针刺对肾上腺切除大鼠哮喘模型嗜酸性粒细胞计数及血清皮质酮水平的影响
崔龙苹 杨永清 等
崔龙苹 杨永清 王正田 陈汉平 马淑兰 张英英
(上海市针灸经络研究所,上海200030;1河北省张家口市第一医院)
摘 要 观察肾上腺切除(ADX)大鼠哮喘模型针刺后的血液嗜酸性粒细胞计数和血清皮质酮水平的变化,并与ADX大鼠哮喘模型非针刺、ADX大鼠哮喘模型捆绑处理、普通大鼠哮喘模型和空白组作对照。结果表明,针刺能明显降低ADX大鼠哮喘模型的血液嗜酸性粒细胞计数,对血清皮质酮水平无明显影响。提示针刺对哮喘能从减少血液嗜酸性粒细胞方面发挥其治疗作用,亦表明针刺对血液嗜酸性粒细胞的减少不依赖肾上腺皮质激素。
主题词 肾上腺切除术 哮喘/针灸疗法 粒细胞/针灸效应 皮质酮/血液临床和实验研究证明,针灸对过敏性疾病均有明显的治疗作用[1],其中之一是过敏性哮喘。针刺防治过敏性哮喘的作用环节是多方面的,有研究认为针灸通过增加皮质激素水平发挥作用[2,3]。但我们研究提示针刺防治过敏性哮喘,可能不主要依赖肾上腺皮质激素,并认为存在其他内源性调节途径[4],因此皮质激素在针刺防治过敏性哮喘中的作用有待进一步明确。为此我们曾经将大鼠切除肾上腺造成皮质激素缺乏后,再造哮喘模,观察了针刺对肺功能的影响[5],在此基础上我们进一步观察针刺对肾上腺切除大鼠哮喘模型嗜酸性粒细胞计数及血清皮质酮水平的影响。报告如下。
1 材料和方法1.1 实验动物及分组体重150～170g的雄性SD大鼠47只(中国科学院上海实验动物中心),随机分成5组,肾上腺切除(ADX)大鼠哮喘模型捆绑并针刺处理组(n=10)、ADX哮喘模型组(n=8)、ADX哮喘模型捆绑处理组(n=9)、普通大鼠哮喘模型组(n=10)、空白对照组(n=10)。
1.2 哮喘模型制备[6]将大鼠依Farris等[7]方法行双侧肾上腺切除术,术后饲以糖盐水(1%生理盐水+5%葡萄糖)。模型组大鼠分别一次性腹腔注射含卵蛋白(上海丽珠东风技术有限公司)1mg和氢氧化铝(上海金山化工厂)10mg的生理盐水1ml,2周后静脉注射卵蛋白(15mg/kg)激发哮喘发作。
1.3 方法ADX大鼠哮喘模型捆绑并针刺处理组自造模之日起,隔日上午9时捆绑针刺1次,以0.5寸32号华佗牌针灸针,针刺"大椎"、"肺俞"、"风门"穴,每穴留针20min,每隔5min行针1次(以200次/min的捻转速度捻针,20次为行针1次),共治疗7次;ADX哮喘模型捆绑处理组的捆绑处理同针刺组的捆绑;普通大鼠哮喘模型组的处理是将大鼠不行双侧肾上腺切除术,直接进行造模;ADX哮喘模型组是将大鼠行双侧肾上腺切除术后再进行造模;而空白对照组不作任何处理。
1.4 观察指标(1)大鼠血液嗜酸性粒细胞计数心脏采血时取20μl大鼠血液,滴进0.38ml嗜酸性细胞染色液(伊红∶丙酮=9∶1)中并将其混匀,室温下静置10min之后,用计数板在光电显微镜下计数。
(2)大鼠血清皮质酮水平测定
放射免疫测定法(RatcorticosteroneRIAkit,DiagnosticProductsCorporation,LosAnge瞝es,CA,USA)。大鼠心脏采血,血液置4℃冰箱中凝固1～2h,经2500r/min离心机离心10min,将分离的血清置-20℃冰箱保存备测。1.5 统计方法相关分析用Spearman方法,参数型数据的比较用t检验,非参数型数据的比较用Mann瞁hitnnyU瞁ilcoxon秩和W检验。
2 结果2.1 针刺对ADX大鼠哮喘模型血液嗜酸性粒细胞计数的影响图1显示,ADX哮喘模型大鼠的血液嗜酸性粒细胞计数较空白对照组、普通哮喘模型组均明显增加,普通大鼠哮喘模型血液嗜酸性粒细胞计数也较空白对照组明显增加。针刺可明显降低ADX大鼠哮喘模型血液嗜酸性粒细胞计数,而捆绑对ADX大鼠哮喘模型血液嗜酸性粒细胞计数无明显影响。
2.2 针刺对ADX大鼠哮喘模型血清皮质酮水平的影响图2表明,ADX哮喘模型大鼠的血清皮质酮较空白对照组和普通大鼠哮喘模型组均明显降低。针刺对ADX大鼠哮喘模型血清皮质酮水平无明显影响,捆绑亦对ADX大鼠哮喘模型血清皮质酮水平无明显影响。
3 讨论本研究显示了ADX之后,大鼠血清皮质酮显著减少,证明ADX确能造成机体内源性皮质激素缺乏。ADX大鼠哮喘模型嗜酸性粒细胞计数,不仅较空白对照组增加,也较普通大鼠哮喘模型组进一步增加,这可能亦与内源性皮质激素缺乏有关。
研究认为,支气管哮喘是一种嗜酸性粒细胞支气管炎[8],为此形成了以嗜酸性粒细胞为治疗靶的哮喘治疗新战略[9]。目前,能够对嗜酸性粒细胞数目与活性有明显控制作用的主要是糖皮质激素[10]。因此理论上血液嗜酸性粒细胞数目的改变应当与血清皮质激素水平密切相关,而我们的研究结果显示,在肾上腺切除、皮质激素缺乏后,针刺仍可降低哮喘模型嗜酸性粒细胞计数,且针刺治疗前(r=0.5376,P=0.135)与针刺治疗后(r=0.4648,P=0.176)血清皮质酮水平与嗜酸性粒细胞计数均无明显统计学相关关系,与以往临床观察[11]结果一致,提示针刺对ADX大鼠哮喘模型嗜酸性粒细胞计数的降低不主要依赖肾上腺皮质激素。
针灸对过敏性哮喘有良好的治疗作用,早已为临床所证明。临床上应用针刺大椎、肺俞、风门治疗哮喘不仅取得了较好的近期疗效,同时也有一定的远期效果[12]。在以往的动物实验研究方面我们发现,针刺能显著改善大鼠哮喘模型和ADX大鼠哮喘模型的肺功能[5,13],降低气道阻力,增加肺顺应性。而本文研究结果又表明,针刺可使ADX大鼠哮喘模型的血液嗜酸性粒细胞计数降低,对皮质激素水平无明显影响,提示针刺对哮喘不仅从降低气道阻力、增加肺顺应性方面发挥其明显的防治作用,也从降低嗜酸性粒细胞计数方面发挥防治作用,且这种防治作用并不主要依赖肾上腺皮质激素。捆绑处理对ADX大鼠哮喘模型的血液嗜酸性粒细胞计数和血清皮质酮水平均无明显影响,提示针刺作用并不等同于捆绑这种应激刺激。
4 参考文献1 杨永清,陈汉平.针灸抗过敏研究进展.中国中西医结合杂志,1993;13(3):1902 赖新生,靳瑞,司徒铃.养子法治疗支气管哮喘的临床疗效和环核苷酸皮质醇变化的初步观察.中国针灸,1988;8(6):383 冯建国,陈大中,成柏华,等.针刺对支气管哮喘患者血浆皮质醇含量的影响.浙江中医杂志,1982;17(1):164 杨永清,陈汉平.试论针灸学的任务、目的与研究方法.上海针灸杂志,1996;15(2):405 崔龙苹,杨永清,陈汉平,等.针刺对肾上腺切除大鼠哮喘模型肺功能影响的研究.针刺研究,1999,24(1):44
6 杨永清,崔龙苹,陈汉平,等.肾上腺切除大鼠过敏性哮喘模型的制备.免疫学杂志,1998;14(3):169
7FarrisEJ,GriffithJQ.TheRatinLaboratoryInvesti瞘ation.2nded,JBLippincottCompany,Philadelphia,1949:4448 KroegelC.TheRoleofEosinophilsinAsthma.Lung,1990;168:59 MehtaH.EosinophilsasaTherapeuticTargetinAl瞝ergicDisease.ComprTher,1994;20(11):65110 SchleimerRP.TheEffectsofGlucocorticoidsonHu瞞anEosinophils.JAllergyClinImmunol,1994;94:611 杨永清,陈汉平,王安琪,等.针灸对哮喘病人外周血活化T淋巴细胞与嗜酸性粒细胞数目的影响.上海针灸杂志,1995;14(2):6812 杨永清,陈汉平,王安琪,等.针灸治疗哮喘174例疗效分析.上海针灸杂志,1994;13(4):5313 崔龙苹,杨永清,陈汉平,等.针刺对大鼠过敏性哮喘模型的影响.上海针灸杂志,1999,18(3):25(收稿日期:19990607,齐淑兰发稿)
崔龙苹 杨永清 王正田 陈汉平 马淑兰 张英英
(上海市针灸经络研究所,上海200030;1河北省张家口市第一医院)
摘 要 观察肾上腺切除(ADX)大鼠哮喘模型针刺后的血液嗜酸性粒细胞计数和血清皮质酮水平的变化,并与ADX大鼠哮喘模型非针刺、ADX大鼠哮喘模型捆绑处理、普通大鼠哮喘模型和空白组作对照。结果表明,针刺能明显降低ADX大鼠哮喘模型的血液嗜酸性粒细胞计数,对血清皮质酮水平无明显影响。提示针刺对哮喘能从减少血液嗜酸性粒细胞方面发挥其治疗作用,亦表明针刺对血液嗜酸性粒细胞的减少不依赖肾上腺皮质激素。
主题词 肾上腺切除术 哮喘/针灸疗法 粒细胞/针灸效应 皮质酮/血液临床和实验研究证明,针灸对过敏性疾病均有明显的治疗作用[1],其中之一是过敏性哮喘。针刺防治过敏性哮喘的作用环节是多方面的,有研究认为针灸通过增加皮质激素水平发挥作用[2,3]。但我们研究提示针刺防治过敏性哮喘,可能不主要依赖肾上腺皮质激素,并认为存在其他内源性调节途径[4],因此皮质激素在针刺防治过敏性哮喘中的作用有待进一步明确。为此我们曾经将大鼠切除肾上腺造成皮质激素缺乏后,再造哮喘模,观察了针刺对肺功能的影响[5],在此基础上我们进一步观察针刺对肾上腺切除大鼠哮喘模型嗜酸性粒细胞计数及血清皮质酮水平的影响。报告如下。
1 材料和方法1.1 实验动物及分组体重150～170g的雄性SD大鼠47只(中国科学院上海实验动物中心),随机分成5组,肾上腺切除(ADX)大鼠哮喘模型捆绑并针刺处理组(n=10)、ADX哮喘模型组(n=8)、ADX哮喘模型捆绑处理组(n=9)、普通大鼠哮喘模型组(n=10)、空白对照组(n=10)。
1.2 哮喘模型制备[6]将大鼠依Farris等[7]方法行双侧肾上腺切除术,术后饲以糖盐水(1%生理盐水+5%葡萄糖)。模型组大鼠分别一次性腹腔注射含卵蛋白(上海丽珠东风技术有限公司)1mg和氢氧化铝(上海金山化工厂)10mg的生理盐水1ml,2周后静脉注射卵蛋白(15mg/kg)激发哮喘发作。
1.3 方法ADX大鼠哮喘模型捆绑并针刺处理组自造模之日起,隔日上午9时捆绑针刺1次,以0.5寸32号华佗牌针灸针,针刺"大椎"、"肺俞"、"风门"穴,每穴留针20min,每隔5min行针1次(以200次/min的捻转速度捻针,20次为行针1次),共治疗7次;ADX哮喘模型捆绑处理组的捆绑处理同针刺组的捆绑;普通大鼠哮喘模型组的处理是将大鼠不行双侧肾上腺切除术,直接进行造模;ADX哮喘模型组是将大鼠行双侧肾上腺切除术后再进行造模;而空白对照组不作任何处理。
1.4 观察指标(1)大鼠血液嗜酸性粒细胞计数心脏采血时取20μl大鼠血液,滴进0.38ml嗜酸性细胞染色液(伊红∶丙酮=9∶1)中并将其混匀,室温下静置10min之后,用计数板在光电显微镜下计数。
(2)大鼠血清皮质酮水平测定
放射免疫测定法(RatcorticosteroneRIAkit,DiagnosticProductsCorporation,LosAnge瞝es,CA,USA)。大鼠心脏采血,血液置4℃冰箱中凝固1～2h,经2500r/min离心机离心10min,将分离的血清置-20℃冰箱保存备测。1.5 统计方法相关分析用Spearman方法,参数型数据的比较用t检验,非参数型数据的比较用Mann瞁hitnnyU瞁ilcoxon秩和W检验。
2 结果2.1 针刺对ADX大鼠哮喘模型血液嗜酸性粒细胞计数的影响图1显示,ADX哮喘模型大鼠的血液嗜酸性粒细胞计数较空白对照组、普通哮喘模型组均明显增加,普通大鼠哮喘模型血液嗜酸性粒细胞计数也较空白对照组明显增加。针刺可明显降低ADX大鼠哮喘模型血液嗜酸性粒细胞计数,而捆绑对ADX大鼠哮喘模型血液嗜酸性粒细胞计数无明显影响。
2.2 针刺对ADX大鼠哮喘模型血清皮质酮水平的影响图2表明,ADX哮喘模型大鼠的血清皮质酮较空白对照组和普通大鼠哮喘模型组均明显降低。针刺对ADX大鼠哮喘模型血清皮质酮水平无明显影响,捆绑亦对ADX大鼠哮喘模型血清皮质酮水平无明显影响。
3 讨论本研究显示了ADX之后,大鼠血清皮质酮显著减少,证明ADX确能造成机体内源性皮质激素缺乏。ADX大鼠哮喘模型嗜酸性粒细胞计数,不仅较空白对照组增加,也较普通大鼠哮喘模型组进一步增加,这可能亦与内源性皮质激素缺乏有关。
研究认为,支气管哮喘是一种嗜酸性粒细胞支气管炎[8],为此形成了以嗜酸性粒细胞为治疗靶的哮喘治疗新战略[9]。目前,能够对嗜酸性粒细胞数目与活性有明显控制作用的主要是糖皮质激素[10]。因此理论上血液嗜酸性粒细胞数目的改变应当与血清皮质激素水平密切相关,而我们的研究结果显示,在肾上腺切除、皮质激素缺乏后,针刺仍可降低哮喘模型嗜酸性粒细胞计数,且针刺治疗前(r=0.5376,P=0.135)与针刺治疗后(r=0.4648,P=0.176)血清皮质酮水平与嗜酸性粒细胞计数均无明显统计学相关关系,与以往临床观察[11]结果一致,提示针刺对ADX大鼠哮喘模型嗜酸性粒细胞计数的降低不主要依赖肾上腺皮质激素。
针灸对过敏性哮喘有良好的治疗作用,早已为临床所证明。临床上应用针刺大椎、肺俞、风门治疗哮喘不仅取得了较好的近期疗效,同时也有一定的远期效果[12]。在以往的动物实验研究方面我们发现,针刺能显著改善大鼠哮喘模型和ADX大鼠哮喘模型的肺功能[5,13],降低气道阻力,增加肺顺应性。而本文研究结果又表明,针刺可使ADX大鼠哮喘模型的血液嗜酸性粒细胞计数降低,对皮质激素水平无明显影响,提示针刺对哮喘不仅从降低气道阻力、增加肺顺应性方面发挥其明显的防治作用,也从降低嗜酸性粒细胞计数方面发挥防治作用,且这种防治作用并不主要依赖肾上腺皮质激素。捆绑处理对ADX大鼠哮喘模型的血液嗜酸性粒细胞计数和血清皮质酮水平均无明显影响,提示针刺作用并不等同于捆绑这种应激刺激。
4 参考文献1 杨永清,陈汉平.针灸抗过敏研究进展.中国中西医结合杂志,1993;13(3):1902 赖新生,靳瑞,司徒铃.养子法治疗支气管哮喘的临床疗效和环核苷酸皮质醇变化的初步观察.中国针灸,1988;8(6):383 冯建国,陈大中,成柏华,等.针刺对支气管哮喘患者血浆皮质醇含量的影响.浙江中医杂志,1982;17(1):164 杨永清,陈汉平.试论针灸学的任务、目的与研究方法.上海针灸杂志,1996;15(2):405 崔龙苹,杨永清,陈汉平,等.针刺对肾上腺切除大鼠哮喘模型肺功能影响的研究.针刺研究,1999,24(1):44
6 杨永清,崔龙苹,陈汉平,等.肾上腺切除大鼠过敏性哮喘模型的制备.免疫学杂志,1998;14(3):169
7FarrisEJ,GriffithJQ.TheRatinLaboratoryInvesti瞘ation.2nded,JBLippincottCompany,Philadelphia,1949:4448 KroegelC.TheRoleofEosinophilsinAsthma.Lung,1990;168:59 MehtaH.EosinophilsasaTherapeuticTargetinAl瞝ergicDisease.ComprTher,1994;20(11):65110 SchleimerRP.TheEffectsofGlucocorticoidsonHu瞞anEosinophils.JAllergyClinImmunol,1994;94:611 杨永清,陈汉平,王安琪,等.针灸对哮喘病人外周血活化T淋巴细胞与嗜酸性粒细胞数目的影响.上海针灸杂志,1995;14(2):6812 杨永清,陈汉平,王安琪,等.针灸治疗哮喘174例疗效分析.上海针灸杂志,1994;13(4):5313 崔龙苹,杨永清,陈汉平,等.针刺对大鼠过敏性哮喘模型的影响.上海针灸杂志,1999,18(3):25(收稿日期:19990607,齐淑兰发稿)
