高效液相色谱—电雾式检测器同时测定猪、牛、羊、熊胆粉中5种胆汁酸的含量

潘媛媛等
摘要:建立了高效液相色谱电雾式检测器(HPLCCAD)同时测定猪、熊、牛、羊胆粉中5种胆汁酸的检测方法,优化了色谱条件,采用冰醋酸乙腈水(0.1∶30∶70, V/V)与乙腈梯度洗脱,使用Waters HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8 μm),柱温35.0 ℃,流速0.3 mL/min,进样量10 μL。本方法对5种胆汁酸的定量限均为30 ng,检出限均为6 ng,线性范围均为0.6~300 mg/L,相关系数为0.9988~0.9994,加标回收率(n=6)为85.0%~97.1%,各胆粉样品经碱加热水解后测定各胆汁酸的含量,结果与文献报道一致。将本方法与高效液相色谱蒸发光散射检测器(HPLCELSD)法相比较,结果显示,CAD的灵敏度为ELSD的3.0倍,线性范围比ELSD高2个数量级,并且CAD的响应因子比ELSD更具有一致性。
关键词:高效液相色谱; 电雾式检测器; 蒸发光散射检测器; 胆粉; 胆汁酸
1引言
胆汁酸(Bile acid)是脂肪代谢的必需物质,常见的具有药物活性的胆汁酸有胆酸、去氧胆酸、猪去氧胆酸、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸,其中,熊去氧胆酸为熊胆所特有,并且被认为是这些胆汁酸中最有效的活性成分[1,2],而猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸等均为替代品或人工合成熊去氧胆酸的原料[3],因此,鉴别胆粉种属来源和测定各种胆汁酸含量十分必要[4]。目前,使用反相高效液相色谱法(RPHPLC)可以实现这些胆汁酸的定性和定量分析[5]。但由于胆汁酸是一类紫外吸收较弱的固醇类化合物,使用紫外检测器(UV)检测灵敏度很低[6],目前大多采用蒸发光散射检测器(ELSD)检测[7]。
电雾式检测器(Charged Aerosol Detector,CAD)是一种通用型检测器[8],对不同结构的化合物有统一的响应,已经被应用于检测脂类[9]、皂苷类[10]等弱紫外吸收的物质。本文使用HPLCCAD同时测定熊、猪、牛、羊胆粉中5种胆汁酸的含量,结果显示,本方法可用于测定各种胆汁酸的含量及鉴别胆粉的种属来源。将本方法与高效液相色谱蒸发光散射检测器(HPLCELSD)法相比较,CAD的灵敏度为ELSD的3.0倍,线性范围比ELSD高2个数量级,并且CAD的响应因子比ELSD更具有一致性。
2实验部分
2.1仪器和试剂
Ultimate 3000液相色谱(美国赛默飞世尔科技公司)配备Corona Ultra电雾式检测器及Chromeleon 7.1色谱工作站,Waters Acquity UPLC(美国沃特世公司)配备Acquity ELSD检测器及Empower 2.0色谱工作站,XS205D型分析天平(德国梅特勒托利多公司),DGG9023A型电热恒温箱(上海森信实验仪器有限公司)。胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆酸标准品、牛胆粉、羊胆粉、熊胆粉、猪胆粉(中国食品药品检定研究院); 乙腈(色谱纯,美国Honeywell公司), 冰醋酸、NaOH、HCl(分析纯,国药集团化学试剂有限公司)。
2.2标准溶液的配制
2.3样品前处理
3结果与讨论
3.1色谱条件优化
胆汁酸的极性较大,选择对极性化合物具有较强保留的Waters HSS T3色谱柱,使用梯度洗脱方式可以实现5种胆汁酸完全分离,且该色谱柱的柱流失较低,可以降低基线噪音,适用于通用型检测器ELSD和CAD(见图1)。胆汁酸为酸性化合物,使用0.1%冰醋酸作流动相可抑制胆汁酸电离,使其在反相色谱柱中获得更好的保留效果。该色谱条件与质谱兼容,对于复杂样品也可直接转移至质谱分析[12]。
摘要:建立了高效液相色谱电雾式检测器(HPLCCAD)同时测定猪、熊、牛、羊胆粉中5种胆汁酸的检测方法,优化了色谱条件,采用冰醋酸乙腈水(0.1∶30∶70, V/V)与乙腈梯度洗脱,使用Waters HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8 μm),柱温35.0 ℃,流速0.3 mL/min,进样量10 μL。本方法对5种胆汁酸的定量限均为30 ng,检出限均为6 ng,线性范围均为0.6~300 mg/L,相关系数为0.9988~0.9994,加标回收率(n=6)为85.0%~97.1%,各胆粉样品经碱加热水解后测定各胆汁酸的含量,结果与文献报道一致。将本方法与高效液相色谱蒸发光散射检测器(HPLCELSD)法相比较,结果显示,CAD的灵敏度为ELSD的3.0倍,线性范围比ELSD高2个数量级,并且CAD的响应因子比ELSD更具有一致性。
关键词:高效液相色谱; 电雾式检测器; 蒸发光散射检测器; 胆粉; 胆汁酸
1引言
胆汁酸(Bile acid)是脂肪代谢的必需物质,常见的具有药物活性的胆汁酸有胆酸、去氧胆酸、猪去氧胆酸、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸,其中,熊去氧胆酸为熊胆所特有,并且被认为是这些胆汁酸中最有效的活性成分[1,2],而猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸等均为替代品或人工合成熊去氧胆酸的原料[3],因此,鉴别胆粉种属来源和测定各种胆汁酸含量十分必要[4]。目前,使用反相高效液相色谱法(RPHPLC)可以实现这些胆汁酸的定性和定量分析[5]。但由于胆汁酸是一类紫外吸收较弱的固醇类化合物,使用紫外检测器(UV)检测灵敏度很低[6],目前大多采用蒸发光散射检测器(ELSD)检测[7]。
电雾式检测器(Charged Aerosol Detector,CAD)是一种通用型检测器[8],对不同结构的化合物有统一的响应,已经被应用于检测脂类[9]、皂苷类[10]等弱紫外吸收的物质。本文使用HPLCCAD同时测定熊、猪、牛、羊胆粉中5种胆汁酸的含量,结果显示,本方法可用于测定各种胆汁酸的含量及鉴别胆粉的种属来源。将本方法与高效液相色谱蒸发光散射检测器(HPLCELSD)法相比较,CAD的灵敏度为ELSD的3.0倍,线性范围比ELSD高2个数量级,并且CAD的响应因子比ELSD更具有一致性。
2实验部分
2.1仪器和试剂
Ultimate 3000液相色谱(美国赛默飞世尔科技公司)配备Corona Ultra电雾式检测器及Chromeleon 7.1色谱工作站,Waters Acquity UPLC(美国沃特世公司)配备Acquity ELSD检测器及Empower 2.0色谱工作站,XS205D型分析天平(德国梅特勒托利多公司),DGG9023A型电热恒温箱(上海森信实验仪器有限公司)。胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆酸标准品、牛胆粉、羊胆粉、熊胆粉、猪胆粉(中国食品药品检定研究院); 乙腈(色谱纯,美国Honeywell公司), 冰醋酸、NaOH、HCl(分析纯,国药集团化学试剂有限公司)。
2.2标准溶液的配制
2.3样品前处理
3结果与讨论
3.1色谱条件优化
胆汁酸的极性较大,选择对极性化合物具有较强保留的Waters HSS T3色谱柱,使用梯度洗脱方式可以实现5种胆汁酸完全分离,且该色谱柱的柱流失较低,可以降低基线噪音,适用于通用型检测器ELSD和CAD(见图1)。胆汁酸为酸性化合物,使用0.1%冰醋酸作流动相可抑制胆汁酸电离,使其在反相色谱柱中获得更好的保留效果。该色谱条件与质谱兼容,对于复杂样品也可直接转移至质谱分析[12]。
摘要:建立了高效液相色谱电雾式检测器(HPLCCAD)同时测定猪、熊、牛、羊胆粉中5种胆汁酸的检测方法,优化了色谱条件,采用冰醋酸乙腈水(0.1∶30∶70, V/V)与乙腈梯度洗脱,使用Waters HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8 μm),柱温35.0 ℃,流速0.3 mL/min,进样量10 μL。本方法对5种胆汁酸的定量限均为30 ng,检出限均为6 ng,线性范围均为0.6~300 mg/L,相关系数为0.9988~0.9994,加标回收率(n=6)为85.0%~97.1%,各胆粉样品经碱加热水解后测定各胆汁酸的含量,结果与文献报道一致。将本方法与高效液相色谱蒸发光散射检测器(HPLCELSD)法相比较,结果显示,CAD的灵敏度为ELSD的3.0倍,线性范围比ELSD高2个数量级,并且CAD的响应因子比ELSD更具有一致性。
关键词:高效液相色谱; 电雾式检测器; 蒸发光散射检测器; 胆粉; 胆汁酸
1引言
胆汁酸(Bile acid)是脂肪代谢的必需物质,常见的具有药物活性的胆汁酸有胆酸、去氧胆酸、猪去氧胆酸、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸,其中,熊去氧胆酸为熊胆所特有,并且被认为是这些胆汁酸中最有效的活性成分[1,2],而猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸等均为替代品或人工合成熊去氧胆酸的原料[3],因此,鉴别胆粉种属来源和测定各种胆汁酸含量十分必要[4]。目前,使用反相高效液相色谱法(RPHPLC)可以实现这些胆汁酸的定性和定量分析[5]。但由于胆汁酸是一类紫外吸收较弱的固醇类化合物,使用紫外检测器(UV)检测灵敏度很低[6],目前大多采用蒸发光散射检测器(ELSD)检测[7]。
电雾式检测器(Charged Aerosol Detector,CAD)是一种通用型检测器[8],对不同结构的化合物有统一的响应,已经被应用于检测脂类[9]、皂苷类[10]等弱紫外吸收的物质。本文使用HPLCCAD同时测定熊、猪、牛、羊胆粉中5种胆汁酸的含量,结果显示,本方法可用于测定各种胆汁酸的含量及鉴别胆粉的种属来源。将本方法与高效液相色谱蒸发光散射检测器(HPLCELSD)法相比较,CAD的灵敏度为ELSD的3.0倍,线性范围比ELSD高2个数量级,并且CAD的响应因子比ELSD更具有一致性。
2实验部分
2.1仪器和试剂
Ultimate 3000液相色谱(美国赛默飞世尔科技公司)配备Corona Ultra电雾式检测器及Chromeleon 7.1色谱工作站,Waters Acquity UPLC(美国沃特世公司)配备Acquity ELSD检测器及Empower 2.0色谱工作站,XS205D型分析天平(德国梅特勒托利多公司),DGG9023A型电热恒温箱(上海森信实验仪器有限公司)。胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆酸标准品、牛胆粉、羊胆粉、熊胆粉、猪胆粉(中国食品药品检定研究院); 乙腈(色谱纯,美国Honeywell公司), 冰醋酸、NaOH、HCl(分析纯,国药集团化学试剂有限公司)。
2.2标准溶液的配制
2.3样品前处理
3结果与讨论
3.1色谱条件优化
胆汁酸的极性较大,选择对极性化合物具有较强保留的Waters HSS T3色谱柱,使用梯度洗脱方式可以实现5种胆汁酸完全分离,且该色谱柱的柱流失较低,可以降低基线噪音,适用于通用型检测器ELSD和CAD(见图1)。胆汁酸为酸性化合物,使用0.1%冰醋酸作流动相可抑制胆汁酸电离,使其在反相色谱柱中获得更好的保留效果。该色谱条件与质谱兼容,对于复杂样品也可直接转移至质谱分析[12]。
相关文章!
  • 改进演示实验,提高演示实验教

    曹雪梅众所周知,化学是以实验为基础的学科.实验是化学的灵魂,也是提高学生学习兴趣的主要因素.教学实践证明,化学实验教学可以让学生

  • 素质教育在中职教育中的重要性

    杨天摘要:进入21世纪之后,素质教育已经成为全社会非常关注的一个重要话题。而在职业教育中,许多学生和家长错误的认为职业教育的本质就

  • 质谱法测定水中溶解氙的含量及

    李军杰+刘汉彬 张佳+韩娟+金贵善+张建锋<br />
    <br />
    <br />
    <br />
    摘要 利用设计的一套水样中提取并分离Xe的装置,与稀有气体质谱