高效液相色谱同位素稀释质谱法定量分析人生长激素

金有训等



摘 要 建立了人生长激素（hGH）纯化分析和高效液相色谱（HPLC）与同位素稀释质谱（IDMS）联用高准确度绝对定量方法。采用快速蛋白液相色谱来分离纯化hGH，以傅里叶变换离子回旋共振质谱仪（FTICRMS）准确地测定蛋白质的分子质量。 纯化的hGH经酸水解后，采用KINETEX C18色谱柱为分析柱，以水（含0.1%三氟乙酸）和乙腈为流动相，等梯度分离，流速0.2 mL/min， 温度40℃，采用电喷雾正离子模式进行电离，选择多反应监测模式进行检测，内标法定量分析。结果表明，FTICRMS所测得的分子量实测值与理论值仅相差0.31 Da， 脯氨酸、缬氨酸和苯丙氨酸在液相条件下5 min内达到基线分离，在最优条件下，hGH含量测定结果为186.80 SymbolmA@
g/g，相对标准偏差为0.52%。利用本方法参加国际比对，比对结果与参考值等效一致。本方法具有简易、实用的特点，并且准确可靠，可作为hGH纯品标准物质的定值方法，为hGH的日常检测提供参考。