动物试验替代方法在兽用疫苗检验中的应用概况

    王林浩 刘兆霞

    摘要：本文首先从国际和国内两个角度分别分析了动物试验替代方法在兽用疫苗检验中的应用概况，其次从试验动物替代方法、血清学替代方法、疫苗抗原定量方法三个角度分析了动物试验替代方法在兽用疫苗检验中的应用方式，旨在为动物试验替代方法在兽用疫苗检验中的应用提供参考意见。

    关键词：动物试验;替代方法;兽用疫苗检验;应用

    中图分类号：S851.4?文献标识码：B文章编号：2095-9737（2020）01-0018-02

    在兽用疫苗检验中应用动物试验替代方法，目前已经成为了疫苗检验的发展趋势，但是动物试验替代方法在我国的应用发展速度较慢，其中最显著的便是体外抗原测定方法应用及检验产品研制的滞后，这导致部分兽用疫苗检验应用的仍然是传统检验方式，由此可见，动物试验替代方法的应用还需要进一步探索。

    1?动物试验替代方法在兽用疫苗检验中的应用概述

    1.1?国际应用概述

    早在1959年，便有英国动物学家提出了3R原则（减少、替代、优化），具体含义如下：减少科学研究活动的动物应用量，寻找能够替代传统检验方式的动物试验替代方法，优化动物试验方法来减轻试验动物痛苦。1978年，David Smyth 教授对3R进行了进一步概括，3R也成为了动物试验替代方法的研究核心和主要内容。国际上建立了很多研究机构，用来研究动物试验替代方法，同时投入了大量的资金和技术，以推动新技术的开发和应用。此外，很多发达国家制定了动物保护法来对动物试验进行约束，世界上第一个涉及到了试验动物保护条例的法律是英国在1876年颁布的《防止虐待动物法》[1]。

    1.2?国内应用概述

    我国关于动物试验替代方法的研究起步较晚，因此与国际上还存在较大差距，但是这种差距在逐渐缩小。我国第一次将3R纳入到法律文件中是1997年，并且将动物试验替代方法作为动物试验研究的重要部分，2001年，科学技术部指出，我国的动物福利保障制度与国际接轨，同时实现对试验动物的法制化管理。2006年，建立了中国替代方法研究评价中心，旨在为我国动物试验替代方法的研究提供平台。目前，3R在我国已经受到了广泛关注，同时有很多生命科学工作人员积极参与到了動物试验替代方法研发和应用中。

    2?动物试验替代方法在兽用疫苗检验中的应用方式

    2.1?试验动物替代方法

    目前，应用在兽用疫苗检验中的小型试验动物，如鸡、鼠、兔等，其供应量较为充足，实验人员获得试验动物的难度较低。但是一些大型试验动物，如猪、马、牛、羊等，一些特殊动物，如貂、狐等，实验人员获得试验动物的难度较高，实验人员通常需要到散养户或者是养殖场进行筛选，但这样筛选出来的动物严格意义上不能被称之为试验动物[2]。再加上国家针对重大动物疫病执行强制免疫制度，例如寻找猪蓝耳病抗体兽用疫苗检验试验动物，这便进一步增加了实验人员获得试验动物的难度。

    为此，实验人员便开始在兽用疫苗检验中试验动物替代方法，旨在通过小型动物来替代大型动物和特殊动物，以此来降低试验难度和试验成本，同时也是在践行3R原则中的“减少”标准。例如，在猪瘟兔化弱毒兽用疫苗检验中，可以以兔为试验动物，通过兔体定型热方式来代替阴性猪，这样不但能够减轻检验难度，提高检验效率，还能够减少病毒污染。在猪圆环病毒2型灭活苗检验中，可以以鼠、兔为试验动物，通过免疫试验方式来代替阴性猪，解决试验动物筛选难的问题。

    2.2?血清学替代方法

    在很多灭活苗兽用疫苗检验中，由于受到灭活加之佐剂的影响，应用半数感染量方法测定抗原滴度的难度较高，为此，很多灭活苗兽用疫苗检验需要应用本动物攻毒法检验方式。但是这种检验方式的应用不符合3R原则，同时饲养试验动物的难度较大，需要严格处理动物粪便和尸体，以此来预防病原菌污染。

    为此，针对部分灭活苗兽用疫苗检验工作，应用了血清学替代方法，具体是采集应用了疫苗的动物的血清，测定其特异性抗体滴度，将滴度作为疫苗效果的检验指标。血清学替代方法的应用能够避免病原菌污染，还能够避免给试验动物带来痛苦。从疫苗检验的角度而言，血清学替代方法的应用能够实现对攻毒实验的定量判断，能够更好的评估疫苗检验效果，而血清易保存的特点还降低了检验难度。例如，在鸡新城疫、减蛋综合征二联灭活疫苗疫苗检验中，应用血清学替代方法，检验效果视免疫鸡血清中HI抗体效价而定。

    2.3?疫苗抗原定量方法

    抗原含量是兽用疫苗检验效果的直接决定因素，目前，体外抗原定量方式在活疫苗检验中的应用已经取得了显著效果，并且已经成功取代了免疫攻毒方式，具体的抗原定量方式有：通过培养微量细胞来观察细胞病变，并计算细胞培养物的半数组织培养物感染量;通过免疫荧光方式计算半数感染量，此方式只适用于不致细胞病变抗原定量;部分病毒会在细胞单层上留下蚀斑，利用这一特性，可以通过计算蚀斑方式来计算疫苗蚀斑形成数量;通过计算活菌方式来计算菌落形成数量，此方式只适用于细菌活疫苗抗原定量。疫苗抗原定量方法在兽用疫苗检验中应用，能够最大限度的做到动物试验替代，不但符合3R原则，还能够节省检验成本和时间[3]。

    3?结束语

    在兽用疫苗检验中应用动物试验替代方法最关键的便是要建立传统检验方法和替代检验方法的平行关系，并且需要在不同批次产品之间来回确认，同时应用统计学理论对两种检验方式进行相关性分析，以此来确保两种检验方式检验效果的一致程度，同时建立起动物试验替代方法在兽用疫苗检验中的应用标准。

    参考文献：

    [1] 王晓卉，李翠，蒋卉，等.动物试验替代方法在兽用疫苗检验中的应用概况[J].中国兽药杂志，2015（04）：60-64.

    [2] 农业部.兽用疫苗生产企业生物安全三级防护标准[J].江西畜牧兽医杂志，2017（05）：39-43.

    [3] 陈永僩，倪亚玮.美国兽用疫苗生产及管理[J].兽医药品通讯，1986（03）：43-44.