| 标题 | 苦参碱对SGC—7901和ECV304细胞增殖活性的影响 |
| 范文 | 赵健凯++王淑静++王镜伊++乔玉阁++黄蓉++杨子文++张文君 摘 要：通过体外实验研究苦参碱对人胃癌细胞株（SGC-7901）及人脐静脉内皮细胞（ECV-304） 增殖活性的影响，进而研究苦参碱的抗肿瘤活性。 关键词：胃癌；苦参碱；细胞增殖；细胞凋亡；内皮细胞 苦参碱不但可以抑制肿瘤细胞的增殖，而且可以诱导肿瘤细胞分化与凋亡、抗肿瘤浸润和转移等，因而在临床上被广泛应用，苦参碱的浓度和作用时间不同，对胃癌细胞的增殖和凋亡具有不同的影响。药物浓度越高、作用时间越长，都会增加细胞凋亡的几率。本实验采用不同时间、不同剂量的苦参碱研究其对胃癌细胞和血管内皮细胞的影响，对进一步研究苦参碱的抗肿瘤活性及机制具有一定的指导意义。 1 实验材料 （一）药品与试剂 苦参碱（纯度≥99%）购自成都曼斯特生物科技有限公司；RPMI 1640培养液、胎牛血清、胰蛋白酶购自Invitrogen公司；溴化四氮唑蓝（MTT），台盼兰购自Sigma公司；二甲基亚砜（DMSO）分析纯购自天津市博迪化工有限公司。 （二）细胞株 人胃癌细胞株（SGC-7901），人脐静脉内皮细胞株（ECV304）哈尔滨商业大学药学院保存。 2 实验方法 （一）MTT比色实验 将对数生长期人胃癌细胞SGC-7901及人脐静脉内皮细胞ECV-304用PBS漂洗2次，去除漂浮在培养基中的细胞，0.25%胰蛋白酶室温消化，用细胞计数板计数，调整细胞的浓度为5×104个/ml。将细胞悬液加到96孔板中，每孔加入100μl细胞悬液，置于37℃，5%CO2培养箱中继续培养24h。将苦参碱以每孔100μl的体积加入到预先设计好的96孔板中，终浓度梯度为0μg·ml-1，100μg·ml-1，200μg·ml-1，400μg·ml-1，800μg·ml-1，每个浓度设3个复孔，空白对照孔加入同等体积的不含血清的培养基，37℃，5%CO2培养箱中继续培养48h后，各孔加入10μl浓度为5mg·ml-1的MTT，置于37℃，5%CO2培养箱中继续培养4h。吸弃含有MTT的细胞培养液，每孔加入100μl二甲基亚砜（DMSO）溶液（避光）。用酶标仪在波长为490nm下测定96孔板每孔的吸光度值。取平均值，计算细胞存活率。 细胞存活率=各给药组吸光度值/空白对照组吸光度值×100%。 （二）生长曲线 将对数生长期的人胃癌细胞SGC-7901及人脐静脉内皮细胞ECV-304用PBS漂洗2次，去除漂浮在培养基中的细胞，然后加入适量浓度为0.25%胰蛋白酶室温消化，调整细胞的浓度为5×104个/ml。向24孔板加入制备好的细胞悬液，每孔加入400μl细胞悬液，于37℃，5%CO2培养箱中继续培养24h。吸弃旧培养液，各孔重新加入培养液。细胞分两组，对照组各孔加400μl无血清培养基，实验组各孔加浓度为500μg·ml-1的苦参碱400μl，在37℃，5%CO2培养箱中继续培养24h。取出24孔板，每天对照组、实验组各取3个孔，在超净工作台中用PBS漂洗2次，在加入0.25%胰蛋白酶充分消化后，细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9：1混合混匀。（终浓度0.04%），光镜下计数。分别多次计数求平均值，持续计数6天。分别绘制两种细胞对照组和实验组的细胞浓度-时间曲线，进行比较分析研究。 3 结果 （一）MTT法检测细胞存活率 根据细胞的存活率数据可以得出，人胃癌细胞（SGC-7901） 存活率随着苦参碱浓度的增加而下降，呈现药物剂量依赖性，说明药物对这种肿瘤细胞具有明显抑制作用。人胃癌细胞的存活率随药物剂量增大而下降的趋势较明显。对于内皮细胞来说，随着苦参碱浓度的增加而下降趋势不明显，趋于平缓。苦参碱对于人胃癌细胞 （SGC-7901） 及人脐静脉内皮细胞 （ECV-304）的IC50值分别为763μg·ml-1、1888μg·ml-1。 （二）生长曲线检测细胞生长曲线 依据前期MTT的实验数据，本实验采用苦参碱给药浓度为500μg·ml-1。在苦参碱浓度为500μg·ml-1时可抑制两种细胞的生长。生长曲线图显示加药后的第一天开始人胃癌细胞 （SGC-7901） 增殖受到抑制，从第三天开始抑制作用明显增加，第五天抑制作用达到最大。因此得出：在两种实验细胞中，该药的增殖抑制作用为SGC-7901>ECV-304。 4 分析与讨论 本实验研究目的是探究苦参碱对胃癌细胞和血管内皮细胞增殖活性的影响，因此选取人脐静脉内皮细胞 （ECV-304）和人胃癌细胞 （SGC-7901） 作为研究对象，采用MTT法和细胞生长曲线的方法进行研究。 生长曲线实验表明苦参碱对于胃癌细胞抑制增殖作用较强，在给药的第二天细胞浓度开始下降，大约降低10个百分点；而苦参碱对内皮细胞的增殖抑制作用则相对较弱，这与MTT法的实验结果基本保持一致。在增殖抑制活性研究中，苦参碱对两种细胞的增殖抑制作用为SGC-7901>ECV-304。苦参碱对胃癌细胞的生长有一定的抑制作用，而对内皮细胞的作用影响较小，表明苦参碱对细胞生长抑制有一定的选择作用。 参考文献： [1]薛爱华，宋文静.苦参碱药理作用研究概况[J].天津药学， 2010，05（6）： 62-64. 基金项目：哈尔滨商业大学大学生创新创业训练计划国家级项目，项目编号201410240026 |
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