| 标题 | 猫爪草多糖抗炎作用机制的实验研究 |
| 范文 | 朱辉 摘?要：目的：考察不同濃度猫爪草多糖（PRRT）对早、中、晚期炎症模型的影响，探索其抗炎机制方法：将小鼠和大鼠随机各分为阴性对照组和阳性对照组和PRRT低、中、高剂量组，每组10只。采用二甲苯致耳廓肿胀、醋酸诱发小鼠腹腔毛细血管通透性增高，蛋清致大鼠背部气囊滑膜炎、棉球诱发小鼠肉芽肿，探讨PRRT的抗炎作用。称体质量测定各组小鼠耳的炎症肿胀程度及肉芽增生水平，用化学方法检测各组小鼠腹腔洗涤液中的伊文思蓝含量、滑膜炎渗出液容积、渗出液中的白细胞（WBC）计数和肿瘤坏死因子（TNF）a含量，渗出液和血清中超氧化物歧化酶（S0D）、丙二醛（MDA）含量。结果：PRRT组分的高剂量组与阴性对照组相比，可显著抑制小鼠耳肿胀、降低毛细血管通透性及肉芽组织增生。结论：PRRT能够缓解早、中、晚期炎症形成，其抗炎机制可能是PRRT可降低血清和滑膜炎渗出液中的MDA含量，提高SOD活性，进而减轻脂质过氧化损伤。 关键词：猫爪草多糖（PRRT）;肿瘤坏死因子（TNF）a含量;炎症;超氧化物歧化酶;丙二醛（MDA）;白细胞计数;小鼠 Abstract：Objective：To?observe?the?effects?of?different?concentrations?of?Polysaccharide?of?Radix?Ranunculi?Ternati（PRRT）on?inflammatory?models?in?different?stages?and?to?explore?its?possible?mechanism.Methods：Mice?and?rats?were?randomly?divided?into?negative?control?group，positive?control?group?and?PRRT?low，medium?and?high?dose?groups，with?10?rats?in?each?group.Ear?swelling?induced?by?xylene?and?abdominal?cavity?induced?by?acetic?acid?were?usedCapillary?permeability?increased，egg?white?induced?back?balloon?synovitis?in?rats，cotton?ball?induced?granuloma?in?mice，Antiinflammatory?effect?of?PRRT.The?body?weight?was?measured?to?determine?the?inflammatory?swelling?degree?and?granulation?proliferation?level?of?mice?ears?in?each?group.The?Evans?blue?content，synovitis?exudate?volume，white?blood?cell（WBC）count?and?tumor?necrosis?factor（TNF）a?content?in?peritoneal?washing?liquid，and?superoxide?in?exudate?and?serum?of?mice?in?each?group?were?detected?by?chemical?methods.Contents?of?superoxide?dismutase（SOD）and?malondialdehyde（MDA）.Results：Compared?with?the?negative?control?group，the?highdose?PRRT?group?significantly?inhibited?ear?swelling，decreased?capillary?permeability?and?granulation?tissue?proliferation?in?mice.Conclusion：PRRT?can?The?mechanism?may?be?that?PRRT?can?reduce?MDA?in?serum?and?synovitis?exudate?to?reduce?inflammation?formation?in?various?stages.Content，improve?SOD?activity，and?then?reduce?lipid?peroxidation?damage. Keywords：Polysaccharide?of?Radix?Ranunculi?Ternati（PRRT）;tumor?necrosis;factoralpha;inflammatory;superoxide?dismutase;malondialdehyde;white?blood?cell?count;animal?mice 1?绪论 猫爪草（Radix?Ranunculi?Ternati）为毛莨科植物小毛莨（Ranunculus?Ternatus?Thunb）的块根，1977年开始收载于《中华人民共和国药典》。猫爪草甘、辛、温，入肝、肺经，具有清热解毒、散结消肿之功效，现安徽、河南、江西、浙江、四川、云南等地均有大量分布[13]。但由于宣传力度不够，很多专业人员及一些专家学者对猫爪草不甚了解，导致猫爪草开发利用不够。猫爪草的现代实验研究起步很晚，目前少有的研究表明其具有如下作用：抗肿瘤[4]、抗菌作用[1]、调免疫[6]、抗氧化[7]。此外，猫爪草所含的黄酮苷对动物有镇咳、祛痰消炎作用;对中枢神经、心脏、呼吸系统具有不同程度的抑制作用。 据报道，猫爪草的主要化学成分包括甾醇、内酯、不饱和脂肪酸、多糖、微量元素等，而活性部位筛选试验表明多糖是其最重要活性成分之一。多糖是广泛存在于动物、植物和微生物细胞壁中的一种高分子聚合物，是构成生命的四大基本物质之一。多糖的药用研究始于40年代，起初可作为广泛的免疫促进剂。经过半个多世界的发展，多糖的研究取得了重大进展。建立了多糖的提取纯化、生物活性测定和结构分析等一系列方法，研究的广度和深度不断加深。大量研究证实多糖具有多种活性：（1）多糖可通过激活T淋巴细胞和B淋巴细胞来增强机体免疫力，如香菇多糖能促进特异性细胞毒T细胞的产生并提高其杀伤活力而提高机体免疫力;（2）多糖能通过激活巨噬细胞来提高抗肿瘤和抗病毒的能力，如人参多糖及灵芝多糖均可增加小鼠体内巨噬细胞的数量;（3）多糖可通过激活网状内皮系统来增强机体消灭病原体、排除异物和吞噬老化细胞的作用，如三七多糖、杜仲多糖及甘草多糖都能显著增强网状内皮系统的活性。此外，许多中药及植物的多糖也表现出显著的抗炎活性[812]。 炎症（Inflammation）是机体对于刺激的一种防御反应，主要表现为红、肿、热、痛和功能障碍。全球约有数以亿计的人遭受着炎症的折磨，是全球性的无法治愈的病症之一[13]。炎症的病理变化目前尚不完全清楚，一般按病理过程可将其发展过程分为三个阶段。早期出现毛细血管扩张、通透性增加;中期表现为血小板吸附及白细胞游走;晚期则出现肉芽组织增生[14]。炎性介质是参与炎症反应的化学活性物质，包括趋化因子和细胞因子，均可与炎性细胞相互作用而产生炎症反应。肿瘤坏死因子（TNFα）、氧自由基等也在炎症反应中发挥主要作用，目前对炎症的治疗主要包括非甾体类抗炎药和肾上腺皮质激素类，但存在诸多毒副作用，患者依从性小。因此，开发新型抗炎药物已成为当务之急。而多糖优异的抗炎作用已引起了人们的关注。本文考察了猫爪草多糖（PRRT）其对早、中、晚期炎症的影响，探讨了其可能的抗炎作用机制，以期为多糖抗炎药物的开发提供参考和支持。 1.1?实验材料 1.1.1?药品 1.1.2?动物 1.1.3?主要试剂 1.1.4?仪器 2?材料和方法 2.1?实验方法 （1）小鼠耳廓肿胀实验。采用小鼠甲苯致炎法[15]，选取体重（20±2g）雌性健康小鼠50只，随机分为5组，即PRRT低（400mg/kg）、中（800mg/kg）、高剂量（1600mg/kg）组，阳性对照组和阴性对照组，每组10只。给药组分别给予PRRT相应剂量，阳性对照组给予阿司匹林，阴性对照组给予等体积蒸馏水，每日一次，连续5日。末次给药1h后将0.03mL二甲苯涂抹于小鼠右耳。2h后处死，取下两耳并在相同部位用打孔器打孔，称重。两耳只差为肿胀度，肿胀抑制率（%）=（对照肿胀度给药肿胀度）/对照肿胀度。 （2）小鼠棉球肉芽肿实验。参考文献，用棉球制作小鼠肉芽肿[17]，小鼠于经乙醚浅麻醉后，将重量为5mg的灭菌棉球植入小鼠左右腹股沟两侧皮下，缝合伤口。经4h后给药。每日一次，连续7日，给药量同实验1。末次给药后于次日处死小鼠，取出棉球肉芽组织，经80℃烘干2h，称重。肉芽组织的重量=取出的棉球肉芽组织重量棉球原重量，肿胀抑制率（%）=（对照肉芽组织重量-给药肉芽组织重量）/对照肉芽组织重量。 （3）小鼠腹腔毛细血管通透性实验。采用醋酸致炎法[16]，实验用小鼠分组、给药方法同实验1.2.1，连续5日，末次給药1h后，分别将0.5%伊文斯兰生理盐水0.1mL/10g静脉注射与各鼠尾，再于腹腔注射0.6%冰醋酸溶液0.1mL/10g。20min后处死小鼠，腹腔注射6mL生理盐水。将腹部剪开，吸出洗涤液，加入10mL生理盐水，离心（3000rpm，15min），取上清液，于590nm波长测定吸光度。 （4）大鼠气囊滑膜炎实验。参考文献后采用蛋清制作大鼠背部气囊滑膜炎。选取体重（250±10g）雌性健康小鼠50只，分组同实验1.2.1。第1日将无菌空气20mL注射于大鼠背部皮下，形成气囊;第3日在原气囊处注射无菌空气20mL，同时在首次注入空气当日开始灌胃给药，连续7日，剂量同1.2.1，末次给药后于大鼠背部皮下注射无菌空气20mL后，同时将30%蛋清1mL注射与囊内。6h后在急性炎症期静脉采血。处死大鼠，用1mL?Hanks液洗涤气囊，收集洗涤液后离心，取上清液测定各项指标。洗涤液中WBC测定应用细胞计数板测定，同时测定洗涤液中TNFa、MDA含量;血清中MDA含量、SOD活力。渗出液量=洗涤液量1mL。 （5）统计学方法。采用Minitab软件包进行数据分析，实验数据以X±SD表示。采用t检验和单因素方差分析进行统计分析，P<0.05，有统计学意义。 3?结果与讨论 3.1?猫爪草多糖对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响 本试验察了猫爪草多糖组分PRRT抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀的能力，结果表1所示。数据表明，与阴性对照组相比低、中、高剂量的PRRT均可抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀，且剂量越大抑制率越高。其中，PRRT的高剂量组（1600mg/kg）抑制率达35.00%，与阴性对照组相比差别显著（P<0.05），但低于阿司匹林的抑制率（45.42%）。 3.2?猫爪草多糖对小鼠棉球肉芽肿的影响 本试验通过称重棉球肉芽肿的重量来考察猫爪草多糖组分PRRT的抗炎作用，结果如表2所示。数据表明，PRRT高、中、低剂量组对小鼠棉球肉芽肿重量均有减轻作用，且剂量越大抑制率越强。其中，PRRT的中（800mg/kg）、高剂量组（1600mg/kg）抑制率达50%，与阴性对照组相比差别显著（P<0.05），但均低于阿司匹林的抑制率（18.88%）。 3.3?猫爪草多糖对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 本试验采用醋酸致小鼠腹腔血管通透性增加来研究猫爪草多糖组分PRRT的抗炎作用，结果如表3所示。数据表明，PRRT的中剂量组（800mg/kg）与阴性对照组相比差别显著（P<0.05）;PRRT21的高剂量组（1600mg/kg）与阴性对照组相比差别极显著（P<0.01）。 3.4?猫爪草多糖对大鼠气囊滑膜炎的影响 本试验通过大鼠渗出液的体积和血清中的WBC、TNFa、MDA等指标指标来考察猫爪草多糖组分PRRT的抗炎作用和机理。结果如表4、5所示。数据表明，低、中、高剂量组渗出液的体积、白细胞数和TNFα与阴性对照组有一定的降低，但差别不显著。而中。高剂量组能显著降低WBC。同时，低、中、高剂量组均能提高SOD的活性，降低MDA含量。说明PRRT有一定的抗炎作用，其抗炎作用可能与改变SOD活性相关。 4?结论 本研究分别通过醋酸致腹腔毛细血管通透性增加和二甲苯致小鼠耳肿胀制作早期炎症反应模型、大鼠气囊滑膜炎构建中期炎症反应模型、棉球肉芽肿构建晚期炎症反应模型，考察了猫爪草多糖PRRT组分的抗炎作用和机制。结果表明，猫爪草多糖PRRT组分的高剂量组与阴性对照组相比，可显著抑制小鼠耳肿胀、降低毛细血管通透性及肉芽组织增生，其抗炎机制可能是PRRT可降低血清和滑膜炎滲出液中的MDA含量，提高SOD活性，进而减轻脂质过氧化损伤。 参考文献： [1]廖豪，童志平.中药猫爪草的研究进展[J].中国药房，2008，12：955957. [2]陈丙銮，杭悦宇，陈宝儿.药用植物猫爪草的研究进展[J].中国野生植物资源，2002，4：79. [3]李瑞尹，春萍.中药猫爪草的研究进展[J].中国药师，2014，3：489492. [4]胡泽开，苗明三，刘会丽.中药猫爪草免疫活性部位的筛选[J].辽宁中医药大学学报，2010，12（3）：2426. [5]王鲁石，杜华，薛梅，等.猫爪草多糖的提取及含量测定[J].辽宁中医药大学学报，2003，21（3）：910. [6]刘丽娟，张振凌，吴筱菁，等.正交实验法研究猫爪草多糖超声提取工艺[J].河南中医学院学报，2007，6（37）：2930. [7]王明道，胡虹，郜峰，等.猫爪草多糖的微波提取工艺优化[J].江西农业学报，2011，1（43）：132134. [8]刘菊，王君明，纪彬，等.猫爪草粗多糖提取工艺研究[J].中医学报，2012，12（27）：16221623. [9]陈彦，戴玲，沈业寿.猫爪草多糖RTGⅢ的分离纯化及其生物活性[J].中国药学杂志，2004，39（5）：339342. [10]吴晓.猫爪草多糖和有机酸部位的初步研究[D].南京：南京中医药大学，2007. [11]贾慧青.猫爪草多糖的研究[D].西安：陕西师范大学大学，2006. [12]Zhongxia?Zhang?Meiying?Wang?Tianying?Yu.Effects?of?polysaccharides?of?Radix?ranunculi?ternati?on?Type?I?Skin?Hypersensitivity?in?rats[J].Biomedical?Research，2015，26（2）：315319. [13]王会敏，何柯新，尚陈宇，等.猫爪草多糖的理化性质及其对ANA1细胞的免疫调节作用[J].热带医学杂志，2018，18（7）：855859. [14]何柯新，吕世静.猫爪草有效成分抗结核治疗进展[J].检验医学与临床，2008，5（6）：354356. [15]彭锐，邹阳.壮筋膏的抗炎镇痛作用研究[J].湖北中医学院学报，2007，9（1）：1718. [16]张文平，陈惠群，张支书，等.千里光总黄酮的抗炎作用研究[J].时珍国医国药，2008，19（3）：605607. [17]王玮，白月，王俊平，等.黄芩茎叶总黄酮对大鼠气囊滑膜炎抗炎作用机制的研究[J].临床与用药，2009，26（4）：460. |
| 随便看 |
|
科学优质学术资源、百科知识分享平台，免费提供知识科普、生活经验分享、中外学术论文、各类范文、学术文献、教学资料、学术期刊、会议、报纸、杂志、工具书等各类资源检索、在线阅读和软件app下载服务。