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标题 不同产地车前草中总苯乙醇苷和毛蕊花糖苷含量测定
范文 易满 封传华 汤小林 徐兰 陶晓璇 张浪 李刚


摘要：目的 建立车前草中总苯乙醇苷和毛蕊花糖苷的含量测定方法。方法 采用紫外-可见分光光度法测定车前草中总苯乙醇苷含量。HPLC测定毛蕊花糖苷含量，色谱柱为ODS2 C18（4.6 mm×150 mm，5 ?m），流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液（13∶87），流速为1 mL/min，检测波长为332 nm，柱温为30 ℃，進样量为10 ?L。结果 不同产地车前草中总苯乙醇苷含量范围为1.03%～3.47%；毛蕊花糖苷在0.006 2～1.55 mg范围内与峰面积呈良好的线性关系，加样回收率为98.9%（RSD=1.6%），不同产地车前草中毛蕊花糖苷的含量范围为0.18%～0.56%。结论 本研究建立的方法操作简单、稳定性好、重复性较好，可用于不同产地车前草中苯乙醇苷类成分及毛蕊花糖苷的含量测定，为车前草的质量控制提供了依据。
关键词：车前草；苯乙醇苷；毛蕊花糖苷
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.09.
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2017）09-
Content Determination of Phenylethanoid Glycosides and Acteoside in Plantago Herba from Different Producing Areas YI Man1， FENG Chuan-hua1， TANG Xiao-lin2， XU Lan1， TAO Xiao-xuan1， ZHANG Lang1， LI Gang1 （1. No.94 Hospital of PLA， Nanchang 330002， China； 2. Children Hospital of Jiangxi Province， Nanchang 330006， China）
Abstract： Objective To establish a method for determination of phenylethanoid glycoside and acteoside in Plantago Herba. Methods UV-visible spectrophotometric method was used for the determination of the content of phenylethanoid glycosides compounds in Plantago Herba. HPLC method was used for the determination of acteoside in Plantago Herba. Chromatographic column with C18 ODS2 （4.6 mm × 150 mm， 5 ?m） was used. Acetonitrile-0.1% formic acid （13：87） was as mobile phase； the flow rate was 1 mL/min； the detection wavelength was 332 nm； the column temperature was 30 ℃； the sample volume was 10 ?L. Results The contents of phenylethanoid glycoside in Plantago Herba from different producing areas were among 1.03%–3.47%. Acteoside with peak area over the 0.0062–1.55 mg range showed a good linear relationship； the sample recovery rate was 98.9%， and the RSD was 1.6%. The contents of acteoside in Plantago Herba from different producing areas was among 0.18%–0.56%. Conclusion The method is simple， stable and reproducible， which can be used for the determination of phenylethanoid glycoside and acteoside in Plantago Herba from different producing areas and provide experimental basis for quality control of Plantago Herba.
Key words： Plantago Herba； phenylethanoid glycosides； acteoside
车前草为车前科植物车前Plantago asiatica L.或平车前Plantago depressa Willd.的干燥全草，具有清热利尿通淋、凉血、解毒等功效，主要用于热淋涩痛、水肿尿少、暑湿泄泻、痰热咳嗽、吐血衄血、痈肿疮毒[1]。车前草中含有多种化学成分，如黄酮类、苯乙醇苷类、环烯醚萜类、三萜类等[2-3]。苯乙醇苷类是车前草中极具代表性的化学成分，具有抗菌、抗炎、
基金项目：2015年度军区医学科技创新课题项目（15MS083）
通讯作者：封传华，E-mail：fengch1986@126.com
抗氧化等药理活性。毛蕊花糖苷是车前草中含量较高的苯乙醇苷类成分之一，具有降低尿酸、抗高血压、增强免疫力等作用[4-5]。不同产地车前草中苯乙醇苷类及毛蕊花糖苷的含量存在较大的差异。本研究建立紫外-可见分光光度法测定车前草中苯乙醇苷类成分含量及HPLC测定车前草中毛蕊花糖苷含量的方法，为车前草的质量评价及深度开发提供依据。
1 仪器与试药
岛津高效液相色谱仪（包括CTO柱温箱、SIL-10AF自动进样器、LC-15C泵、SPD-15C紫外检测器），UV-765紫外可见分光光度计（上海军科），AUW120D型分析天平（岛津公司），電热恒温鼓风干燥箱（上海跃进医疗器械厂），KQ3200E超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），DFT-50手提式高速万能粉碎机（温岭市林大机械有限公司）。
毛蕊花糖苷（成都普菲德生物技术有限公司，批号150401，纯度>98%）；不同产地车前草，均购自江西樟树中药材市场，经江西中医药大学禇小兰教授鉴定为车前Plantago asiatica L.的干燥全草；乙腈（色谱纯，天津市大茂化学试剂厂，批号201510011）；甲酸（分析纯，西陇化工股份有限公司，1012051）；甲醇（分析纯，天津市恒兴化学试剂制造有限公司，20130320）；水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 总苯乙醇苷含量测定
2.1.1 对照品溶液制备 取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，置于25 mL量瓶中，加甲醇适量溶解并定容至刻度，摇匀，得浓度为0.31 mg/mL的毛蕊花糖苷对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液制备 取车前草粉末（过2号筛）约1 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入60%甲醇50 mL，称定质量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定质量，用60%甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，即得。
2.1.3 检测波长的选择 取毛蕊花糖苷对照品溶液及供试品溶液，于190～800 nm波长范围内测定各溶液的紫外吸收，结果显示两者的紫外吸收图谱相似，且在波长为332 nm处均有最大吸收，故选择332 nm作为车前草中总苯乙醇苷含量测定的波长。
2.1.4 标准曲线绘制 精密吸取毛蕊花糖苷对照品溶液0.1、0.2、0.5、1、2、5 mL，分别置于10 mL量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，同时以相应的溶剂作空白，于332 nm波长处测定各对照品溶液的吸光度。以吸光度为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=41.982X-0.221 3，r=0.999 5（n=3）。结果表明，毛蕊花糖苷质量浓度在0.003 1～0.155 mg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系。
2.1.5 样品含量测定 取车前草样品，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，依法测定。每份样品平行测定3次，计算总苯乙醇苷含量。
2.2 毛蕊花糖苷含量测定
2.2.1 色谱条件 采用迪马ODS2 C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 ?m），流动相为乙腈-0.1%甲酸（15∶85），流速1 mL/min，检测波长332 nm，柱温30 ℃，进样量10 ?L。理论板数按毛蕊花糖苷计算应不低于3000。色谱图见图1。
A
B
注：A.对照品；B.供试品（江西高安）；1.毛蕊花糖苷
图1 车前草中毛蕊花糖苷HPLC图
2.2.2 标准曲线绘制 分别精密吸取毛蕊花糖苷对照品溶液0.02、0.05、0.2、0.5、1、2、5 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀。精密吸取各对照品溶液10 ?L注入高效液相色谱仪，测定。以质量浓度对峰面积绘制标准曲线，得回归方程Y=1 000 000X-5832.2，r=0.999 1。结果表明，毛蕊花糖苷在0.006 2～1.55 mg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.2.3 精密度试验 取同一对照品溶液，连续进样6次，进样量均为10 ?L，按上述色谱条件进行测定，结果毛蕊花糖苷峰面积RSD=1.76%，表明精密度良好，符合含量测定的基本要求。
2.2.4 稳定性试验 取同一供试品溶液，于0、2、4、6、8、12、24 h精密吸取10 ?L注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，结果毛蕊花糖苷峰面积RSD=1.89%，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。
2.2.5 重复性试验 取同一批样品粉末（过2号筛），按供试品溶液制备方法平行制备6份溶液，分别精密吸取10 ?L注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，计算毛蕊花糖苷峰面积RSD=1.52%，结果表明，本方法重复性较好。
2.2.6 加样回收率试验 取同一批已知毛蕊花糖苷含量的样品粉末（过2号筛），精密称取6份，分别加入毛蕊花糖苷对照品溶液，按供试品溶液制备方法制备，分别精密吸取10 ?L注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，计算回收率，结果见表1。
2.2.7 样品含量测定 取车前草样品，精密称定，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，取续滤液进样，根据已建立的色谱条件测定毛蕊花糖苷的峰面积，代入线性回归方程，计算车前草中毛蕊花糖苷含量。
2.3 样品测定结果
取12个不同产地的车前草，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按上述方法和色谱条件分别测定总苯乙醇苷和毛蕊花糖苷含量，结果见表2。
3 讨论
在建立苯乙醇苷类含量测定方法过程中，本研究考察了溶剂种类、乙醇浓度、pH值、提取时间、提取次数、溶剂体积多个因素对提取效果的影响[6-8]，并选取影响提取效果较大的4个因素（乙醇浓度、pH值、提取时间和提取溶剂体积）进行正交试验，确定了车前草中苯乙醇苷类的提取方法，同时进行了多批次验证试验，结果表明该方法比较稳定，可用于车前草中苯乙醇苷类的提取。
毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷在多个波长下均有吸收，通过比较，最终选择332 nm为检测波长，在此波长下，杂峰对这2种成分含量测定的干扰最小[9-10]。同时，在考察毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的提取方法过程中，比较了甲醇、乙醇、10%乙醇、30%乙醇、50%乙醇和70%乙醇6种不同的提取溶剂，对比了回流提取、超声提取和静置提取3种不同的提取方法，考察了不同提取时间和提取次数对两者含量测定的影响，最终确定采用50%乙醇回流提取2次、每次2 h的提取方法。
本研究共收集了12个不同产地的车前草样品，研究结果显示，不同产地车前草中总苯乙醇苷和毛蕊花糖苷的含量存在较大差异，可能与产地的地理环境、气候、田间管理、采收加工等有较大的相关性。中药材内在成分含量不同，对临床药效存在较大的影响，为获得质量稳定、成分明确、药效可靠的药材，应尽量选择符合GAP的车前草。
参考文献：
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（收稿日期：2017-01-09）
（修回日期：2017-02-13；编辑：陈静）
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更新时间：2025/3/22 5:46:31