体抗体作为信号检测探针与传统抗体酶标二抗结合形成的酶标抗体复合物探针相比，一个噬菌体抗体能结合更多的酶分子，从而产生针对检测靶分子的特异信号放大效应。
References
1 Smith G P. Science， 1985， 228（4705）： 1315-1317
2 McCafferty J， Griffiths A D， Winter G， Chisweu D J. Nature， 1990， 348（6301）： 552-554
3 Pini A， Ricci C， Bracci L. Comb Chem High Throughput Screen， 2002， 5（7）： 503-510
4 WANG Yun， LIU Yuan， WANG Xiang. Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology， 2009， 25（12）： 1146-1148
王 耘， 刘 媛， 王 祥. 细胞与分子免疫学杂志， 2009， 25（12）： 1146-1148
5 SHAO JianJun， MIAO XiangYang， ZHU RuiLiang， DING ShuYan， CHEN YongFu. Acta Veterinaria et Zootrchnica Sinica， 2005， 36（1）： 98-99
邵建军， 苗向阳， 朱瑞良， 丁淑燕， 陈永福. 畜牧兽医学报， 2005， 36（1）： 98-99
6 Liu R P， Liu J T， Xie L， Wang M X， Luo J P， Cai X X. Talanta， 2010， 81（3）： 1016-1021
7 NIU Mu， DU MeiHong， DENG Yi，GAO MingYuan. Chem. J. Chinese Universities， 2011， 32（2）： 322-326
牛 牧， 杜美红， 邓 奕， 高明远. 高等学校化学学报，2011， 32（2）： 322-326
8 Hayat A， Barthelmebs L， Marty J L. Anal. Chim. Acta， 2011， 690（2）： 248-252
9 LIU Bing， TONG ZhaoYang， HAO LanQun， LIU Wei， MU XiHui， LIU ZhiWei， HUANG QiBin. Chinese J. Anal.Chem.， 2013， 41（12）： 1807-1811
刘 冰，童朝阳，郝兰群，刘 威，穆晞惠，刘志伟，黄启斌. 分析化学，2013， 41（12）： 1807-1811
10 Proczek G ， Gassner A L ， Busnel J M. Anal. Bioanal. Chem， 2012， 402（8）： 2645-2653
11 Thornton C R. Soil Biol. Biochem.， 1996， 28（4/5）： 521-532
12 Ndhlovu P， Cadman H， Gundersen S G， Vennervald B， Friis H， Christensen N， Mutasa G， Haagensen I， Chandiwana S K， Deelder A M. Acta Tropica， 1995， 59（3）： 223-235
13 Liu Z S， Zhang L， Yang H， Zhu Y H， Jin W， Song Q， Yang X L. Anal. Biochem.， 2010， 404（2）： 127-134
14 LI ChengWen. Contemporary Immunochemistry Technology. Shanghai： Shanghai Science and Technology Press， 1990： 79-101
李成文. 现代免疫化学技术. 上海： 上海科学技术出版社， 1990： 79-101
15 XU Yi. Technology of Immunodetection. Beijing： Science Press， 1997： 271-289
徐 宜. 免疫检测技术. 北京： 科学出版社， 1997： 271-289
16 XU ZhiKai. Technology of Monoclonal Antibodies Practicability. Xian： Shanxi Science and Technology Press， 1992： 42-50
徐志凯. 实用单克隆抗体技术. 西安： 陕西科学技术出版社， 1992： 42-50
17 Le V D， Selvanayagam Z E， Gopalakrishnakone P， Eng K H. Journal of Immunological Methods， 2002， 260（12）： 125-136
Magnetic Affinity Immunoassay Based EnzymeLabeled
Phage Displayed Antibody
MU XiHui， TONG ZhaoYang*， HUANG QiBin， LIU Bing， LIU ZhiWei， HAO LanQun， ZHANG JinPing
（Research Institute of Chemical Defence， State Key Laboratory of NBC Protection for Civilian， Beijing 102205， China）
Abstract A new magnetic affinity immunoassay （MAIA） strategy based on enzymelabeled phage displayed antibody was developed. The assay consisted of a sandwich format in which immobilized polyclonal antibody （pcAb） on magnetic microparticle was used for capture probe， and enzymelabeled phage displayed antibody for specific detection probe to increase enzyme amount and enhance detection signal. By the proposed method， βbungarotoxin （βBGT） was successfully detected. A linear relationship between absorbance value and the concentration of βBGT in the range of 0.016-62.5 μg/L was obtained. The linear regression equation was Y=0.641X+1.355 （R=0.9925， n=13， p<0.0001）with a detection limit of 0.016 μg/L. In comparison with the traditional ELISA， this method gave a 10fold better sensitivity in βBGT detection. This strategy also gave a 4fold better sensitivity comparing with the MAIA based on enzyme labeled monoclonal antibody （mcAb）. Due to low detection limit， acceptable reproducibility and high specificity， this method holds great promise in toxin trace detection.
Keywords Enzymelabeled phage displayed antibody； Magnetic affinity immunoassay； βBungarotoxin
（Received 4 November 2013； accepted 21 February 2014）
徐志凯. 实用单克隆抗体技术. 西安： 陕西科学技术出版社， 1992： 42-50
17 Le V D， Selvanayagam Z E， Gopalakrishnakone P， Eng K H. Journal of Immunological Methods， 2002， 260（12）： 125-136
Magnetic Affinity Immunoassay Based EnzymeLabeled
Phage Displayed Antibody
MU XiHui， TONG ZhaoYang*， HUANG QiBin， LIU Bing， LIU ZhiWei， HAO LanQun， ZHANG JinPing
（Research Institute of Chemical Defence， State Key Laboratory of NBC Protection for Civilian， Beijing 102205， China）
Abstract A new magnetic affinity immunoassay （MAIA） strategy based on enzymelabeled phage displayed antibody was developed. The assay consisted of a sandwich format in which immobilized polyclonal antibody （pcAb） on magnetic microparticle was used for capture probe， and enzymelabeled phage displayed antibody for specific detection probe to increase enzyme amount and enhance detection signal. By the proposed method， βbungarotoxin （βBGT） was successfully detected. A linear relationship between absorbance value and the concentration of βBGT in the range of 0.016-62.5 μg/L was obtained. The linear regression equation was Y=0.641X+1.355 （R=0.9925， n=13， p<0.0001）with a detection limit of 0.016 μg/L. In comparison with the traditional ELISA， this method gave a 10fold better sensitivity in βBGT detection. This strategy also gave a 4fold better sensitivity comparing with the MAIA based on enzyme labeled monoclonal antibody （mcAb）. Due to low detection limit， acceptable reproducibility and high specificity， this method holds great promise in toxin trace detection.
Keywords Enzymelabeled phage displayed antibody； Magnetic affinity immunoassay； βBungarotoxin
（Received 4 November 2013； accepted 21 February 2014）
徐志凯. 实用单克隆抗体技术. 西安： 陕西科学技术出版社， 1992： 42-50
17 Le V D， Selvanayagam Z E， Gopalakrishnakone P， Eng K H. Journal of Immunological Methods， 2002， 260（12）： 125-136
Magnetic Affinity Immunoassay Based EnzymeLabeled
Phage Displayed Antibody
MU XiHui， TONG ZhaoYang*， HUANG QiBin， LIU Bing， LIU ZhiWei， HAO LanQun， ZHANG JinPing
（Research Institute of Chemical Defence， State Key Laboratory of NBC Protection for Civilian， Beijing 102205， China）
Abstract A new magnetic affinity immunoassay （MAIA） strategy based on enzymelabeled phage displayed antibody was developed. The assay consisted of a sandwich format in which immobilized polyclonal antibody （pcAb） on magnetic microparticle was used for capture probe， and enzymelabeled phage displayed antibody for specific detection probe to increase enzyme amount and enhance detection signal. By the proposed method， βbungarotoxin （βBGT） was successfully detected. A linear relationship between absorbance value and the concentration of βBGT in the range of 0.016-62.5 μg/L was obtained. The linear regression equation was Y=0.641X+1.355 （R=0.9925， n=13， p<0.0001）with a detection limit of 0.016 μg/L. In comparison with the traditional ELISA， this method gave a 10fold better sensitivity in βBGT detection. This strategy also gave a 4fold better sensitivity comparing with the MAIA based on enzyme labeled monoclonal antibody （mcAb）. Due to low detection limit， acceptable reproducibility and high specificity， this method holds great promise in toxin trace detection.
Keywords Enzymelabeled phage displayed antibody； Magnetic affinity immunoassay； βBungarotoxin
（Received 4 November 2013； accepted 21 February 2014）
