自体富血小板凝胶在老年烧伤患者整复治疗中对创面愈合及肉芽组织特异性蛋白表达的影响
杨景军 陈航 魏子人 彭正进
[摘要]目的：探究自體富血小板凝胶在老年烧伤患者美容整复治疗中对创面愈合及肉芽组织特异性蛋白表达影响。方法：选取2017年9月-2018年9月于笔者医院就诊的老年烧伤患者120例，依据治疗方式不同分为观察组和对照组，各60例。对照组采用常规治疗，观察组在对照组基础上使用自体富血小板凝胶（autologous platelet-rich gel，APG），观察两组患者创面愈合时间与创面愈合率，评定创面疼痛、瘢痕增生情况、并发症发生率及复发率，治疗后疗效及皮片/皮瓣成活率，肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、IL-8、γ干扰素（INF-γ）等炎症因子变化，比较肉芽组织特异性蛋白SDF-1α、VEGF、CXCR4蛋白表达情况。结果：观察组创面愈合时间、并发症发生率、复发率、疼痛视觉模拟评分（Visual analogue scale，VAS）、温哥华瘢痕量表（Vancouver scar scale，VSS）及曼彻斯特瘢痕评定量表（Matching assessment of photographs and scars，MAPS）评分均低于对照组，观察组创面愈合率、总有效率、皮片/皮瓣成活率高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。治疗后观察组TNF-α、IL-1β、IL-8和INF-γ水平降低，且低于对照组;观察组SDF-1α、VEGF、CXCR4蛋白表达明显高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：APG能够加速创面愈合，减少愈合所需时间，促进肉芽组织特异性蛋白表达，对于老年烧伤患者美容整形修复具有促进作用，疗效可靠。
[关键词]自体富血小板凝胶;老年烧伤患者;美容修复;创面愈合;肉芽组织;特异性蛋白表达
[中图分类号]R622 ? ?[文献标志码]A ? ?[文章编号]1008-6455（2019）12-0083-05
Effect of Autologous Platelet-rich Gel on Wound Healing and Granulation Tissue Specific Protein Expression in Elderly Burn Patients Treated by Cosmetic Therapy
YANG Jing-jun，CHEN Hang，WEI Zi-ren，PENG Zheng-jin
（Department of Burn Plastic Surgery，Mianyang People's Hospital，Mianyang 621000，Sichuan，China）
Abstract： Objective ?To investigate the effect of autologous platelet-rich gel on wound healing and granulation tissue-specific protein expression in elderly burn patients. Methods ?120 patients in our hospital from September 2017 to September 2018 were divided into two groups according to the random numerical table method. The patients in the control group were treated with routine therapy and the patients in the observation group were treated with autologous platelet-rich gel （APG）， on the basis of the control group. The wound healing time， wound healing rate， wound pain， scar hyperplasia， complications and recurrence probability， curative effect and survival rate of skin graft and skin flap were observed in the two groups， and the wound healing time， wound healing rate， wound pain， scar hyperplasia， complications and recurrence probability were compared between two groups. Inflammatory factors such as tumor necrosis factor-α （TNF-α）， interleukin-1β （IL-1β） and IL-8， interferon -γ（INF-γ） were changed to compare the expression of SDF-1α， VEGF， CXCR4 protein in granulation tissue. Results ?The wound healing time， complication rate， recurrence rate， VAS score， VSS and MAPS score of the observation group were lower than those of the control group， the wound healing rate， total effective rate and skin/flap survival rate of the observation group were higher than those of the control group， the differences were statistically significant（P<0.05）. After treatment， the levels of TNF -α， IL-1β， IL-8 and INF -γ in the observation group were lower than those in the control group， and the expressions of SDF-1α， VEGF and CXCR4 in the observation group were significantly higher than those in the control group（P<0.05）. Conclusion ?APG can accelerate wound healing， reduce healing time and promote the expression of granulation tissue-specific protein.
Key words autologous platelet-rich gel; elderly burn patients; cosmetic repair; wound healing; granulation tissue; specific protein expression
烧伤是日常生活中常见损伤之一，随着社会人口老龄化的不断发展，老年烧伤患者占据比例不断增加[1]。随着年龄的增长，老年患者抵抗力变差，各器官功能逐渐减弱，对于创面的修复力减弱[2]，烧伤给患者带来严重心理负担，精神上遭受痛苦，烧伤美容是目前常用技术，但是老年患者存在烧伤愈合缓慢、皮肤松弛、治愈率低、死亡率高等因素[3]，单纯美容修复治疗不能满足患者的需求。自体富血小板凝胶（autologous platelet-rich gel，APG）作为一种新兴的慢性创面治疗药物，含有浓度较高的各种生长因子，能够加速受伤组织的快速修复，促进其再生与愈合[4-5]。目前APG在烧伤美容整复治疗国内外已有文献报道[6-7]，但是在老年烧伤患者中的应用研究较少。为探究APG应用于老年烧伤患者美容整复治疗中对创面愈合及肉芽组织特异性蛋白表达的影响，本研究在老年烧伤患者美容整复治疗中应用APG，现将结果报道如下。
1 ?资料和方法
1.1 一般资料：选取2017年9月-2018年9月于笔者医院就诊的老年烧伤患者120例，依据治疗方式不同分为观察组和对照组各60例，其中对照组患者采用常规方法处理，观察组患者在对照组基础上使用APG。观察组：男25例，女性35例，平均年龄（65.92±10.04）岁，轻度烧伤15例，中重度烧伤45例;对照组：男21例，女39例，平均年龄（67.18±8.98）岁，轻度烧伤17例，中重度烧伤43例。两组患者性别、年龄、烧伤程度等一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性，详见表1。本研究通过医院伦理委员会审核、批准。
1.2 纳入及排除标准：纳入标准：①符合老年烧伤伤情诊断标准者[8];②烧伤后需要进行美容整复手术者;③年龄≥50岁者;④近6个月未服用免疫抑制剂类药物者;⑤重要器官无严重器质性疾病者;⑥无读写障碍者;⑦患者及家属同意参与本研究，并签署知情同意书。
排除标准：①患有心、肾等其他严重疾病或合并其他疾病者;②存在沟通障碍，不参与配合者;③患有精神疾病者;④凝血功能障礙者;⑤免疫系统疾病及患有肿瘤者。
1.3 方法
1.3.1 APG制备：按照老年烧伤患者创伤面积大小抽取一定量的静脉血，并将抽取的静脉血置于含有1ml枸橼酸钠的15ml离心管中，2 000rpm离心10min，离心后取上层血清和红细胞转移至另一干净离心管中，3 500rpm再次离心10min，弃去上层未沉淀的血浆层，下层剩余血浆及血细胞等成分即为富血小板血浆，之后按照1：9的比例，将富血小板血浆与10%的CaCl2混合即为制备的APG。将制备好的APG放置于-20℃冰箱保存备用。
1.3.2 治疗方法：两组患者按照常规方法对烧伤创面进行简单清创处理，在止血带作用下彻底洗净创面表面的分泌物和脓痂，对于已经形成肉芽组织进行切除，削除其坏死组织、纤维基底板，直至正常健康的深筋膜浅层或脂肪浅层，利用仪器将创面修正平整，仔细进行止血并将残留物彻底清洗干净。鼓式取皮机取患者中厚区皮片并移植至受区，使用3-0丝线进行严密缝合，利用凡士林松散湿纱布、无菌敷料包将创口包扎，每天换药1次，直至伤口完全愈合，同时给予活血、抗感染、对症、营养等治疗。观察组患者在此基础上给予APG治疗，根据烧伤创面大小，使用适量的APG涂布于创面，使用单层凡士林纱布包扎伤口，每天换药1次，直至伤口完全愈合。
1.3.3 评价指标
1.3.3.1 创面愈合时间比较：从手术结束后，开始统计两组患者创面愈合所需时间。
1.3.3.2 创面愈合率比较：统计治疗7d、14d、21d后，两组患者创面愈合率。
1.3.3.3 创面疼痛情况：采用疼痛视觉模拟评分（Visual analogue scale，VAS）[9]，分数越高，表示疼痛级别越高，在治疗前后由患者自主填写，评分范围0～10分。
1.3.3.4 瘢痕增生情况：采用温哥华瘢痕量表（Vancouver scar scale，VSS）[10]，分别在治疗后7d、14d对患者进行随访调查，询问瘢痕增生情况，评价范围包括色泽、柔韧度、厚度、血管分布，分数越高，瘢痕增生越严重，评分范围0～15分。
使用曼彻斯特瘢痕评定量表（Matching assessment of photographs and scars，MAPS）[11]，于治疗后7d、14d对患者进行评价，该量表包含色泽、颜色、厚度、边缘高度以及瘢痕表面，色泽分数为1～3分，其余为1～5分，评分范围5～23分，分数越高，瘢痕越严重。
1.3.3.5 并发症情况：统计两组患者出现感染、囊肿、过敏、积液等并发症发生及复发情况。
1.3.3.6 临床疗效：比较两组患者经治疗后疗效，显效：创面基本愈合，肉芽组织生长良好;有效：创面出现愈合，肉芽组织有生长;无效：创面无愈合，肉芽组织无生长。比较皮片、皮瓣成活率。
1.3.3.7 炎症因子水平：治疗前后在患者空腹状态下抽取4ml肘静脉血，以离心半径13cm，转速2 000r/min离心10min，取上清液即血清。利用酶联免疫吸附测定法（ELISA）试剂盒检测血清中的肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-8、γ干扰素（interferon-γ，INF-γ）等炎症因子水平，ELISA试剂盒由上海润裕生物科技有限公司生产，严格按照试剂盒说明书操作。
1.3.3.8 肉芽組织特异性蛋白SDF-1α、VEGF、CXCR4表达情况：分别取患者治疗后7d创面肉芽组织细胞进行裂解，利用Western blot方法检测蛋白表达情况，将裂解的蛋白离心，提取总蛋白，利用SDS-PAGE胶进行电泳，将得到的条带进行转膜，利用硝酸纤维素膜孵育鼠源的SDF-1α、VEGF、CXCR4一抗，4℃孵育过夜，利用PBS缓冲液冲洗3次，每次10min，之后孵育二抗1h，PBS缓冲液冲洗3次，每次10min。利用发光液处理PBS缓冲液清洗过的硝酸纤维素膜，进行显影、定影。扫描胶片，Image J处理条带灰度值。
1.4 统计学分析：所有研究数据均在SPSS 19.0软件上运行处理，治疗前后计量资料用平均数±标准差（x?±s）表示，符合正态分布的数据组间比较采用t检验，不符合正态分布数据比较采用Mann-Whitney秩和检验;计数资料用百分数（%）表示，组间比较采用χ2检验。检验标准设置为P<0.05。
2 ?结果
2.1 两组创面愈合时间比较：观察组患者创面愈合时间为（13.85±3.15）d，明显低于对照组的（15.72±2.99）d，差异具有统计学意义（t=-3.335，P<0.05）。
2.2 两组创面愈合率比较：随着治疗时间的增加，两组患者创面愈合率逐渐增加，并且观察组创面愈合率一直高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）
2.3 两组VAS、VSS、MAPS评分比较：两组患者治疗前VAS评分、治疗后7d VSS及MAPS评分比较，差异无统计学意义（P>0.05）;治疗后两组患者VAS评分均降低，且观察组低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;治疗后14d，两组患者VSS及MAPS评分均降低，且观察组低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。
2.4 两组并发症发生率与复发率比较：观察组并发症发生率（10.00%）与复发率（6.67%）明显低于对照组（25.00%，20.00%），差异具有统计学意义（P<0.05），见表4。
2.5 两组疗效及皮片/皮瓣成活率比较：治疗后，观察组患者总有效率91.67%显著高于对照组76.67%，且观察组患者皮片或皮瓣成活率88.83%显著高于对照组71.67%，差异均具有统计学意义（P<0.05）
2.6 两组治疗前后炎症因子水平比较：两组患者治疗前TNF-α、IL-1β、IL-8和INF-γ水平比较差异无统计学意义（P>0.05），治疗后两组患者TNF-α、IL-1β、IL-8和INF-γ水平出现降低趋势，且观察组低于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。见表6。
2.7 肉芽组织特异性蛋白SDF-1α、VEGF、CXCR4表达：治疗后7d，观察组SDF-1α、VEGF、CXCR4蛋白表达明显高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）
3 ?讨论
烧伤不仅仅只是肌肤表皮受损，其还可以导致机体出现应激反应，免疫系统紊乱[12-13]。老年人由于机体自我调节能力降低，免疫力薄弱，更易遭受烧伤的伤害。生活中多种因素能够导致老年烧伤，并且老年患者烧伤后愈合速度慢，死亡率高，可产生较多并发症，病情隐秘不易被发现，严重威胁着老年患者的身体健康[9]。机体受到伤害后，细胞释放炎症因子、磷脂酶等因子，机体长时间处于应激状态，严重影响着老年患者的病情发展，给烧伤的诊治带来严重困扰。烧伤患者丧失一定的劳动力给生活带来严重困难，其心理长时间处于自悲状态，影响着患者与外界的交流[10，14]。目前，美容整复治疗法是治疗老年烧伤的常用方法，其可以通过保守治疗的方式，如彻底清除坏死组织，换药、保痂等，继而选择合适的皮肤组织进行植皮修复等，可促进老年患者烧伤创面的恢复。由于老年人免疫力差，机体自我调节能力有限，对于整复治疗后存在一定的免疫排斥，对烧伤创面的愈合产生副作用。APG是由患者外周静脉血经一系列的离心、浓缩等步骤得到的富含血小板的血浆，之后再按照一定的比例与CaCl2混合获得的[11，15]。APG取自患者本身，且富含大量的生长因子，可以减少老年患者排斥反应，降低炎症因子，促进烧伤部位的恢复。
本研究结果表明，使用APG后，观察组患者创面愈合时间较对照组短，创面愈合率显著提高，提示APG具有促进创面愈合作用。APG能够提高组织的再生与愈合，广泛应用于整形外科、创伤外科，APG为血小板的浓缩物，其中含有大量的生长因子和纤维蛋白，且生长因子来源于患者自身，各种生长因子与纤维蛋白共同作用，促进创面的愈合[16]。APG在制作过程中含有大量的凝血酶，具有收缩创面、抗凝血的作用，促进创面的闭合[17]。本研究结果显示经治疗后VAS、VSS、MAPS评分逐渐降低，且观察组比对照组降低明显，提示APG能够提高患者的适应性，满足患者的心理满足感，促进患者烧伤部位的痊愈。APG临床安全性高，与外界免疫排斥小，取材简单易得，医疗成本低，患者易于接受，APG含有的生长因子bEGF能够促进细胞分裂，调节细胞代谢，促进血管生成，EGF可以调节创面修复的各个过程，各种生长因子与纤维蛋白共同促进创面与瘢痕的消失[18]。本研究结果显示，治疗后患者的炎症水平逐渐降低，观察组低于对照组，提示APG含有的纤维蛋白，能够修复细胞，促进细胞的再生，能够加速凝血，降低炎症，预防感染。同时APG含有少量的单核细胞和白细胞，可以减少感染的发生[19-20]。本研究结果显示，美容整复治疗中加入APG后患者并发症发生率降低，疗效及皮片/皮瓣成活率大幅提高，提示APG能够加快创面愈合，降低并发症的产生，APG含有高浓度的生长因子，多种生长因子共同调节机体的康复，其还具有黏合性，可降低血小板的流失，长时间维持生长因子的稳定性，药效更加持久，防止复发的产生。生长因子的浓度与患者机体全血比例相当，减少并发症的产生，提高皮瓣、皮片的成活率。同时APG可以降低疼痛因子的释放，减轻患者疼痛感[21]。本研究结果显示，添加APG后，肉芽组织特异性蛋白SDF-1α、VEGF、CXCR4蛋白表达明显升高，提示APG具有促进肉芽组织蛋白表达作用，APG中含有的VEGF可以诱导微血管内皮细胞入侵胶原凝胶，促进肉芽组织的生长，SDF-1α、VEGF、CXCR4是肉芽组织的特异性蛋白，其在调节机体免疫应答中处于重要地位，加入APG后能够促进机体增强、调节免疫应答，促进细胞的增殖分化，合成各种生长因子与纤维蛋白，诱导成骨，加速新血管的生成，促进肉芽组织增生，促进创面愈合[22]。
綜上所述，APG能够促进老年患者烧伤创面的愈合，减低创面炎症因子，避免并发症的产生，提高肉芽组织特异性蛋白的表达，促进细胞分裂，加速新血管的形成，促进创面愈合，易于患者接受，提高患者生活质量，值得在临床推广使用。
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[收稿日期]2019-04-28
本文引用格式：杨景军，陈航，魏子人，等.自体富血小板凝胶在老年烧伤患者整复治疗中对创面愈合及肉芽组织特异性蛋白表达的影响[J].中国美容医学，2019，28（12）：83-87.
