动物亚硝酸盐中毒透析法检验

    常伦胜+李向军+王强+陈亚茹

    摘要：在自然条件下，很多青饲料如白菜、甜菜等在硝化细菌的作用下极易还原为亚硝酸盐，造成牛、羊、猪等家畜中毒。对中毒动物胃肠内容物提取常采用水浸法，当检材色素较严重或黏稠时，用水浸法不理想，可用透析法提取，透析法所得被检液是澄清的。透析法是利用低分子化合物的细小分子或离子在溶液中可以自由通过半透膜，而一些大分子、结构庞大的化合物如脂肪、蛋白质等不能通过而得以分离。

    关键词：亚硝酸盐；中毒；透析法

    中图分类号：S859.81 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2017）11-0020-01

    在自然条件下，亚硝酸盐是硝酸盐在硝化细菌的作用下还原为氨过程中的中间产物，故亚硝酸盐的产生取决于硝酸盐的数量与硝化菌的活跃程度这两个条件。很多青饲料如白菜、青菜、圆白菜、甜菜及其叶含硝酸盐，甜菜的干物质中含硝酸钾1.32%～3.13%，施用硝化盐化肥或2，4-D除草剂的甜菜含量最高。这些蔬菜在大量使用氮肥及除草剂时其硝酸盐含量更高，造成牛、羊、猪等家畜中毒。对中毒动物胃肠内容物提取常采用水浸法，当检材色素较严重或黏稠时，用水浸法不理想，可用透析法提取，透析法所得被检液是澄清的。透析法是利用低分子化合物的细小分子或离子在溶液中可以自由通过半透膜，而一些大分子、结构庞大的化合物如脂肪、蛋白质等不能通过而得以分离。现对透析法的材料及方法介绍如下，供参考。

    1 半透膜制作

    取火棉胶数毫升，倒入潔净干燥的小烧杯中，迅速转动烧杯，使火棉胶均匀地分布在烧杯内壁上，形成一层薄膜，待薄膜干燥后，轻轻用刀尖将边缘剥离，向薄膜与内壁间轻轻吹气，注入冷水，即可完整的取下，检查是否完整无损。

    2 检材提取步骤

    （1）将检材切细，轻轻装入已做好的半透膜中，用线将膜口系在玻管的一端。

    （2）把盛有检材的半透膜浸入较大的烧杯中，浸入深度应使检材与蒸馏水保持在同一水平线上。

    （3）用滴管在玻璃管上口向半透膜内滴加蒸馏水，使成粥状。

    （4）透析1 h左右，取出膜外透析液进行检验。

    3 格林试剂配制

    对氨基苯磺酸1.0 g，甲萘胺（α-萘胺）0.1 g，酒石酸8.9 g，混合研磨均匀，储于棕色广口瓶内，避光保存，备用。

    4 亚硝酸盐标准纸片的制备

    取滤纸剪成1 cm2大小。取亚硝酸钠（钾）溶液，其含量为600 mg/mL。用0.25 mL移液器往每张滤纸片上各滴0.005 mL亚硝酸盐溶液（0.005 mL中含3 μg亚硝酸盐），使之自然干燥、备用。

    从制成的纸片中任选10片分别置于10支试管中，分别取亚硝酸盐标准溶液0、0.25、0.50、1.00、2.00 mL于另外5支试管中（作为标准比色列）。以上各管均加水至5 mL，再加格林试剂0.1 g，混匀，放置5～10 min，然后比色，若有半数未达到2.5～5.0 μg（即未达到比色列的第2至3管的颜色深度），则所做纸片全部不能用，应另做。若达到标准，则将纸片装入棕色广口瓶中备用。

    5 样品检测方法

    取小试管3支，一管加被检液2.5 mL为样品管，一管加亚硝酸盐纸片1片，为标准管，另一管为空白管。3管分别加水至5 mL。各管加格林试剂0.1 g，混匀，放置5～10 min。

    结果判定：若样品管与标准管颜色相近或深于标准管，则有亚硝酸盐中毒的可能；若样品管的颜色浅于标准管，则亚硝酸盐中毒的可能性不大；若样品管颜色很深或呈砖红色并产生沉淀，说明亚硝酸盐的含量很高。

    此法便于现场检查，但要求标准试纸精确可靠。