| 标题 | 短串联重复序列亲子鉴定技术用于细胞融合的检测价值研究 |
| 范文 | 王修梅 【摘 要】目的：研究在亲子鉴定技术融合细胞检测中应用短串联重复序列的效果及可行性。方法：选择2017年3月至2018年3月于我院义务献血的外周血液细胞，分别实施细胞株培养、外周血单个核细胞分离、细胞融合、DNA提取、短串联重复序列扩增检测等步骤，对其结果予以分析和评价。结果：已实施融合的细胞生长63株（6.3%）、未应用融合剂细胞生长数为1株（0.50%）。孔数之中予以扩增处理后DNA提取结果表明，融合成功3个（7.69%）。人骨髓瘤细胞株DNA含量为（51.94±5.18）ng/ul，外周血单个核细胞DNA含量为（49.59±5.52）ng/ul，融合成功的细胞DNA含量为（101.17±10.07）ng/ul。融合成功细胞DNA含量较高，说明细胞融合成功。结论：在实施亲子鉴定技术之中，对其融合细胞实施短串联重复序列技术，其应用效果较好，具有可行性。 【关键词】短串联重复序列;亲子鉴定;细胞融合 【中图分类号】R394【文献标识码】A【文章编号】1005-0019（2020）20--02 细胞融合是指将细胞株进行融合处理，其细胞株来源有所不同，使其成为新的细胞株，从而改变其原有细胞株的特性[1]。对细胞融合后实施检测十分重要，一般多采用染色体检测及筛选，其检验难度较高，且应用时长较长，应用效率较低。鉴于此，为了提升亲子鉴定效率及准确性，将短串联重复序列技术隔离应用于细胞融合之中，进而保障亲子鉴定的治疗及效率[2]。 1 临床资料与方法 1.1 临床资料 选择2017年3月至2018年3月于我院义务献血的外周血液细胞，另应用美国种质保藏中心细胞株。所用试剂包括细胞融合试剂、细胞培养液、胎牛血清、人类STR 21G扩增荧光试剂盒、次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘌呤核试剂[3]。 1.2 方法 1.2.1 细胞株培养方式 人骨髓瘤细胞株予以解冻，温度为37摄氏度，解冻成功后将其接种于细胞培养基之中，充入5%的二氧化氮予以培养，温度为37攝氏度。每3日更换一次培养液予以传代，将其中的对数生长期细胞予以采集，采集过程中技术后实施细胞融合。 1.2.2 外周血单个核细胞分离方式 对义务献血的外周血液予以常规检验，包括艾滋病毒、乙肝病毒、梅毒病毒及丙肝病毒等血液传播类病毒。对其阴性结果血液予以检验。血样予行离心处理后，取红细胞与血浆中的白色细胞（即白膜），剂量为5ml，应用磷酸缓冲盐溶液予以稀释，剂量为5ml，加入5ml密度梯度液后加入稀释后血液。将其实施离心处理，时间为30min，离心处理后采集中层细胞。再次应用磷酸缓冲盐溶液予以清洗，共计3次，对其细胞予以计数后制备完成。 1.2.3 细胞融合方式 将分离细胞放置在试管之中，数量为106个，重悬其预冷细胞融合液，剂量为125ul，并防止预冷灭活仙台病毒悬液12.5ul，混匀后冰置，时间为5min，直至细胞表面吸附灭活仙台病毒。将其实施常规孵育，温度为37摄氏度，时间为15min，期间每5min将其予以混合处理。孵育后轻轻放置次磺嘌呤和胸腺嘧啶核苷混合液，实施铺板，每孔放置2000个细胞，再次予以培养。3星期后对其克隆成功情况予以观察，并将其克隆生长的孔位实施24孔扩大性培养，2星期内予以细胞计数，提取其DNA情况。 1.2.4 DNA提取方式 予行融合细胞计数后，选取（4.5×105）个细胞实施DNA提取操作，将其重悬于200ul磷酸缓冲盐溶液之中，并放入200ul裂解液，温度保持在55摄氏度。时间为10min。提取后将其放置在吸附柱之中，并对其实施常规离心处理，随即应用洗脱液实施洗涤，剂量为160ul，制备结束后予以定量检测[4]。 1.2.5 短串联重复序列扩增检测方式 按照其检验试剂盒说明制备扩增体系，将其试剂放置于DNA模板之中，预变性温度为95摄氏度，时间为11mim。随即分别在94摄氏度、59摄氏度、72摄氏度之中分别放置1min，全过程扩充至28个循环。制备好后将其放置在60摄氏度环境之中，时长为1h，待测序检测期间始终将其放置在4摄氏度环境之中。 2 结果 2.1 亲子鉴定细胞融合结果情况 对形成克隆的细胞孔数予以统计，共计1000株细胞中，细胞生长63株，占比6.3%。未应用融合剂的200株细胞，生长数为1株，占比0.50%。对其中39个孔数之中予以扩增处理，并提取其中的DNA，其结果表明，融合成功3个，占比7.69%。 2.2 DNA含量检验情况 人骨髓瘤细胞株DNA含量为（51.94±5.18）ng/ul，外周血单个核细胞DNA含量为（49.59±5.52）ng/ul，融合成功的细胞DNA含量为（101.17±10.07）ng/ul。其结果显示，融合成功细胞DNA含量较高，说明细胞融合成功。 3 讨论 亲子鉴定技术在孟德尔遗传定律基础之上发展而来，其子代遗传信息均能体现于亲本之上，随着当前基因扩增技术的发展，通过实施短串联重复序列技术予以遗传标记，促使亲缘关系、个体识别的工作效率有所增长。传统细胞融合方式一般多需对其实施核型及染色体检测，但因其检测效率低下，应用范围受到极大的局限性。鉴于此，本研究合理应用短串联重复序列技术于细胞融合之中，短串联重复序列广泛存在于人体基因中，且具备极高的多态性特征，短串联重复序列由2至6个碱基构成，作为核心序列之一，串联重复排列后的多态性水平较高。对于细胞株特定序列予以标记后，通过短串联重复序列检测能够区分细菌株之间的异同，将此技术应用于亲子鉴定之中，能够确定其亲缘关系。 综上所述，短串联重复序列技术是当前细胞融合的重要检测技术，能够提升细胞融合检测的质量及效率，从而提升亲子鉴定技术的广泛应用。因此，短串联重复序列技术具有推广及应用的优势。 参考文献 杨永林，陆玉婷，蔡杰，等.短串联重复序列亲子鉴定技术用于细胞融合的检测[J].中国医师杂志，2016，18（9）：1332-1335. 陈彪.短串联重复序列亲子鉴定技术用于细胞融合的检测[J].健康之路，2016（11）. 何保仁，何保仁，申卫东，等.广西地区1786例亲子鉴定STR基因位点突变的观察与分析[J].重庆医学，2016，45（9）：1190-1191. 朱远雁，邹洁，强文，等.39个STR基因座在二联体亲子鉴定突变案例中的应用[J].中国法医学杂志，2016，31（3）：261-263. |
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