牛尾菜根乙醇提取液药理活性的初步研究
苗婷婷+冯颖+刘宇+王曼宁+沈红梅
摘 要：目的：对牛尾菜根提取液的祛痰镇咳、消炎镇痛作用进行初步研究.方法：用牛尾菜根乙醇提取液对小鼠连续灌胃7d，分别采用氨水引咳法、酚红排泌量法、足肿胀和耳廓肿胀法、醋酸扭体法和热板法观察效果.结果：牛尾菜根的乙醇提取液可明显抑制氨水所致的小鼠咳嗽，使酚红排泌量增加，明显对抗热刺激和醋酸所致的小鼠疼痛反应.结论：牛尾菜根的乙醇提取液对小鼠有明显的镇咳祛痰及消炎镇痛作用.
关键词：牛尾菜根；镇咳；祛痰；消炎；镇痛
基金项目：吉林省科技发展计划（编号：20140204002NY）；吉林省大学生创新创业训练计划（编号：2015033）.
牛尾菜（Smilax ripariaA. DC）又叫心叶牛尾菜、龙须菜、鞭杆子菜等，是百合科菝葜属的多年生宿根植物.其幼苗可食用，口感好，无异味，牛尾菜还具有广泛的生物活性和极高的药用价值，有活血化瘀、祛痰止咳等功效，多用于治疗风湿性关节炎、支气管炎、肺结核、咳嗽咯血等[1-2]，是长白山区广受欢迎的一种药食的重要植物资源[3-4]，也是我国山野菜出口的重要品种之一[5]，
目前对牛尾菜的研究主要集中在其营养、成分、栽培、种苗发育等方面，很少有牛尾菜药理活性方面的研究报道，未见有祛痰镇咳、消炎镇痛方面的相关实
验数据.为探讨其药理活性，本实验对牛尾菜根进行提取，观察其对小鼠的祛痰镇咳、消炎镇痛作用.
1 实验材料
1.1 动物
体重为（25±2）g的昆明小鼠，购自长春市高新区医学实验动物中心（scxk-（吉）2008-0001）.小鼠灌胃给药，给药剂量0.02L/kg体重，1次/d，连续7d.
1.2 药品及处理
牛尾菜采集于吉林省通化县金斗乡，清洗干净后放在通风良好的地方自然干燥，取根部用粉碎机粉碎.称取牛尾菜根粉末400g，以70%乙醇加热回流提取2小时，重复3次，得到乙醇提取液，浓缩后配成高、中、低剂量组（生药含量每毫升0.202g、0.101g、0.0505g），4℃冷藏备用.
1.3 试剂与仪器
枸橼酸喷托维林片，国药准字H21022140，丹东制药有限责任公司生产；阿司匹林缓释片，批号120707056，哈尔滨格拉雷药业有限公司生产；地塞米松磷酸钠注射液，国药准字H41021269，焦作福瑞堂制药有限公司.
RE-5ⅡAA型旋转蒸发仪，上海亚荣仪器厂；SHZ-D（Ⅲ）型循环水式多用真空泵，河南省予华仪器有限公司；UV1200S型紫外可见分光光度计，上海翱艺仪器有限公司；FW-100高速万能粉碎机，北京中兴伟业仪器有限公司；YLS-8A型多功能诱咳引喘仪，济南益延科技发展有限公司；YLS—21A型冷热板测痛仪，济南益延科技发展有限公司.
2 实验方法
2.1 小鼠氨水引咳法
最后一次给药1h后，在多功能诱咳引喘仪内自动恒压喷放氨雾30s，将小鼠放入其内记录咳嗽潜伏期和3min内咳嗽的次数.
2.2 小鼠酚红祛痰法
制作标准曲线，得回归方程为：y=0.1195x-0.16，R=0.77.末次给药后30min，每只小鼠腹腔注射浓度为0.5%的酚红溶液0.5ml，30min后处死小鼠，仰卧位固定，用手术刀剥离气管周围的组织，取等长的气管，放入离心管中加5ml的5%碳酸氢钠溶液，每分钟3000转，离心5分钟后吸取上清液，在波长546nm处测吸光度值带入回归方程，即得小鼠酚红的排泌量，以此作为祛痰作用的指标.
2.3 二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验
末次给药1h后，左侧耳廓双面均匀涂抹0.04ml二甲苯，右耳廓作为阴性对照组同法涂抹等量生理盐水，1h后处死小鼠，沿耳廓基线对称剪下两耳称重，计算肿胀度（mg）及肿胀抑制率（%）.
2.4 甲醛致小鼠足肿胀实验
末次给药1h后，在左足跖部注射0.05ml 2.5%甲醛，右足为阴性对照，同法注射等量生理盐水，1h后处死小鼠，对称剪下小鼠左右足，称重，计算肿胀度（mg）及肿胀抑制率（%）.
2.5 醋酸扭体法实验
末次给药1h后，腹腔注射0.6%醋酸溶液（0.2ml/10g），记录痛阈潜伏期及注射醋酸后15min内扭体的次数，计算抑制率.
2.6 热板法实验
把冷热板测痛仪调到55℃，分别记录每只小鼠的痛阈潜伏期和痛阈值，计算痛阈提高百分率.
2.7 统计分析
表1、表2及表5、表6用spss19.0软件处理，进行单因素方差分析，结果用±s表示.
3 结果与分析
3.1 牛尾菜根乙醇提取液的镇咳实验
表1显示：与生理盐水组和阳性对照组相比较，中剂量组和高剂量组都能显著延长小鼠的咳嗽潜伏期（P<0.01，p<0.05），并使小鼠在 3min内咳嗽的次数显著减少（P<0.01），而低剂量组不存在统计学差异.
3.2 牛尾菜根乙醇提取液的祛痰实验
表2显示：与生理盐水组相比较，所有实验组均可使小鼠的酚红排泌量增加，其中阳性对照组差异显著（p<0.05），高、中、低剂量组差异极其显著（p<0.01），随着药物浓度的增加酚红排泌量增加.结果表明：牛尾菜根乙醇提取液的高、中、低剂量组具有明显的祛痰作用，且效果优于氯化铵.
3.3 耳廓肿胀实验
与生理盐水组比较，牛尾菜根乙醇提取液的三个剂量组对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀都有一定的抑制作用，其中高、中剂量组的效果甚至优于阳性对照组. 结果见表3.
3.4 足肿胀实验
表4显示：与生理盐水组比较，牛尾菜根乙醇提取液三个剂量组都可以抑制甲醛引起的小鼠足肿胀，其中高、中剂量组的效果甚至优于阳性对照组.
3.5 热板法实验
实验结果显示：给药1.5h后，高、中剂量组小鼠痛阈值发生极显著变化（P<0.01），低剂量组和阿司匹林组发生显著变化（P<0.05）.表明牛尾菜根乙醇提取液能对抗热刺激所致的小鼠疼痛反应，结果见表5.
3.6 扭体法实验
实验结果显示：给药1h后，在小鼠扭体潜伏期方面，药物组与生理盐水组比较无统计学差异，但小鼠扭体次数显著减少（P<0.01），抑制率提高，表明牛尾菜根乙醇提取液能对抗醋酸所致的小鼠疼痛反应，结果见表6.
4 讨论
在民间的许多典籍、附方中记载：牛尾菜有消炎镇痛、祛痰止咳、舒筋活络、治疗风湿性关节炎等多种药理活性，但是没有相关的实验数据相支持.咳嗽是人体的一种自我保护性反射动作，能减轻或制止咳嗽的药物称为镇咳药，通过咳嗽可将呼吸道内的病理性分泌物和外界进入呼吸道的异物排出，频繁的、刺激性的咳嗽则失去保护性意义[6].本实验通过氨水引咳法引起小鼠咳嗽，用牛尾菜根乙醇提取液治疗后，观察牛尾菜的镇咳作用，结果表明：牛尾菜根乙醇提取液的高、中浓度组对延长小鼠咳嗽潜伏期、减少3min内咳嗽次数有很好的效果.
咳痰是机体通过咳嗽排除呼吸道内的病理性分泌物的过程，有利于呼吸道中异物的清除，而能减轻咳嗽的药物称为祛痰药，其作用原理多为增加呼吸道分泌，使痰液变稀或降低痰液中的黏性成分，或增加呼吸道粘膜上皮细胞纤毛的运动，使痰液易于咳出[7].本实验通过酚红的排出量作为排出痰液的指标，证明牛尾菜根的乙醇提取液具有明显的祛痰作用.
牛尾菜是民间常用草药，已有研究表明牛尾菜中含有酚类、甾体皂苷等化学成分[8-9]，其中甾体皂苷类具有显著的抗炎活性[10]，本实验结果与此研究相一致，证明：牛尾菜根的乙醇提取液可以减轻小鼠耳肿胀和足肿胀反应，具有很好的消炎作用.
多种原因可引起疼痛，包括温度、机械性刺激的物理因素和化学因素以及其它等等，本实验选取了两种常见的物理和化学性因素，分别观察药物对小鼠疼痛的影响，结果表明牛尾菜根提取液能对抗热刺激和醋酸所致的小鼠疼痛反应且效果明显，但具体的镇痛机理还有待于进一步研究.
参考文献
[1]李丹平，陈雨洁，万定荣，等.鄂西土家常用百合科植物药[J].中药材，2009，32（5）；676.
[2]国家中医药管理局《中华本草》编委会.《中华本草》（第八册）[M].上海：上海科学技术出版社，1999：168-169.
[3]江纪武，靳朝东.药用植物辞典[M].天津：天津科学技术出版，2005：756
[4]顾地周，刘宇，王曼宁等.牛尾菜种胚发育调控和育苗技术[J].江苏农业科学，2016，44（1）：71-74.
[5]邵美妮，李天来，徐树军等.牛尾菜的资源利用与研究现状[J].安徽农业科学，2006，34（12）：2722-2723
[6]陈佳敏，许志威，鄢文佳等.大蒜油对实验小鼠的镇咳祛痰作用[J].中国现代应用药学，2015，（32）3：261-264.
[7]李仪奎.中药药理实验方法学（第二版）[M].上海：上海科学技术出版社，2005：433.
[8]张存莉，李文闯，高锦明.黑刺菝葜中的甾体皂甙研究[J].西北农林科技大学学报（自然科学版），2003，31（4）：163-166
[9]孙学军，巨勇，杜枚，等.鞘柄菝葜化学成分研究[J].中草药，1995，26（8）395-396.
[10]孙学军，巨勇，杜牧等，防己叶菝葜化学成分研究[J].中国中药杂志，1993，18（10）：611-614.
作者简介
苗婷婷（1981-），女，汉族，吉林省柳河县人，实验师，硕士研究生，研究方向：药理学。
摘 要：目的：对牛尾菜根提取液的祛痰镇咳、消炎镇痛作用进行初步研究.方法：用牛尾菜根乙醇提取液对小鼠连续灌胃7d，分别采用氨水引咳法、酚红排泌量法、足肿胀和耳廓肿胀法、醋酸扭体法和热板法观察效果.结果：牛尾菜根的乙醇提取液可明显抑制氨水所致的小鼠咳嗽，使酚红排泌量增加，明显对抗热刺激和醋酸所致的小鼠疼痛反应.结论：牛尾菜根的乙醇提取液对小鼠有明显的镇咳祛痰及消炎镇痛作用.
关键词：牛尾菜根；镇咳；祛痰；消炎；镇痛
基金项目：吉林省科技发展计划（编号：20140204002NY）；吉林省大学生创新创业训练计划（编号：2015033）.
牛尾菜（Smilax ripariaA. DC）又叫心叶牛尾菜、龙须菜、鞭杆子菜等，是百合科菝葜属的多年生宿根植物.其幼苗可食用，口感好，无异味，牛尾菜还具有广泛的生物活性和极高的药用价值，有活血化瘀、祛痰止咳等功效，多用于治疗风湿性关节炎、支气管炎、肺结核、咳嗽咯血等[1-2]，是长白山区广受欢迎的一种药食的重要植物资源[3-4]，也是我国山野菜出口的重要品种之一[5]，
目前对牛尾菜的研究主要集中在其营养、成分、栽培、种苗发育等方面，很少有牛尾菜药理活性方面的研究报道，未见有祛痰镇咳、消炎镇痛方面的相关实
验数据.为探讨其药理活性，本实验对牛尾菜根进行提取，观察其对小鼠的祛痰镇咳、消炎镇痛作用.
1 实验材料
1.1 动物
体重为（25±2）g的昆明小鼠，购自长春市高新区医学实验动物中心（scxk-（吉）2008-0001）.小鼠灌胃给药，给药剂量0.02L/kg体重，1次/d，连续7d.
1.2 药品及处理
牛尾菜采集于吉林省通化县金斗乡，清洗干净后放在通风良好的地方自然干燥，取根部用粉碎机粉碎.称取牛尾菜根粉末400g，以70%乙醇加热回流提取2小时，重复3次，得到乙醇提取液，浓缩后配成高、中、低剂量组（生药含量每毫升0.202g、0.101g、0.0505g），4℃冷藏备用.
1.3 试剂与仪器
枸橼酸喷托维林片，国药准字H21022140，丹东制药有限责任公司生产；阿司匹林缓释片，批号120707056，哈尔滨格拉雷药业有限公司生产；地塞米松磷酸钠注射液，国药准字H41021269，焦作福瑞堂制药有限公司.
RE-5ⅡAA型旋转蒸发仪，上海亚荣仪器厂；SHZ-D（Ⅲ）型循环水式多用真空泵，河南省予华仪器有限公司；UV1200S型紫外可见分光光度计，上海翱艺仪器有限公司；FW-100高速万能粉碎机，北京中兴伟业仪器有限公司；YLS-8A型多功能诱咳引喘仪，济南益延科技发展有限公司；YLS—21A型冷热板测痛仪，济南益延科技发展有限公司.
2 实验方法
2.1 小鼠氨水引咳法
最后一次给药1h后，在多功能诱咳引喘仪内自动恒压喷放氨雾30s，将小鼠放入其内记录咳嗽潜伏期和3min内咳嗽的次数.
2.2 小鼠酚红祛痰法
制作标准曲线，得回归方程为：y=0.1195x-0.16，R=0.77.末次给药后30min，每只小鼠腹腔注射浓度为0.5%的酚红溶液0.5ml，30min后处死小鼠，仰卧位固定，用手术刀剥离气管周围的组织，取等长的气管，放入离心管中加5ml的5%碳酸氢钠溶液，每分钟3000转，离心5分钟后吸取上清液，在波长546nm处测吸光度值带入回归方程，即得小鼠酚红的排泌量，以此作为祛痰作用的指标.
2.3 二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验
末次给药1h后，左侧耳廓双面均匀涂抹0.04ml二甲苯，右耳廓作为阴性对照组同法涂抹等量生理盐水，1h后处死小鼠，沿耳廓基线对称剪下两耳称重，计算肿胀度（mg）及肿胀抑制率（%）.
2.4 甲醛致小鼠足肿胀实验
末次给药1h后，在左足跖部注射0.05ml 2.5%甲醛，右足为阴性对照，同法注射等量生理盐水，1h后处死小鼠，对称剪下小鼠左右足，称重，计算肿胀度（mg）及肿胀抑制率（%）.
2.5 醋酸扭体法实验
末次给药1h后，腹腔注射0.6%醋酸溶液（0.2ml/10g），记录痛阈潜伏期及注射醋酸后15min内扭体的次数，计算抑制率.
2.6 热板法实验
把冷热板测痛仪调到55℃，分别记录每只小鼠的痛阈潜伏期和痛阈值，计算痛阈提高百分率.
2.7 统计分析
表1、表2及表5、表6用spss19.0软件处理，进行单因素方差分析，结果用±s表示.
3 结果与分析
3.1 牛尾菜根乙醇提取液的镇咳实验
表1显示：与生理盐水组和阳性对照组相比较，中剂量组和高剂量组都能显著延长小鼠的咳嗽潜伏期（P<0.01，p<0.05），并使小鼠在 3min内咳嗽的次数显著减少（P<0.01），而低剂量组不存在统计学差异.
3.2 牛尾菜根乙醇提取液的祛痰实验
表2显示：与生理盐水组相比较，所有实验组均可使小鼠的酚红排泌量增加，其中阳性对照组差异显著（p<0.05），高、中、低剂量组差异极其显著（p<0.01），随着药物浓度的增加酚红排泌量增加.结果表明：牛尾菜根乙醇提取液的高、中、低剂量组具有明显的祛痰作用，且效果优于氯化铵.
3.3 耳廓肿胀实验
与生理盐水组比较，牛尾菜根乙醇提取液的三个剂量组对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀都有一定的抑制作用，其中高、中剂量组的效果甚至优于阳性对照组. 结果见表3.
3.4 足肿胀实验
表4显示：与生理盐水组比较，牛尾菜根乙醇提取液三个剂量组都可以抑制甲醛引起的小鼠足肿胀，其中高、中剂量组的效果甚至优于阳性对照组.
3.5 热板法实验
实验结果显示：给药1.5h后，高、中剂量组小鼠痛阈值发生极显著变化（P<0.01），低剂量组和阿司匹林组发生显著变化（P<0.05）.表明牛尾菜根乙醇提取液能对抗热刺激所致的小鼠疼痛反应，结果见表5.
3.6 扭体法实验
实验结果显示：给药1h后，在小鼠扭体潜伏期方面，药物组与生理盐水组比较无统计学差异，但小鼠扭体次数显著减少（P<0.01），抑制率提高，表明牛尾菜根乙醇提取液能对抗醋酸所致的小鼠疼痛反应，结果见表6.
4 讨论
在民间的许多典籍、附方中记载：牛尾菜有消炎镇痛、祛痰止咳、舒筋活络、治疗风湿性关节炎等多种药理活性，但是没有相关的实验数据相支持.咳嗽是人体的一种自我保护性反射动作，能减轻或制止咳嗽的药物称为镇咳药，通过咳嗽可将呼吸道内的病理性分泌物和外界进入呼吸道的异物排出，频繁的、刺激性的咳嗽则失去保护性意义[6].本实验通过氨水引咳法引起小鼠咳嗽，用牛尾菜根乙醇提取液治疗后，观察牛尾菜的镇咳作用，结果表明：牛尾菜根乙醇提取液的高、中浓度组对延长小鼠咳嗽潜伏期、减少3min内咳嗽次数有很好的效果.
咳痰是机体通过咳嗽排除呼吸道内的病理性分泌物的过程，有利于呼吸道中异物的清除，而能减轻咳嗽的药物称为祛痰药，其作用原理多为增加呼吸道分泌，使痰液变稀或降低痰液中的黏性成分，或增加呼吸道粘膜上皮细胞纤毛的运动，使痰液易于咳出[7].本实验通过酚红的排出量作为排出痰液的指标，证明牛尾菜根的乙醇提取液具有明显的祛痰作用.
牛尾菜是民间常用草药，已有研究表明牛尾菜中含有酚类、甾体皂苷等化学成分[8-9]，其中甾体皂苷类具有显著的抗炎活性[10]，本实验结果与此研究相一致，证明：牛尾菜根的乙醇提取液可以减轻小鼠耳肿胀和足肿胀反应，具有很好的消炎作用.
多种原因可引起疼痛，包括温度、机械性刺激的物理因素和化学因素以及其它等等，本实验选取了两种常见的物理和化学性因素，分别观察药物对小鼠疼痛的影响，结果表明牛尾菜根提取液能对抗热刺激和醋酸所致的小鼠疼痛反应且效果明显，但具体的镇痛机理还有待于进一步研究.
参考文献
[1]李丹平，陈雨洁，万定荣，等.鄂西土家常用百合科植物药[J].中药材，2009，32（5）；676.
[2]国家中医药管理局《中华本草》编委会.《中华本草》（第八册）[M].上海：上海科学技术出版社，1999：168-169.
[3]江纪武，靳朝东.药用植物辞典[M].天津：天津科学技术出版，2005：756
[4]顾地周，刘宇，王曼宁等.牛尾菜种胚发育调控和育苗技术[J].江苏农业科学，2016，44（1）：71-74.
[5]邵美妮，李天来，徐树军等.牛尾菜的资源利用与研究现状[J].安徽农业科学，2006，34（12）：2722-2723
[6]陈佳敏，许志威，鄢文佳等.大蒜油对实验小鼠的镇咳祛痰作用[J].中国现代应用药学，2015，（32）3：261-264.
[7]李仪奎.中药药理实验方法学（第二版）[M].上海：上海科学技术出版社，2005：433.
[8]张存莉，李文闯，高锦明.黑刺菝葜中的甾体皂甙研究[J].西北农林科技大学学报（自然科学版），2003，31（4）：163-166
[9]孙学军，巨勇，杜枚，等.鞘柄菝葜化学成分研究[J].中草药，1995，26（8）395-396.
[10]孙学军，巨勇，杜牧等，防己叶菝葜化学成分研究[J].中国中药杂志，1993，18（10）：611-614.
作者简介
苗婷婷（1981-），女，汉族，吉林省柳河县人，实验师，硕士研究生，研究方向：药理学。
