三种不同规格大菱鲆血常规分析

    原永珠　任海　高桂生　徐晨曦　陈秀玲　靳晓敏　房海

    

    摘要：通过人工方法结合Pentra 120血细胞分析仪检测三种不同规格大菱鲆（Scophthalmus maximus）重要血液生理指标以期探讨大菱鲆不同生长阶段血液指标特点。结果显示：350 g組大菱鲆粒细胞绝对值、中间细胞百分比、粒细胞百分比显著高于70 g组（P<0.05）;70 g组大菱鲆淋巴细胞百分比显著高于350 g组（P<0.05）;血红蛋白含量、红细胞压积与鱼体规格正相关且350 g组与20 g组间红细胞压积差异显著（P<0.05）、血红蛋白含量差异极显著（P<0.01）;三种不同规格大菱鲆间血栓细胞系各项指标无显著性差异。由此可知因大菱鲆红细胞系及白细胞系部分血液指标在不同规格间存在着不同程度的差异难以得出正常参考范围;血栓细胞系受鱼体规格影响较小可作为大菱鲆血液常规指标基础参考数据。

    关键词：大菱鲆（Scophthalmus maximus）;血液指标;血常规分析

    大菱鲆（Scophthalmus maximus）属硬骨鱼纲鲽形目鲆科俗称欧洲比目鱼在中国又被称为“多宝鱼”[1]。 自1992年被引入我国以来因其生长速度快、易于进行大面积工厂化养殖等特点深受我国北方沿海养殖者的喜爱并迅速成为主要海水养殖品种[2]。近年来随着养殖密度的不断增大其病害问题也越来越严重为了更准确地监测鱼类的健康状况对其血液生理生化指标的研究受到广大学者的关注。

    血液是人和动物机体中重要的组成部分鱼体血液中各指标的动态变化反映着鱼体自身机能或外界环境的改变对评价鱼体健康、营养状况及新陈代谢等都具有重要意义[3-4]。当鱼体受到外界环境影响时其血液生理生化指标也会发生变化因此血细胞分析常被用来评价鱼体的健康、营养状况以及鱼体对环境的适应情况等。近年来关于影响鱼类血液生理指标变化因素的报道越来越多[5-6]但尚缺乏对大菱鲆血常规指标的分析。为了填补该空白本试验针对三种不同规格大菱鲆的19项血常规指标进行检测分析旨在探讨大菱鲆不同生长阶段血液指标的特点为其疾病诊断提供参考依据同时为鱼类血液学、细胞学研究提供基础资料。

    1材料与方法

    1.1试验材料

    取健康状态下不同规格大菱鲆（20、70、350 g）各5尾为试验用鱼鱼体规格分别为：20 g组：全长约10 cm平均体质量20 g;70 g组：全长约15 cm平均体质量70 g;350 g组：全长约28 cm平均体质量350 g。

    1.2试验方法

    1.2.1血常规检测自每尾试验用鱼尾静脉各采取血液1 mL分别置于抗凝管中混匀用人工方法[7]结合Pentra 120血细胞分析仪检测不同规格大菱鲆的红细胞系、白细胞系、血栓细胞相关血常规指标。

    1.2.2试验数据处理将所测数据归纳整理用SPSS 22.0软件求其均值和标准差并通过独立性T检验分析各组间的差异显著性以探讨大菱鲆不同生长阶段血液指标特点。

    2结果

    2.1三组不同规格大菱鲆白细胞相关血液指标

    由表1可见白细胞系相关指标中350 g组粒细胞绝对值、中间细胞百分比、粒细胞百分比均显著高于70 g组（P<0.05）350 g组淋巴细胞百分比显著低于70 g组（P<0.05）其他指标组间差异均不显著（P>0.05）。

    2.2三组不同规格大菱鲆红细胞相关血液指标

    由表2可见350 g组大菱鲆血红蛋白含量、红细胞压积显著高于20 g组（P<0.05）其中350 g组与20 g组血红蛋白含量差异极显著（P<0.01）其余指标各组间无显著性差异。

    2.3三组不同规格大菱鲆血栓细胞相关血液指标

    三组不同规格大菱鲆血栓细胞系组间各项指标均无显著性差异（P>0.05）详见表3。

    3讨论

    3.1大菱鲆白细胞相关血液指标分析

    白细胞是鱼体主要的免疫细胞与机体的防御功能密切相关随着鱼体增长或外界环境的变化白细胞数目也在不断变化。孟繁伊等[8]研究表明1～4龄花羔红点鲑体内白细胞数量逐渐递增。此外孟繁伊等[8]还发现1龄鲤血液中首次出现嗜中性粒细胞而在2龄鲤血液中才出现嗜酸性粒细胞。周雪莹等[9]表明大菱鲆的粒细胞中只含有嗜中性粒细胞不含有嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞;本次试验结果显示350 g组粒细胞绝对值、粒细胞百分比均显著高于70 g组（P<0.05）而与20 g组无明显差异（P>0.05）这可能就是因为不同种类的粒细胞在大菱鲆体内出现的时期不同所致但本次试验所用血细胞分析仪为三分型未对粒细胞进行详细分类因此具体原因仍有待探索。本次检测结果中出现了三组不同规格大菱鲆淋巴细胞绝对值和中间细胞绝对值组间差异不显著（P<0.05）但350 g组与70 g组淋巴细胞百分比与中间细胞百分比却差异显著的现象（P>0.05）这可能是因为受白细胞系内其它指标的影响导致不同组间淋巴细胞与中间细胞在所有白细胞中出现的比列差异显著也可能是因为鱼体尚处于发育阶段机体还未成熟细胞受分裂周期的影响在数量上浮动较大所致。

    3.2大菱鲆红细胞相关血液指标分析

    红细胞是鱼体内含量最多的细胞。臧坤等[10]表明牙鲆体内红细胞数显著高于白细胞数。本次试验结果显示不同规格大菱鲆体内红细胞的数量亦高于血栓细胞和白细胞。由此可见不同品种鱼类的血常规指标存在相似性。血液中红细胞对氧气的运输主要依托血红蛋白来完成红细胞的数量与血液携带氧气的能力正相关[11-12]。本次试验结果显示350 g组血红蛋白含量极显著高于20 g组（P<0.01）这可能是因为体格较大的大菱鲆体内气体交换量也大为了提高载氧效率机体会产生相对较多的红细胞和血红蛋白以保证呼吸运动正常进行。红细胞压积是影响血液黏度最主要的因素红细胞压积越大其全血黏度值越高[13-14]鱼体在游动时血液循环的速度与血液流畅度密切相关黏稠的血液流畅度往往较低。本次实验结果表明随着鱼体规格的增大红细胞压积逐渐变大且350 g组红细胞压积显著高于20 g组（P<0.05）这或许就是规格较大的鱼体没有规格较小的鱼体喜欢游动的原因。

    3.3大菱鲆血栓細胞相关血液指标分析

    血栓细胞的归类问题一直存在争议袁仕取等[15]认为血栓细胞应归为白细胞的一类尾崎久雄[16]则认为血栓细胞应单独归为一类。为了更清晰地表述各组数据之间的差异本次采用尾崎久雄的分类方法将血栓细胞系单独分析。

    试验所用三种不同规格大菱鲆血栓细胞相关血液指标差异均不显著（P>0.05）表明血栓细胞系在鱼体生长发育过程中相对稳定各项指标受鱼体规格影响较小本试验结果可作为大菱鲆临床诊断中血常规参考依据。此外血栓细胞的数目、压积以及平均血栓细胞体积与鱼体规格呈现正相关状态这可能是因为血栓细胞数量以及压积必须随着鱼体规格增大而加大以保证机体正常的抗凝血作用;而血栓细胞宽度随着鱼体规格增大反而降低或许是因为血栓细胞数量增多所致。

    3.4不同规格大菱鲆血常规的综合分析

    三组不同规格大菱鲆白细胞系、红细胞系中部分指标受鱼体规格影响较大不能形成确切的血常规参考值血栓细胞系受鱼体规格影响较小可考虑将此试验结果作为建立大菱鲆血常规正常值的参考依据。但要注意的是在鱼体生长发育的过程中不同种类的细胞发挥着不同的作用受外界环境的影响或机体功能的改变血液指标也会发生相应的改变如在不同的水温、养殖密度及营养状况下测得的鱼体内各项血液指标也不同由于本试验选用大菱鲆的规格、数量均较少且未将季节、饲养条件、养殖密度等其它因素参考在内因此容易出现偶然性的结果所以本次试验结果也就仅可作为建立大菱鲆血常规的参考依据而不能算得出其确切范围。由此可见建立大菱鲆血常规正常参考值任重而道远还需广大学者共同努力扩大鱼体规格加大样本数量将季节、饲养环境等现实因素都考虑进去以此建立出一套健全的大菱鲆血常规正常值参考范围。

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    Abstract：In order to explore the characteristics of blood indexes in different growth stages of Scophthalmus maximus （turbot），the blood routine analysis of turbot was performed by manual testing and Pentra120 blood analyzer.The results showed that there were significant differences in the absolute value of granulocytes，percentage of lymphocytes，intermediate cells and granulocytes between 70 g group and 350 g group （P<0.05），the hematokrit were significantly different （P<0.05） and hemoglobin was different （P<0.01） between 20 g group and 350 g group，but there was no significant difference among the other 13 indexes.The result indicated that： some leukocyte-related and RBC-related blood indices of turbot were unstable，it was difficult to obtain normal reference range，but thrombus cell-related blood indices were relatively stable，could be used as the basis of turbots normal blood indices.

    Key words：Scophthalmus maximus;blood index;blood routine analysis

    （收稿日期：2020-04-27）