丁香酚对罗非鱼的麻醉效果
罗晶晶 韩典峰 孙玉增 邹荣婕 张华威 黄会 刘慧慧
摘要：对罗非鱼进行丁香酚药浴实验，研究丁香酚药浴浓度、药浴时间以及鱼体规格对麻醉效果的影响。结果表明：在10～120 mg·L-1范围内，随着丁香酚药浴浓度的增加，罗非鱼麻醉时间逐渐缩短，苏醒时间逐渐增长，罗非鱼麻醉复苏率均为100%；丁香酚药浴浓度为45 mg·L-1时，罗非鱼可以在3 min内麻醉，5 min内苏醒，为最适药浴浓度。在最适药浴浓度条件下，丁香酚对罗非鱼的麻醉效果与鱼的规格无相关性，且药浴时间超过120 min，罗非鱼复苏率呈降低趋势，浸泡时间达到300 min时，罗非鱼的死亡率为100%。
关键词：丁香酚；罗非鱼；麻醉效果
丁香酚（Eugenol），又名2-甲氧基-4-（2-丙烯基）苯酚，无色或淡黄色液体，有强烈的丁香香气，广泛存在于丁香油、肉桂叶油、樟脑油等芳香油中，具有众多药理作用，包括麻醉、松弛肠以及子宫平滑肌等。1972年，日本的远藤发现丁香酚对鱼类有麻醉作用，后来将其作为麻醉剂进行深度研究，其麻醉鱼类机理：首先抑制鱼类的脑皮质，使鱼丧失触觉，然后作用其基底神经节及小脑，使鱼进入兴奋状态，并最终作用于脊髓使其麻醉。目前在日本、新西兰、澳大利亚等国家明确允许使用丁香酚作为鱼类麻醉剂。
罗非鱼，又称非鲫，通常生活在淡水中，但也能生长在不同浓度的盐水中，其对低氧环境具有较强适应能力，有着良好的适应性以及强大的繁殖有力，是世界水产业的重点科研培养的淡水养殖鱼类，且罗非鱼被誉为未来动物性蛋白质的主要来源之一。在我国，罗非鱼是现阶段养殖规模最大的鱼类，占全球产量的40%，出口量居世界第一位。罗非鱼背部鳍条较硬，不利于其实际生产运输；并且罗非鱼有互相殘食的习性，增加生产运输过程的损失，成鱼在受惊后会沉人池底，不易捕捞。对罗非鱼合理地应用麻醉剂能够使鱼体安静，降低在活鱼捕捞、运输过程中的耗氧及损伤，提高存活率。
本实验进行了丁香酚对罗非鱼麻醉效果的研究，以期为丁香酚作为麻醉剂，对罗非鱼的实际生产运输以及科研提供参考。
1材料与方法
1.1实验药品
丁香酚，纯度为99%，购于阿拉丁试剂有限公司。用无水乙醇稀释成体积比为1：9的使用液待用。
1.2试验用鱼及饲养条件
罗非鱼购于威海三泉生态发展有限公司，根据体重体长差异分为五个批次，各批次活力旺盛无外伤。在实验室鱼缸中暂养3天，试验前一天停止喂食。缸内用水均为经过充分曝气的自来水，每天换水一次，水温为23～25℃。
1.3鱼类在麻醉和复苏过程中的行为特征
不同种类的鱼在麻醉和复苏过程中的行为特征各有差异，但总体来说，可以将鱼类麻醉过程分为5个阶段，复苏过程分为4个阶段，具体表现见表1和表2。理想的麻醉效果需满足鱼体在3 min内被麻醉、5 min内苏醒。麻醉时间指鱼被放入丁香酚溶液开始至进入完全麻醉期所需时间，复苏时间指将已进入麻醉阶段IV的鱼放入清水后，行为完全恢复正常所需的时间。
1.4实验设计及实验操作过程
1.4.1不同浓度丁香酚溶液对麻醉效果的影响 选取体重为104±11.3 g的罗非鱼，分为10组，每组10尾鱼，每组均设置3个平行。将10组鱼分别放人丁香酚溶液浓度为0、10、20、30、40、50、60、80、100、120 mg·L-1的水体中进行药浴麻醉，待完全麻醉后，放入清水中观察罗非鱼的复苏状态，记录麻醉时间和复苏时间。
1.4.2不同规格的鱼体对麻醉效果的影响 根据不同浓度丁香酚溶液对罗非鱼的麻醉效果，选取浓度为45 mg·L-1丁香酚溶液进行药浴。选取5种规格的罗非鱼，按规格分为5组，每组10尾鱼，每组均设置3个平行。将鱼放人丁香酚溶液中进行药浴麻醉，待完全麻醉后，放入清水中观察罗非鱼的复苏状态，记录不同规格的罗非鱼麻醉时间及苏醒时间。
1.4.3不同浸浴时间对麻醉效果的影响 选取体重为110±9.26 g的罗非鱼，分为9组，每组10尾鱼，每组均设置3个平行。放人浓度为45 mg·L-1的丁香酚溶液内进行药浴麻醉，分别浸浴5min、10 min、20 min、30 min、60 min、120 min、180min、240 min、300 min进行麻醉，麻醉后转入清水内进行苏醒，记录复苏时间及复苏率。
1.4.4数据处理 数据通过SPSS 20.0软件和Excel软件进行统计及计算处理。
2结果与分析
2.1不同浓度丁香酚溶液对麻醉效果的影响
随着丁香酚溶液浓度的增加，麻醉时间逐渐缩短，复苏时间逐渐增长，具体麻醉时间及复苏时间见表3。丁香酚溶液浓度为10 mg·L-1时，罗非鱼进入镇静阶段的平均时间为4.54 min，并一直处于该阶段；丁香酚溶液浓度增加至100 mg·L-1时，罗非鱼在麻醉后出现休克现象，苏醒时间明显延长；丁香酚溶液浓度增加至120 mg·L-1时，罗非鱼很快进入休克状态，需较长时间才能恢复到正常状态。
根据表3中丁香酚溶液浓度与完全麻醉时间及完全恢复正常状态时间的关系，绘制出丁香酚溶液不同浓度下对罗非鱼麻醉效果以及麻醉后苏醒效果的趋势图（图1）。由图1可看出，丁香酚浓度在20～120 mg·L-1范围内，罗非鱼达到完全麻醉阶段的时间随麻醉溶液浓度增大而缩短，除浓度为40、50 mg·L-1及80、100 mg·L-1外极显著降低（P<0.01），复苏时间随丁香酚溶液浓度增大而延长，除丁香酚溶液浓度为50、60mg/L外，复苏时间极显著增长（P<0.01）。根据回归运算，完全麻醉时间与丁香酚溶液浓度关系为：y=0.519 2 x0.5894，R2=0.991 9；完全复苏时间与丁香酚浓度的关系为y=167.77x-1.08888，R2=0.951，其中x代表丁香酚浓度（mg·L-1），y代表时间（min）。理想的麻醉状态为在3 min之内被麻醉，5 min内苏醒。根据回归方程计算，得出理想麻醉浓度区间为40.2～47.0 mg·L-1。本实验选定45 mg·L-1为丁香酚对罗非鱼的最适麻醉浓度。
2.2丁香酚浓度对不同规格罗非鱼麻醉效果的影响
按表4中五个不同体重的罗非鱼进行麻醉实验，麻醉浓度为45 mg·L-1。结果表明：所有罗非鱼均在3 min内达到麻醉阶段IV，5 min内全部恢复到复苏阶段IV，复苏率为100%，丁香酚对罗非鱼的麻醉效果与鱼的体长体重无相关性。
2.3不同药浴时间对罗非鱼麻醉效果的影响
将罗非鱼放入45 mg·L-1的丁香酚溶液内进行药浴实验，研究不同药浴时间对完全恢复到正常状态的时间及复苏率的影响见表5。从表中可以看出药浴时间少于60 min时，完全恢复到正常状态的时间差异不明显，复苏率基本维持在100%；药浴时间持续到120 min时，复苏时间极显著增长（P<0.01），复苏率为100%；当药浴时间继续增加时，复苏时间持续延长，复苏率明显降低；当浸浴时间到达300 min时，罗非鱼全部死亡。
3讨论
药液浓度是影响鱼体麻醉效果的最直接因素，适宜的麻醉浓度具有入麻快、复苏时间短、复苏率高等优点。本试验研究了不同浓度丁香酚溶液对罗非鱼的麻醉效果，得到了在水温为23±0.5℃时，得出理想麻醉浓度区间为40.2～47.0 mg·L-1。丁香酚对倒刺伍巴幼鱼的理想麻醉浓度为20 mg·L-1，对半滑舌鳎的有效麻醉浓度为40～80 mg·L-1，由此可见，丁香酚对鱼类的麻醉效果与鱼的种类有较大关系。麻醉剂的麻醉效果不仅与鱼的种类有关，还与水质等环境因素有关，鱼体的状态也是影响麻醉效果的一个重要因素，因此，对最适麻醉濃度的选择在一定程度上也是存在着主观因素的影响。研究表明丁香酚的浓度与麻醉时间呈负相关，与苏醒时间呈正相关，这与日本囊对虾、大西洋鲑、鲻鱼、大黄鱼、半滑舌鳎、澳洲长鳍鳗等的研究结论相一致。
鱼体的规格与丁香酚麻醉效果是否存在相关性也是本实验的一项研究内容，实验结果表明，丁香酚浓度为45 mg·L-1时，麻醉效果与罗非鱼的规格没有明显相关性，褐鳟鱼、大西洋鲑及虹鳟遵循相同规律，而较大规格白鱼麻醉时间比较小规格的白鱼麻醉时间短。杨移斌等认为可能是在某一阈值内丁香酚对鱼类的麻醉作用与鱼类自身的体重没有明显关系，但这一阈值还有待进一步的研究。
丁香酚浸浴时间在根本上制约鱼类的运输时间。本研究表明持续浸浴时间超过2 h，罗非鱼的复苏率将会大幅降低，因此采用麻醉运输时，运输时间控制在2 h以内会大幅提高罗非鱼的存活率。笔者认为，可以适当降低药浴浓度来延长鱼类的麻醉耐受时间，为运输罗非鱼赢得更多时间。
