滑子菇新品种液体培养基筛选试验

    王广耀 李雪 李盛旻 李凤林 于汇 王慧英

    

    

    

    【摘? ?要】 该试验通过单因素试验和正交试验，探讨不同碳源、氮源对滑子菇新品种液体培养基菌丝生物量的影响。结果得出滑子菇新品种的最佳液体培养基是玉米粉3.0%、葡萄糖2.5%、麸皮3.5%、黄豆粉2.7%。

    【关键词】 滑子菇;碳源;氮源;菌丝生物量;液体发酵

    [Abstract] Through single factor test and orthogonal test， the effects of different carbon and nitrogen sources on the mycelia biomass in liquid medium of a new mushroom variety were investigated. Results the best liquid medium for the new mushroom variety was corn flour 3.0%， glucose 2.5%， bran 3.5% and soybean flour 2.7%.

    [Key words] shiitake mushroom; carbon source; nitrogen source; mycelium biomass; liquid fermentation

    滑子菇（Pholiota namekio），属于真菌界、真菌门、担子菌亚门、层菌纲、伞菌目[1]，又称珍珠菇、光帽鳞伞，在日本被叫做纳美菇。滑子菇人工栽培始于日本，1977年引入我国[2]。近年来， 在吉林省有近万滑子菇的栽培户，但是产量不稳定、质量呈现下降趋势，主要表现在菌种老化、抗性差、产量低，因此，筛选出适宜当地栽培的新品种非常关键。该实验主要是针对液体培养基所需营养源进行筛选，筛选出最佳的碳、氮源培养基组合，并应用于生产，为滑子菇液体发酵提供理论依据。

    1? 材料与方法

    1.1? 实验材料

    实验于吉林农业科技学院食用菌实验室、吉林市汇丰科技有限公司进行。滑子菇品种由吉林农业科技学院食用菌实验室提供。所用到的试剂和材料还有琼脂、酵母膏、可溶性淀粉（98%）、硝酸铵（99%）、蔗糖（99.9%）、葡萄糖（99.9%）、蛋白胨（86%）、麦芽糖（99.9%）、麩皮、玉米粉、黄豆粉，均由吉林农业科技学院食用菌实验室提供。

    1.2? 培养基配方

    斜面试管培养基配方：马铃薯20%、葡萄糖2%、蛋白胨1%、酵母膏0.5%、K2HPO4 0.1%、MgSO4 0.1%、琼脂2%、水100%、pH值取自然。与常规配制方法相同;液体种子初培养基配方：在斜面试管培养基配方的基础上去掉2%的琼脂，其它相同;碳源供试培养基：马铃薯20%，水100%，再分别加入葡萄糖、蔗糖、玉米粉、麦芽糖和可溶性淀粉;氮源供试培养基：马铃薯20%，葡萄糖2%，水100%，再分别加入黄豆粉、蛋白胨、酵母膏、硝酸铵、麸皮，马铃薯、玉米粉、黄豆粉、麦麸均煮汁，双层纱布过滤。

    1.3? 实验方法

    菌种活化：在无菌操作台下切取黄豆粒大小菌种，接种到斜面试管培养基中央，然后放到25℃的培养箱中培养菌丝长满斜面。

    液体种子初培养：在无菌操作台下进行接种，每支试管菌种接2瓶，将培养箱调到25 ℃摇床中静置48 h后，检察瓶中菌种是否有杂菌，如无杂菌，在160r/min、温度为25 ℃条件下培养8d，获得滑子菇菌液。

    碳、氮源液体供试培养：在无菌操作台下进行接种，按5%的接种量进行接种，分别接到装有碳、氮源不同液体培养基的三角瓶中，放在25℃的摇床中，培养6d。

    菌丝干重的测定：培养好的菌液，经40目过筛，将处理好的菌丝体用蒸馏水冲洗3次后，置于75℃干燥箱内烘干直至恒重，用电子天平准确称量菌丝干重。

    1.4? 试验设计

    碳源供试因素分别为葡萄糖、蔗糖、玉米粉、麦芽糖和可溶性淀粉，氮源供试因素分别为黄豆粉、蛋白胨、酵母膏、硝酸铵、麸皮，试验设计如表1，每个水平重复三次。

    2? 结果与分析

    2.1? 不同碳源对滑子菇菌丝干重的影响 见图1。

    由图1可知，5种碳源随着水平因素量的增加菌丝干重也随着增加，滑子菇菌丝对葡萄糖的利用效果最好，在取水平2.5%时菌丝干重达到2.991g/100mL，其次是蔗糖、玉米粉、麦芽糖和可溶性淀粉。从碳源的单糖、二糖、多糖来考虑，选择小分子单糖，从成本方面来考虑，选择大分子多糖玉米粉，所以确定先选择碳源葡萄糖和玉米粉来进行正交试验。

    2.2? 不同氮源对滑子菇菌丝干重的影响 见图2。

    由图2可知，随着黄豆粉、硝酸铵、麸皮3种不同水平因素量的增加菌丝干重随着增加，而随着蛋白胨、酵母膏两种因素量的增加菌丝干重随着减少。滑子菇菌丝对氮源的利用效果最好是黄豆粉，其次是麸皮。从菌丝干重和成本、经济效益方面考虑，确定选择黄豆粉和麸皮作为氮源进行正交试验。

    2.3? 碳、氮源正交试验

    根据单因素试验结果，选择碳源的葡萄糖、玉米粉和氮源的黄豆粉、麸皮进行正交试验设计，试验重复3次，取其平均值，最终根据测得的干重计算其平均值。对所得数据进行L9（34）正交试验可知，极差次序依次为葡萄糖>麸皮>黄豆粉>玉米粉，由此分析出极差越小，起的作用就越小，说明影响菌丝干重最大的是葡萄糖，其次是麸皮，影响最小的是黄豆粉和玉米粉。

    3? 结论与讨论

    经过单因素试验，结果选择碳源是葡萄糖2.5%、玉米粉3.0%，氮源则是麸皮3.5%、黄豆粉2.7%。通过正交试验，得到滑子菇新品种的最佳液体培养基是玉米粉3.0%，葡萄糖2.5%，麸皮3.5%，黄豆粉2.7%。对于不同的碳源，不论大、小分子碳源，都能被滑子菇菌丝利用上，从生产实际成本出发，选择既能降低成本又能提高菌丝量的碳源。在氮源的选择上，发现它在滑子菇发酵过程中起到了相当高的作用，而且氮源作为原材料，为食用菌细胞合成蛋白质和核酸提供了能量。当滑子菇液体培养基中加入硝酸铵时，菌丝生长速度明显变慢，但加入麦麸、黄豆粉、蛋白胨、酵母膏时，菌丝却能生长的很好，说明无机氮对滑子菇的作用不大。从经济方面考虑，麦麸、黄豆粉作为农产品具有方便采购且成本低等特点，因此，选择麦麸、黄豆粉作为氮源。

    （编辑：李晓琳）