集成免疫磁珠富集和免疫层析的黄曲霉毒素M1快速检测法
黄艳梅等
摘 要 以喷涂了检测抗原黄曲霉毒素和驴抗鼠二抗形成检测线和质控线的硝酸纤维膜制备免疫层析试纸条，采用EDC/NHS法制备偶联了抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的免疫磁珠。免疫磁珠与待检样本混合，经捕获、磁分离后，浓缩重悬液直接用免疫层析试纸条检测，首次建立了集浓缩样本与免疫层析于一体的黄曲霉毒素M1快速检测法。
1 引 言
特异性结果显示，浓度大于10 μg/L的AFB1在本体系中呈阳性结果。AFM1作为AFB1羟基化衍生物，化学结构差异甚小，因此AFB1能与抗AFM1单克隆抗体结合而发生交叉反应。但其它常见的真菌毒素，包括赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、桔霉素和展青霉毒，其浓度在大于1000 μg/L时均呈阴性反应。此外，原料乳中常见的非法添加物（三聚氰胺、氯霉素、四环素、土霉素、磺胺二甲基嘧啶、磺胺噻唑、恩诺沙星和环丙沙星）在浓度大于1000 μg/L时均显阴性，因此，本方法有较好的特异性。
本研究建立了快速检测原料乳中AFM1的磁富集免疫层析法，方法集样本浓缩和免疫层析于一体。原料乳中0.1 μg/L AFM1即可检出，优于现有报道非机读方式免疫层析法检测AFM1的检出限[9]。磁珠所具有的超顺磁特性使其在没有外加磁场时不具有磁性，能呈现良好的单分散性，均匀分布于样本溶液中，充分与待检物接触并结合，外加磁场后磁珠得以捕获，用缓冲液重悬，能有效地去除牛奶样本中影响检测的蛋白、脂肪等，既消除了免疫层析方法检测实际样本时常有的基质效应又有效地浓缩了样本，提高了方法的检测灵敏度。
磁珠作为层析标记物已有报道[13～15]，但常无浓缩富集过程，且需要专门的仪器读取结果，本研究利用磁珠的可见性，裸眼判断结果，无需仪器，更加适合于基层应用。另外，本研究中的免疫磁珠（180 nm）单分散性好，可在NC膜上顺利地泳动。大颗粒的免疫磁珠在T线聚集更易于被裸眼识别，这可能是本方法灵敏度高的原因之一。
References
1 Prandini A， Tansini G， Sigolo S， Filippi L， Laporta M， Piva G. Food Chem. Toxicol.， 2009， 47（5）： 984-991
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3 Maximum levels of mycotoxins in foods. National Standards of the People's Republic of China. GB 2761-2011
食品中真菌毒素限量. 中华人民共和国国家标准. GB 2761 2011
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9 SUN CuiPing， WAN YuPing， WANG XiaoDong. Jilin Animal Husbandry and Veterinary Medicine， 2013， （34）1： 19-21
孙翠萍， 万宇平， 王效东. 吉林畜牧兽医， 2013， （34） 1： 19-21
10 Bacher G， Pal S， Kanungo L， Bhand S. Sensor. Actuat. BChem.， 2012， 168： 223-230
11 Wang Z L， Yue T L， Yuan Y H， Cai R， Niu C， Guo C. Food Res. Int.， 2013， 54（1）： 302-310
12 AbramssonZetterberg L， Carlsson R， Sand S. Mutat. ResGen Tox. En.， 2013， 752（12）： 8-13
13 Marquina C， De Teresa J M， Serrate D， Marzo J， Cardoso F A， Saurel D. J. Magn. Magn. Mater.， 2013， 324（21）：3495-3498
14 Xu Q F， Xu H， Gu H C， Li J B， Wang Y Y， Wei M. Mat. Sci. Eng. CBio S.， 2009， 29（3）： 702-707
15 Zheng C， Wang X C， Lu Y， Liu Y. Food Control， 2012， 26（2）： 446-452
16 CUI Xi， XIONG QiRong， XIONG YongHua， SHAN Shan， LAI WeiHua. Chinese J. Anal. Chem.， 2013， 41（12）： 1812-1816
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1 引 言
特异性结果显示，浓度大于10 μg/L的AFB1在本体系中呈阳性结果。AFM1作为AFB1羟基化衍生物，化学结构差异甚小，因此AFB1能与抗AFM1单克隆抗体结合而发生交叉反应。但其它常见的真菌毒素，包括赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、桔霉素和展青霉毒，其浓度在大于1000 μg/L时均呈阴性反应。此外，原料乳中常见的非法添加物（三聚氰胺、氯霉素、四环素、土霉素、磺胺二甲基嘧啶、磺胺噻唑、恩诺沙星和环丙沙星）在浓度大于1000 μg/L时均显阴性，因此，本方法有较好的特异性。
本研究建立了快速检测原料乳中AFM1的磁富集免疫层析法，方法集样本浓缩和免疫层析于一体。原料乳中0.1 μg/L AFM1即可检出，优于现有报道非机读方式免疫层析法检测AFM1的检出限[9]。磁珠所具有的超顺磁特性使其在没有外加磁场时不具有磁性，能呈现良好的单分散性，均匀分布于样本溶液中，充分与待检物接触并结合，外加磁场后磁珠得以捕获，用缓冲液重悬，能有效地去除牛奶样本中影响检测的蛋白、脂肪等，既消除了免疫层析方法检测实际样本时常有的基质效应又有效地浓缩了样本，提高了方法的检测灵敏度。
磁珠作为层析标记物已有报道[13～15]，但常无浓缩富集过程，且需要专门的仪器读取结果，本研究利用磁珠的可见性，裸眼判断结果，无需仪器，更加适合于基层应用。另外，本研究中的免疫磁珠（180 nm）单分散性好，可在NC膜上顺利地泳动。大颗粒的免疫磁珠在T线聚集更易于被裸眼识别，这可能是本方法灵敏度高的原因之一。
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