低盐养殖对白甲乌鳢生长、成活及肌肉营养的影响
胡燕冰 陈思敏 施蕾 臧蔓 林丽玲 杨俊帆 陈泽滨 钱高明 雷明强 黄伟卿
摘 要：采用低盐度5‰和10‰养殖淡水鱼白甲乌鳢（Opniocepnalus argus var Kimnra），探究盐度胁迫对淡水鱼类生长、成活和肌肉营养的影响，通过为期65 d的养殖，结果显示：养殖成活率随着盐度的升高而显著提高（P<0.05），但生长速度随着盐度的升高而显著降低（P<0.05）;在盐度10‰下养殖白甲乌鳢，肌肉中的氨基酸总量占（10.50±1.9）%，必需氨基酸（3.69±1.3）%和呈味氨基酸（4.48±0.7）%均高于对照组，肌肉中脂肪酸EPA+DHA含量（2.5±0.2）%，显著高于对照组（P<0.05）。结果显示将白甲乌鳢置于低盐度（10‰）下养殖，有助于提高养殖成活率和改善肌肉营养。
关键词：白甲乌鳢（Opniocepnalus argus var Kimnra）;低盐养殖;成活率;生长;肌肉营养
白甲乌鳢（Opniocepnalus argus var Kimnra）俗称白乌鱼、白乌棒等，是鳢形目鳢科的一种。具有体色白，身体呈棒形，头部扁平，头部鳞片较大，尾部鳞片细的生物学特征。因其肉质鲜美[1]、细刺少、营养丰富[2]，特别是具有高蛋白质、微量元素、氨基酸和低脂肪的特性，及具有促进伤口愈合、活血生肌、祛湿利尿、催乳等药用价值，常被用作广大伤病患者、术后、产后的食疗最佳补品，在四川当地具有非常好的口碑[3]。
目前已经有许多实验表明盐度对水生生物的生长发育、繁殖、免疫水平、能量代谢、成活率和肌肉营养等诸多方面都会产生一定程度的影响[4]，由此可见盐度是影响水生生物养殖的重要因素之一。关于盐度胁迫对水产动物肌肉营养的影响，目前常见于降低海水鱼类的盐度对其影响方面研究。黄伟卿等[5]研究结果表明，降低养殖盐度，能够提升大黄鱼肌肉营养价值。在低盐养殖黑鲷的实验中贾超峰等[6]研究结果表明，低盐组的风味虽不及海水组，但蛋白质组成对人体更好且口感更好。成永洲[7]对斜带石斑鱼幼鱼的研究实验表明，不同盐度人工海水对斜带石斑鱼幼鱼肌肉水分、粗蛋白和粗灰分均无显著性影响，而能够显著影响肌肉粗脂肪、氨基酸组分及脂肪酸组分。康自强[8]的研究表明盐度可改善星洲红鱼的肌肉品质以及风味。而关于盐度胁迫对淡水鱼类白甲乌鳢的生长情况及肌肉营养成分的影响，截至目前还没有见到相关的研究，本试验旨在探寻盐度胁迫对白甲乌鳢的生长情况和肌肉营养的影响，为在沿海推广白甲乌鳢养殖提供理论基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验鱼 试验用鱼购自于四川内江鲍家庄农场，选择体表健康、活力强，平均全长（8.0±0.5）cm、平均体长（7.5±0.5）cm、体重（4.3±0.3）g的白甲乌鳢，试验前先进行消毒清洗再用试验基地养殖用水适应半小时后，放入养殖桶（规格1.5 t）中养殖。
1.1.2 养殖用水 对照组养殖用水采用自来水经24 h以上曝气后使用。试验组养殖用水采用海区海水（盐度23‰）与经24 h曝气的自来水配置成相关盐度养殖用水。
1.2 试验设计与饲养管理
1.2.1 试验设计 试验组盐度分别为5‰（S5）、10‰（S10），并设置对照组盐度0（S0），每组设置3个平行组，各组养殖密度为15尾/m3。试验组升盐速率为0.5‰/d，直到达到试验盐度。试验周期64 d。
1.2.2 饲养管理 饲喂饵料为淡水鲫鱼肉，每天投喂饲料两次，每次投喂量为鱼体体重的10%。定期清理残饵和粪便，每天换水一次，换水量为50%。同时捞出死鱼，并做好养殖记录。
1.2.3 测量与检测 各试验组取30尾白甲乌鳢，采用直尺（最小量程0.01 cm）测量全长、体长，并用电子天平（最小量程：0.1 g）测量其体重，然后将每组试验组取200 g肌肉委托福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所进行水分（GB 5009.3-2016）、粗蛋白（GB 5009.5-2016）、脂肪（GB 5009.6-2016）、灰分（GB 5009.4-2016）、氨基酸（GB 5009.124-2016）和脂肪酸（GB 5009.168-2016）成分检测。
1.3 数据分析与营养价值评定方法
生长性能指标统计根据黄伟卿等[9]的统计方法进行，公式如下：
成活率=N/n×100%
體重绝对增加率（g/d）=（m2-m1）/（t2-t1）
绝对增长率（cm/d）=（L2-L1）/（t2-t1）
增积量=（m2-m1）×（L2-L1）/（t2-t1）2
肥满度=m/L3×100
式中：N为终末幼鱼数，尾;n为初始幼鱼数，尾;m为体重，g;L为体长，cm;m1为时间t1时的体重，g;m2为时间t2时的体重，g;L1为时间t1时的体长，cm;L2为时间t2时的体长，cm。
根据氨基酸评分标准模式[10-11]和全鸡蛋蛋白质的化学评分模式[12]进行肌肉营养价值评定。使用以下三个公式分别计算氨基酸评分（AAS）、化学评分（CS）和必需氨基酸指数（EAAI）：
AAS=待测样本中氨基酸的含量（mg/g pro）÷FAO/WHO评分模式中同种氨基酸的含量（mg/g pro）
CS=待测样本中氨基酸的含量（mg/g pro）÷全鸡蛋蛋白质中同种氨基酸的含量（mg/g pro）
EAAI=nLys（t）×100…Val（t）×100Lys（s）×…×Val（s）
式中：n为比较必需氨基酸的总个数;t为待测样品中蛋白质必需氨基酸的含量;s为全鸡蛋蛋白质中的必需氨基酸含量;Lys为赖氨酸，Val为缬氨酸。
1.4 数据处理
试验数据使用IBM SPSS Statistics 23软件进行统计分析处理，使用单因素方差分析（ANOVA，Duncan's） 对试验结果进行显著性差异分析，试验数据用（平均值±标准差）对数据进行表示。
2 结果
2.1 对成活率及生长的影响
隨着盐度的升高，白甲乌醴养殖成活率显著提高（P<0.05），试验组S10成活率最高，达（49.6±6.7）%;对照组S0的生长性能体重绝对增长率[（0.13±0.09）g/d]、绝对增长率[（0.048±0.010）cm/d]和增积量（0.006 2±0.001 3）均显著高于试验组（P0.05），以试验组S10最小，为1.33±0.42（表1）。
2.2 对肌肉基础成分的影响
随着盐度的升高，白甲乌鳢肌肉脂肪酸和水分的含量降低，而灰分显著升高（P<0.05），蛋白质的含量试验组S10显著高于对照组S0（P0.05）（表2）。
2.3 对肌肉氨基酸组份及评价的影响
白甲乌鳢肌肉中的氨基酸总量在（9.13±1.8）%～（10.50±1.9）%之间，必需氨基酸的含量为（3.19±1.1）%～（3.69±1.3）%，呈味氨基酸的含量为（3.90±0.8）%～（4.48±0.7）%。试验组S10肌肉中的氨基酸总量、必需氨基酸含量、呈味氨基酸含量均高于对照组，而试验组S5肌肉中的氨基酸总量、必需氨基酸含量、呈味氨基酸含量均低于对照组（表3）。
白甲乌鳢肌肉EAAI指数对照组S0和试验组S10最大，为55，试验组S5最小。根据AAS评价模式，经过计算可得出在盐度分别为0、5‰和10‰下养殖的白甲乌鳢肌肉中不存在限制蛋白质的生物学价值的氨基酸;根据CS评价模式，S0、S5、S10组的限制氨基酸为亮氨酸、甲硫氨酸+半胱氨酸、缬氨酸和苯丙氨酸+酪氨酸（表4）。
2.4 对肌肉脂肪酸成分影响
白甲乌鳢肌肉中饱和脂肪酸主要成分为棕榈酸甲酯（C16：0），不饱和脂肪酸的主要成分为油酸甲酯（C18：1n9c） 和亚油酸甲酯（C18：2n6c）。根据统计，试验组S10和S5的饱和脂肪酸总含量 （∑ SFA） 以及单不饱和脂肪酸总含量（∑MUFA）均低于对照组S0，但差异不显著（P>0.05）。随着盐度的升高，白甲乌鳢肌肉中的EPA+DHA含量增加，以试验组S10达到最大，为（2.5±0.2）%，显著高于其他组（P<0.05）。盐度对n-3族脂肪酸基本没有影响，但S10组的n-6族脂肪酸明显高于对照组和S5，具有显著性差异（P<0.05）（表5）。
3 讨论
3.1 盐度胁迫对水产动物成活和生长的影响分析
水产动物在不同盐度环境中时，外界渗透压与体内相差较大，就需要花费大量能量用以维持体内渗透压平衡，不然极易造成动物体内渗透压失衡[13]，影响活力、摄食率等，导致死亡率上升[14]。杨琳[15]研究发现灰海马具有高渗透压调节能力，在低盐度下的生长表现和存活率都好于高盐度，在养殖过程中适当降低盐度对灰海马的存活和生长有促进作用。林先智[16]等人发现遮目鱼在盐度为10‰、20‰、27‰、35‰中存活率都在90%以上，且盐度35‰组存活率达到98.3%，盐度0组存活率只有73.3%。在低盐养殖罗氏沼虾的实验中，何竺柳[17]发现当盐度在0～14‰的范围内，盐度越高，罗氏沼虾的存活率也就越高，其中存活率最低的是盐度为0的对照组，而盐度为14‰的存活率最高。本试验中的白甲乌鳢是一种淡水鱼，每天将盐度上调0.5个千分点，直到盐度达到5‰和10‰，盐度稳定初始阶段因白甲乌鳢无法适应外界环境的变化，造成盐度组5‰和10‰的白甲乌鳢部分死亡，待养殖一段时间后，盐度组10‰中存活的幼鱼逐渐稳定渗透压平衡，适应了盐度变化，存活率趋于稳定并且存活率最高达到（49.6±6.7）%，0对照组中的白甲乌鳢在试验初期死亡率较低，待养殖一段时间后，鱼体表面出现一些肉绒毛团，且活动缓慢，肌肉僵硬，鱼体逐渐死亡[18]，这是由于水霉病的出现使得对照组中的鱼死亡数量逐渐增加，造成死亡率升高，但在盐度组5‰和10‰中并未出现水霉病的症状。这种现象同样出现在盐度对大黄鱼的影响中，黄伟卿[9]等人在大黄鱼的患病高发期进行了降盐，而低盐组没有出现因为寄生虫或细菌导致的死亡现象，这就导致海水组的成活率低于低盐组。由此可见低盐度可以通过抑制一些病原菌、寄生虫的生长使得水产动物的成活率升高。
有研究显示，当水生生物由于盐度的改变，使生物体内渗透压发生变化，生物会消耗大量能量使自身渗透压达到平衡状态，相应的如果生物处于等渗的环境条件下，用于调节渗透压平衡的能量也就较少，从而用于生长发育的能量也就变多了。通过对比分析本试验数据，白甲乌鳢对照组S0的生长性能体重绝对增长率、绝对增长率和增积量均显著高于试验组（P<0.05）。但盐度的升高，对肥满度的影响不显著。说明白甲乌鳢在对于盐度的适应过程中，需要提供大量能量维持正常的生命代谢，这与康自强[8]在盐度驯化试验中发现星洲红鱼在盐度小于5‰的环境中饵料系数小，渗透压耗能低，大部分能量用于生长，但随着盐度的升高绝对增长率逐渐降低的结论相同。大多数学者认为在低盐度环境下动物可将用于渗透平衡调节的能量用于生长，但盐度对于生长发育的影响可能还会通过摄食率、同化率[16]甚至还有虾类生物的蜕壳次数等因素来综合影响，例如，罗氏沼虾随着盐度的升高，生长速度明显变慢，这是因为虾蟹类的蜕壳也需要消耗一定能量[16];豹纹鳃棘鲈幼鱼相对于高盐度条件下， 盐度15‰条件下的摄食率较高[19]，杂交东方鲀在盐度30‰条件下摄食量和摄食率最大[20]， 在本试验中，对照组与其他盐度组对比来看，摄食量明显较大，较为活跃，生长较快，但在盐度组中，白甲乌鳢为了达到自身的渗透压平衡需要不断地吸收水分，排出盐分，所以食物在肠道中停留的时间较短，导致营养吸收率降低，生长缓慢[21]。因此在不同盐度条件下水产动物的生长性能不仅会被渗透调节所影响，一些生理行为也会对生长造成一定影响。
3.2 盐度胁迫对水产动物肌肉中基础成分的影响分析
盐度会影响水生生物肌肉的营养成分，为了探究水生生物的肌肉品质，我们可以分析肌肉的基本营养成分。在本试验中，各低盐组与对照组养殖白甲乌鳢肌肉中的基础成分含量都有一定程度的变化，但差异不明显，这说明在一定的盐度范围内，其基础成分含量并不会因为盐度的改变而产生显著性差异。这与黄伟卿等[5]对大黄鱼低盐养殖的研究基本一致，与贾超峰等[6]研究结果相同，其结果显示，低盐组和海水组黑鲷粗蛋白、水分、灰分含量无明显差异;与徐永健等[22]的研究结果一致，其结果显示，经过不同盐度处理养殖后，大海马幼体水分、粗蛋白、粗脂肪含量与对照组相比，均未出现显著性差异。
低盐组白甲乌鳢肌肉中的脂肪酸含量低于对照组，脂肪酸的变化与康自强[8]在研究盐度胁迫对星洲红鱼肌肉品质的影响中结果一致，其结果显示，脂肪酸含量随盐度的升高而降低。但又与其它一些鱼类的研究结果有所不同，如：吴益星等[23]的研究发现，肌肉的粗蛋白质和粗灰分含量分别显著高于和低于对照组（P0.05）;康自强[8]的研究发现随着盐度的升高，水分含量也会有所增加。本试验中，在一定范围内，升盐养殖下白甲乌鳢的肌肉水分含量有差异，这可能与白甲乌鳢在低盐养殖环境中的渗透压调节机制有关。不同种类的水生生物的生理生化及肌肉营养成分会随着盐度的变化而改变，这种变化可能还与低盐养殖的技术和环境条件有关，由本试验可得，白甲乌鳢幼鱼对盐度的耐受性较好，盐度对其肌肉的基本营养成分没有明显影响。
3.3 盐度胁迫对水产动物肌肉氨基酸成分的影响分析
在生物体生长发育过程中，氨基酸通常用于蛋白、酶类以及激素的合成，并用来维持生物体的氮平衡和毛细血管的氮平衡[24]。研究表明，氨基酸的种类和必需氨基酸的含量两大因素决定蛋白质的营养价值和优良程度[11]。根据FAO/WHO的理想模式，质量较好的蛋白质其组成的氨基酸的EAA/TAA为40%左右，本试验中，各种盐度条件下养殖的白甲乌鳢中氨基酸的组成都符合上述指标的要求，EAA/TAA和DAA/TAA各组都没有明显差异，其中，EAA/TAA在（35±2）%，接近40%，符合FAO/WHO的理想模式[25]，这说明，在一定盐度范围内，白甲乌醴肌肉中的必需氨基酸组成成分都很平均且含量较高。
研究结果显示，低盐组S10的白甲乌鳢，其肌肉中的各种氨基酸含量均高于对照组，这一结果与淡水鱼异育银鲫（Carassius auratus gibelio）[26]和大黄鱼[9]进行低鹽养殖时肌肉中的氨基酸含量均高于传统养殖的结果一致。其中甘氨酸[25]、丙氨酸[26]和精氨酸[27]等氨基酸是参与渗透压调节的重要因子，黄伟卿等[9]在低盐养殖大黄鱼的研究中发现低盐组大黄鱼肌肉中的Gly、Cys和Met含量均高于正常养殖的组别，说明这3种氨基酸有可能调节了大黄鱼渗透压平衡。本试验的盐度范围内，不能看出具体有哪些氨基酸参与了白甲乌鳢的渗透压调节。
动物蛋白的口感在一定程度上取决于其呈味氨基酸的含量[28]。呈味氨基酸有Gly、Ala、Glu、Asp、Phe和Tyr，而其中鲜味最强的是谷氨酸。与对照组S0和低盐组S5相比，低盐组S10养殖的白甲乌鳢鱼体谷氨酸含量较高，而谷氨酸可以调节神经衰弱，对肝脏有一定的保护作用，肝脏又是鱼类脂肪酶的主要生产器官，可以通过消化脂肪为机体提供能量[8]。试验结果表明，低盐组S10呈味氨基酸和谷氨酸的质量分数分别为（4.48±0.7）%和（1.58±0.03）%，明显高于其它两组，说明低盐组S10养殖的白甲乌鳢味道最为鲜美。低盐组S5的呈特殊鲜味的氨基酸和谷氨酸的质量分数分别是（3.9±0.8）%和（1.35±0.02）%，都明显低于其它组，说明在一定的盐度范围内，盐度会造成白甲乌鳢的味道变差。
3.4 盐度胁迫对水产动物肌肉脂肪酸的影响分析
脂肪酸是人体主要的能量来源之一。但饱和脂肪酸过多对人体不利。而不饱和脂肪酸对血糖血脂有调节作用，可以作为评定食品品质的重要标志。本试验结果表明，不同盐度下养殖的白甲乌鳢肌肉中单不饱和脂肪酸都没有显著性差异（P>0.05）。而多不饱和脂肪酸中低盐组S10的C20：4n6c、C20：5n3c和C22：2n6c对比其他组具有显著性差异（P0.05）。低盐组S10的EPA+DHA对比其他组同样具有显著性差异（P<0.05）。这表明盐度在一定的范围内不会对白甲乌醴的脂肪酸造成明显影响，但会对部分多不饱和脂肪酸造成影响，适当提高盐度还能提高EPA+DHA含量。
多不饱和脂肪酸有利于水生生物对环境进行适应，可以维持水生生物的生物膜结构和功能，而鱼虾类细胞膜中的脂肪酸主要以DHA和EPA为主。其中何竺柳[17]的低盐养殖罗氏沼虾中EPA+DHA的含量具有明显的差异（P<0.05），呈先升高后下降的变化趋势。但在本试验中只有低盐组S10的EPA+DHA的含量显著高于其他组。这可能是因为在盐度10‰的情况下盐度胁迫对白甲乌醴的生物膜和功能有明显的影响，所以在体内储存或者产生了大量的EPA及DHA，用来应对不利的环境条件，维持机体细胞膜的结构及功能。
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Effect of low-salt culture on growth， survival and muscle nutrition of Opniocepnalus argus var Kimnra
HU Yanbing1，CHEN Simin1，SHI Lei1， ZANG Man1，LIN Liling1，YANG Junfan1，CHEN ZeBin1，QIAN Gaoming1，LEI Mingqiang1，HUANG Weiqing1，2
（1.Department of Bioengineering，Ningde Normal University，Ningde 352100， China;2.Ningde Dingcheng Fishery Company Limited，Ningde 352100，China）
Abstract：The freshwater fish Opniocepnalus argus var Kimnra was cultured at low salinities of 5‰ and 10‰ to investigate the effects of salinity stress on growth，survival and muscle nutrition of freshwater fish for 65 d. The results showed that the survival rate increased significantly（P<0.05） with increasing salinity，but the growth rate decreased significantly（P<0.05） with increasing salinity.The total amino acids （10.50±1.9）%， essential amino acids （3.69±1.3）% and taste amino acids （4.48±0.7）% in the muscles of Opniocepnalus argus var Kimnra cultured in salinity 10‰ were higher than those of the control group， and the content of fatty acids EPA+DHA （2.5±0.2）% in the muscles was significantly higher than that of the control group （P<0.05）.The results showed that the culture of Opniocepnalus argus var Kimnra in low salinity（10‰） helped to improve the survival rate of culture and improve muscle nutrition.
Key words：Opniocepnalus argus var Kimnra; low salt culture; survival rate; growth; muscle nutrition
（收稿日期：2021-03-22）
基金項目：福建省大学生创新项目“盐度胁迫对白甲乌鳢的影响分析”（项目编号：S202010398001）。
作者简介：胡燕冰（2000-），女，本科生，主要从事水产增养殖工作。E-mail：1832591552@qq.com。
通信作者：黄伟卿（1988-），男，工程师，主要从事水产增养殖工作。E-mail：393634584@qq.com。
