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标题 厌氧菌的临床检验分析
范文

    翟俊伟

    1 实验方法和实验原理

    处于无氧、少氧、氧化还原电势低的情况下,能够繁殖的细菌统称厌氧菌。厌氧菌通常分布在人体肠道、泌尿生殖、口腔中,调解正常菌群,如果人体出现菌群失调,厌氧菌将对人体多个部位进行侵犯,引发内源性厌氧菌感染。

    厌氧菌的培养要保证无氧环境下操作。厌氧产气袋GENbaganaer中的成分包括活性炭、抗坏血酸钠盐和其他有机和无机成分,能够吸收02并且释放CO2。作用:有效时间为2.5小时,气袋中含02浓度<0.1%,C02气体在24小时后浓度>15%。将气袋放入已经接种好的平板,然后将气袋内空气挤出,将袋口封闭好。半小时之内,袋内处于无气环境。化学指示剂条显示白色,说明袋内符合厌氧状态。

    2 具体操作方法

    2.1 接种培养物

    结合非选择培养基和卡那霉素一万古霉素冻溶血琼脂培养基,能够使厌氧菌检出率达到94%的标准。运用50%乙醇和标本混合作用1消失的方法,用于将芽孢梭菌分离的主要方式,成功收集标本后,尽快接种,具体接种操作为:

    ①接种組织块标本时,应将待检组织块移入到无菌组织研磨器中,保证操作环境处于无氧条件,或者在厌氧箱内进行操作。接种组织匀浆液标本和液体标本采用同样的操作方法。

    ②接种液体标本时,运用毛细吸管作为工具,滴加1滴或数滴于含维生素Kl(10μg/mL)和氯化血红素(5μg/mL)的布鲁血琼脂平板(BRBA),将三区进行明确划线,确保明确区分各个菌落。完成接种操作之后,马上把平皿放入到厌氧袋中,将厌氧产气袋打开,与化学指示剂同时放入厌氧袋,将袋内空气赶走,运用两个塑料夹子将袋口密封,孵育培养条件为35℃。

    ③血液标本与厌氧瓶直接接种。

    ④无菌体液标本与BRBA平皿、厌氧瓶直接接种。

    ⑤一旦怀疑存在芽孢梭菌,必须对标本进行加热处理或者乙醇处理。

    ⑥接种时,运用直接涂片法,对标本进行革兰染色检查。

    2.2 运用直接涂片法对原始标本接种培养基后涂片检查

    一般情况下,拭子上剩余标本足以用于涂片。涂片检查能够发现是否存在细菌、微生物,判断他们的种类、数量、形状、芽孢杆菌的具体位置、革兰阳性菌分枝的特点,格兰阳性球菌的排列情况、格兰阴性杆菌的形状等。

    2.3 孵育培养物

    孵育培养物的平板必须达到48小时以上的除此厌氧孵育时间,针对于生长慢的微生物孵育时间要延长到7天之久,如果在48消失内打开厌氧罐,然后再次重新孵育,厌氧菌株由于对氧高度敏感,所以会停止生长。

    2.4 培养物的检查经适当孵育后的处理操作

    培养物的检查经适当孵育后,将所有平板从厌氧袋取出,争取1次全部取出,避免平皿多次暴露在空气中,对细菌生长情况运用放大镜进行检查、甄别。将菌落类型做好详细记录,具体处理步骤如下:

    2.4.1 耐氧试验的具体操作

    ①选择各种类型的菌落进行接种操作

    纯BRBA平板置于厌氧环境下;巧克力琼脂平板,放置在C02条件下;BRBA平板,放置在需氧条件下。

    ②厌氧BRBA平板,C02平板需要孵育48小时,需氧以18~24小时培养孵育时间为主。与此同时,紫外线下对初代分离BRBA平板进行检查,查看是否有产黑色Porphyromonas及Prevotella的菌落,这种菌落通常表现为砖红色荧光。

    ③试验结果判读

    经过试验发现,厌氧培养生长物的生长条件并不局限于一种,厌氧环境以及大气环境中厌氧培养生长物都可以实现快速生长,这表明被检厌氧培养生长物属于兼性厌氧菌;试验结果表明,被检厌氧培养物仅能在厌氧环境中生长,在大气环境中并未呈现正常生长状况,这种被检厌氧培养生长物属于专性厌氧菌。

    ④耐氧试验阴性结果

    厌氧培养物经过一夜达到48小时的孵育时间之后,对代培养的需氧平板和C02平板进行分别检查,检查发现有菌生长,表明不是厌氧菌。必须经由需氧鉴定程序准确鉴定。

    ⑤耐氧试验阳性结果

    厌氧培养物经过48小时的孵育时间之后,需氧环境以及C02平板都没有出现有菌生长情况,应对次代培养的生长情况、色素产生、溶血、琼脂凹陷、菌落形态状况做好记录。如果菌量充足,有必要运用APl20A对此菌做出生化鉴定。

    2.4.2 菌种鉴定

    ①根据耐氧试验、细菌特点、革兰染色、菌落特点,确定厌氧群或属。

    ②APl20A的操作和判读依据《APl20A操作程序》。

    ③缺少APl鉴定条的情况下,适合对厌氧革兰阴性菌的菌种做出准确鉴定:主要是鉴定含一定量抗生素纸片的敏感性(包括卡那霉素纸片每片1mg,万古霉素纸片每片5μg,多黏菌素E纸片每片l0μg)。厌氧菌纯培养抑菌环达到10mm标准则认定为敏感。靛基质、硝酸盐纸片、触酶等试验是鉴定厌氧菌群、属和具体菌株名称的主要方式。

    2.4.3 报告结果

    ①试验结果的初步报告有利于临床应用。厌氧菌生长速度较慢,因此需要几天的试验时间,才能得出试验结果,最终鉴定菌株的种类,所以,实验室必须在德奥初步鉴定结果时,立即向临床医生报告。

    ②血、脑脊液和其他无菌体液作为试验标本,采取电话报告的方式,告之革兰染色试验以及初步耐氧试验结果。

    ③报告格式为:“厌氧培养,经鉴定发现×××”,×××代表种名。

    参考文献

    陈宏飞.浅析厌氧菌培养及检验在临床诊断中的应用[J].基层医学论坛,2019,23(32):4670-4672.

    温海楠,时东彦,赵建宏,谢守军.我院临床分离厌氧菌的分布特征及药敏谱型[J].中国抗生素杂志,2018,43(05):614-619.

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更新时间:2025/3/11 22:15:47