灯盏花素自乳化软胶囊溶出度研究
汤秀梅 张惠玲 田霞 孔美江 刘波
摘要：目的 建立灯盏花自乳化软胶囊的溶出度测定方法。方法 采用以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱;以甲醇-0.1%磷酸溶液（35：65）为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长335 nm。应用桨法，以磷酸盐缓冲液（pH6.8）为溶出介质，转速为50 r·min-1，对灯盏花素软胶囊中野黄芩苷进行了溶出度测定。结果 野黄芩苷的线性范围为17μg/mL～838μg/mL线性关系良好r=0.9991，回收率97.8%。采用试验确定的方法，灯盏花素软胶囊在40 min溶出达80%。结论 研究灯盏花素自乳化软胶囊溶出度方法准确、可靠，可用于灯盏花素自乳化软胶囊的溶出度检测。
关键词：灯盏花素自乳化软胶囊;溶出度
中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2018）08-0070-03
Study on Dissolution Rate of Breviscapine Self-emulsifying Soft Capsule
TANG Xiu-mei，ZHANG Hui-ling，TIAN Xia，KONG Mei-jiang，LIU Bo
（Yunnan Institute of Materia Medica，Yunnan Provincial Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine and National Medicine
New Drug Creation Enterprise，Innovation and Research Center of Yunnan Baiyao Group，Kunming 650000，China）
【Abstract】Objective：To establish a method for the determination of dissolution rate of Breviscapine self-emulsifying soft capsules.Methods：The octadecylsilane bonded silica gel was used as the column，the methanol-0.1% phosphoric acid solution（35：65）as the mobile phase，1.0 mL/min of flow rate and 335 nm of detection wavelength.The dissolution method was carried out on the Breviscapine soft capsule by using the paddle method with phosphate buffer（pH6.8）as the dissolution medium and the rotation speed was 50 r·min-1.Results：The scutellarin had a linear range of 17μg/mL to 838μg/mL，with a good t linear relationship，r=0.9991，and 97.8% of recovery rate.Though experiment determination method，Breviscapine soft capsules were dissolved up to 80% at 40 min.Conclusion：The method of dissolution rate of Breviscapine self-emulsifying soft capsule is accurate and reliable，and it can be used for the dissolution test of Breviscapine self-emulsifying soft capsule.
【Key words】Breviscapine self-emulsifying soft capsule，dissolution rate
燈盏花素自乳化软胶囊是以灯盏花素为原料制成的软胶囊剂型。灯盏花素具有活血化瘀，通经活络的功能。用于脑络瘀阻，中风偏瘫，心脉痹阻，胸痹心痛;中风后遗症及冠心病心绞痛证候者。提高药物的生物利用度，更好的发挥药效，采用自乳化技术，研制灯盏花素自乳化软胶囊。控制其质量，建立溶出度的测定方法。
1 仪器与试药
Agilent 708～DS自动溶出仪;Agilent 1200高效液相色谱仪;BSA224s～cw 电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）;甲醇（色谱纯，默克公司）;其余为分析纯;野黄芩苷对照品（购于中国食品药品检定研究院，批号110842-200403）灯盏花素软胶囊（批号：20131101，20131102，20131103，云南省药物研究所提供）
2 方法与结果
2.1 对照溶液的制备 取野黄芩苷对照品适量，精密称定，加磷酸盐缓冲液（PH6.8）制成每1mL中含80ug的溶液，作为对照品溶液。
2.2 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-0.1%磷酸溶液（35：65）为流动相;流速为每分钟1 mL。理论板数按野黄芩苷峰计算不低于4000。
2.3 供试品溶液的制备 取样品，照溶出度测定法（《中国药典》2010年版二部附录XC第二法），以磷酸盐缓冲液（PH6.8）500 mL为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经40 min时，取溶液滤过，续滤液作为供试品溶液;
2.4 溶出介质的选择 灯盏花素在水中几乎不溶，分别选用PH4.5醋酸盐溶液、PH6.8磷酸盐溶液、0.25%十二烷基硫酸钠溶液、0.5%十二烷基硫酸钠溶液为溶出介质[4]，测定结果溶出度分别为18.7%，83.9%，28.0%，15.9%;灯盏花素软胶囊在PH6.8磷酸盐溶液溶出量最高，选用PH6.8磷酸盐溶液为溶出液。
2.5 溶出介质体积的选择 考虑到溶出度测定的准确度，灯盏花素软胶囊每粒含灯盏花素40 m，溶出介质500 mL，溶出液的浓度80 ug/mL。灯盏花素在磷酸盐缓冲液（pH 6.8）中溶解度为4.6 mg/mL[5]，其在500 mL的磷酸盐缓冲液（pH 6.8）中的饱和溶解量超过每粒所含药物量（40 mg）的10倍，达到漏槽条件，确定溶出介质500 mL。
2.6 溶出度测定方法的验证
2.6.1 系统适用性试验 取灯盏花软胶囊的空白辅料适量，按供试品溶液的制备方法制备阴性，分别取对照品溶液、溶出液，以及阴性样品溶出液分别进样分析。色谱图如图所示，被测组分分离效果较好，所用溶剂和辅料对溶出检测结果无影响，野黄芩苷达到基线分离，理论板数为4000。
A.阴性样品;B.对照品;C.样品;
图1 灯盏花素软胶囊中野黄芩苷测定图
2.6.2 线性关系考察试验 精密称取野黄芩苷对照品适量，加磷酸盐缓冲液（PH6.8）溶解并稀释至刻度，摇匀，制得对照品母液（0.838 mg/mL），分别精密吸取对照品母液1 mL 置2 mL、5 mL、10 mL、50 mL的容量瓶中，用磷酸盐缓冲液（PH6.8）稀释并定容至刻度，摇匀。精密吸取5μL，分别进样，以浓度（X）对峰面积（Y）进行线性回归，得回归方程y=32040x-24.554，r=0.9991，灯盏花素在0.017 mg/mL～0.838 mg/mL范围内呈良好的线性关系。
2.6.3 重复性试验 取同一批供试品，照溶出度测定法（中国药典2010版二部附录X C 第二法溶出，分别测定野黄芩苷含量，测定结果显示重复性好，溶出度平均值87.11%，RSD为1.35%。
2.6.4 稳定性试验 取溶出液分别于0h、1h、3h、6h、9h、12h、18h、24h进样测定，溶出液24 h无显著性变化，溶出液较为稳定，RSD值1.85%。
2.6.5 准确度试验 精密称取野黄芩苷对照品20 mg至50 mL量瓶中，加磷酸盐缓冲液（PH6.8）溶解，稀释至刻度，作为对照储备液;分别精密量取对照储备液1 mL、2 mL、3 mL溶液至10 mL量瓶中，再按处方比例加入空白辅料3 mg、6 mg、9 mg，用磷酸盐缓冲液（PH6.8）稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得供试品溶液;另取上述对照储备液用磷酸盐缓冲液（PH6.8）稀释并制成每1 mL含0.08 mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液。取上述对照品溶液和供试品溶液，分别进样，按外标法计算，即得，实验结果回收率95%-105%之间，平均值97.8%，
2.6.6 范围试验 分别精密称取供试品0.5粒、1粒、1.5粒量各3份，照溶出度测定法溶出分别测定，RSD为1.74%。
2.6.7 中间精密度 3位不同人员对同一批供试品分别照溶出度溶出，Agilent1200，LC-2010A，Agilent1100不同高效液相进行检测，测定结果溶出度分别为，96.6%，94.1%，96.6%：RSD为2.64%。
2.6.8 耐用性实验 分别改变色谱条件中的流速为0.8 mL/min，1.0 mL/min，1.2 mL/min;柱温：20℃，30℃，40℃;流动相：甲醇—0.1%磷酸溶液（37：63），甲醇—0.1%磷酸溶液（35：65），甲醇—0.1%磷酸溶液（33：67）：柱子：Ecosil-C18，Kromasi 100-5 C18，Agilent Zorbax SB-C18，分别进样溶出液、对照品溶液，试验结果显示，测定条件有微的变动时，所用溶剂和辅料对溶出检测结果无影响，野黄芩苷峰分离度均1.5以上。
2.7 3批样品的溶出度测定 照溶出度测定法30 min的溶出度，测定3批样品（批号：20131101，20131102，20131103），测定结果见表1。
表1 3批样品溶出度测定结果
根据测定结果显示3批溶出度均大于80%，确定溶出度限度为标示量的80%。
3 讨论
溶出度是控制药品质量的重要指标，灯盏花素难溶性物質，生物利用度低，采用自乳化技术，增加灯盏花素溶解度，建立溶出度测定方法，更有效控制软胶囊质量。
溶出转速和溶出时间的选择，实验转速分别为 50转/min、75转/min和100转/min，分别在10、20、30、40、50和60 min的时间点取样，测定不同转速，不同时间的溶出度。从实验结果看出，转速50转/min灯盏花素软胶囊样品溶出度与75转/min溶出结果相近;转速100转/min溶出速度太快，10 min达最大浓度，不利于溶出度区分控制，确定转速50转/min;溶出度在40 min，50 min，60 min溶出值基本一致，且达到最大值，确定溶出时间40 min。
溶出度的溶出液检测方法采用高效液相色谱法，用高效液相色谱仪中的二极管阵列检测器检测得到野黄芩苷的最大吸收波长为335 nm，与文献一致，所以确定用335 nm作为此方法的检测波长。
检测方法色谱条件流动相研究，参考中国药典2010年版一部中“灯盏花素”含量测定方法及文献资料测定方方法，进行流动相的研究;流动相甲醇-0.1%磷酸溶液（40：60）[3]得到的野黄芩苷峰不能达到基线分离有拖尾峰;调整流动相甲醇-0.1%磷酸溶液野黄芩苷峰型达到基线分离，分离度达1.5以上，笔者选用甲醇-0.1%磷酸溶液（35：65）为溶出度检测的流动相。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].一部.北京：中国医药科技出版社，2015.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].四部.北京：中国医药科技出版社，2015.
[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].一部.北京：中国医药科技出版社，2010.
[4]周毅生，翟冬艳，段琼辉，等.灯盏花素口崩片质量标准的研究[J].中成药，2007，29：1446-1450.
[5]赵梅，谷俊峰.HPLC 法测定灯盏花素注射液中灯盏花乙素的含量[D].贵州医学院学报，2011，4：360.
[6]邵鑫，周洁，姚武.灯盏花素片中灯盏乙素含量的HPLC 法测定[D].黄山学院学报，2012，6：53-54.
[7]姜志远，刘世萍，曲婷.灯盏花素片溶出度测定方法的考察[J].中国药师，2011，（14）：1014-1016.
（收稿日期：2018-03-19）
摘要：目的 建立灯盏花自乳化软胶囊的溶出度测定方法。方法 采用以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱;以甲醇-0.1%磷酸溶液（35：65）为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长335 nm。应用桨法，以磷酸盐缓冲液（pH6.8）为溶出介质，转速为50 r·min-1，对灯盏花素软胶囊中野黄芩苷进行了溶出度测定。结果 野黄芩苷的线性范围为17μg/mL～838μg/mL线性关系良好r=0.9991，回收率97.8%。采用试验确定的方法，灯盏花素软胶囊在40 min溶出达80%。结论 研究灯盏花素自乳化软胶囊溶出度方法准确、可靠，可用于灯盏花素自乳化软胶囊的溶出度检测。
关键词：灯盏花素自乳化软胶囊;溶出度
中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2018）08-0070-03
Study on Dissolution Rate of Breviscapine Self-emulsifying Soft Capsule
TANG Xiu-mei，ZHANG Hui-ling，TIAN Xia，KONG Mei-jiang，LIU Bo
（Yunnan Institute of Materia Medica，Yunnan Provincial Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine and National Medicine
New Drug Creation Enterprise，Innovation and Research Center of Yunnan Baiyao Group，Kunming 650000，China）
【Abstract】Objective：To establish a method for the determination of dissolution rate of Breviscapine self-emulsifying soft capsules.Methods：The octadecylsilane bonded silica gel was used as the column，the methanol-0.1% phosphoric acid solution（35：65）as the mobile phase，1.0 mL/min of flow rate and 335 nm of detection wavelength.The dissolution method was carried out on the Breviscapine soft capsule by using the paddle method with phosphate buffer（pH6.8）as the dissolution medium and the rotation speed was 50 r·min-1.Results：The scutellarin had a linear range of 17μg/mL to 838μg/mL，with a good t linear relationship，r=0.9991，and 97.8% of recovery rate.Though experiment determination method，Breviscapine soft capsules were dissolved up to 80% at 40 min.Conclusion：The method of dissolution rate of Breviscapine self-emulsifying soft capsule is accurate and reliable，and it can be used for the dissolution test of Breviscapine self-emulsifying soft capsule.
【Key words】Breviscapine self-emulsifying soft capsule，dissolution rate
燈盏花素自乳化软胶囊是以灯盏花素为原料制成的软胶囊剂型。灯盏花素具有活血化瘀，通经活络的功能。用于脑络瘀阻，中风偏瘫，心脉痹阻，胸痹心痛;中风后遗症及冠心病心绞痛证候者。提高药物的生物利用度，更好的发挥药效，采用自乳化技术，研制灯盏花素自乳化软胶囊。控制其质量，建立溶出度的测定方法。
1 仪器与试药
Agilent 708～DS自动溶出仪;Agilent 1200高效液相色谱仪;BSA224s～cw 电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）;甲醇（色谱纯，默克公司）;其余为分析纯;野黄芩苷对照品（购于中国食品药品检定研究院，批号110842-200403）灯盏花素软胶囊（批号：20131101，20131102，20131103，云南省药物研究所提供）
2 方法与结果
2.1 对照溶液的制备 取野黄芩苷对照品适量，精密称定，加磷酸盐缓冲液（PH6.8）制成每1mL中含80ug的溶液，作为对照品溶液。
2.2 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-0.1%磷酸溶液（35：65）为流动相;流速为每分钟1 mL。理论板数按野黄芩苷峰计算不低于4000。
2.3 供试品溶液的制备 取样品，照溶出度测定法（《中国药典》2010年版二部附录XC第二法），以磷酸盐缓冲液（PH6.8）500 mL为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经40 min时，取溶液滤过，续滤液作为供试品溶液;
2.4 溶出介质的选择 灯盏花素在水中几乎不溶，分别选用PH4.5醋酸盐溶液、PH6.8磷酸盐溶液、0.25%十二烷基硫酸钠溶液、0.5%十二烷基硫酸钠溶液为溶出介质[4]，测定结果溶出度分别为18.7%，83.9%，28.0%，15.9%;灯盏花素软胶囊在PH6.8磷酸盐溶液溶出量最高，选用PH6.8磷酸盐溶液为溶出液。
2.5 溶出介质体积的选择 考虑到溶出度测定的准确度，灯盏花素软胶囊每粒含灯盏花素40 m，溶出介质500 mL，溶出液的浓度80 ug/mL。灯盏花素在磷酸盐缓冲液（pH 6.8）中溶解度为4.6 mg/mL[5]，其在500 mL的磷酸盐缓冲液（pH 6.8）中的饱和溶解量超过每粒所含药物量（40 mg）的10倍，达到漏槽条件，确定溶出介质500 mL。
2.6 溶出度测定方法的验证
2.6.1 系统适用性试验 取灯盏花软胶囊的空白辅料适量，按供试品溶液的制备方法制备阴性，分别取对照品溶液、溶出液，以及阴性样品溶出液分别进样分析。色谱图如图所示，被测组分分离效果较好，所用溶剂和辅料对溶出检测结果无影响，野黄芩苷达到基线分离，理论板数为4000。
A.阴性样品;B.对照品;C.样品;
图1 灯盏花素软胶囊中野黄芩苷测定图
2.6.2 线性关系考察试验 精密称取野黄芩苷对照品适量，加磷酸盐缓冲液（PH6.8）溶解并稀释至刻度，摇匀，制得对照品母液（0.838 mg/mL），分别精密吸取对照品母液1 mL 置2 mL、5 mL、10 mL、50 mL的容量瓶中，用磷酸盐缓冲液（PH6.8）稀释并定容至刻度，摇匀。精密吸取5μL，分别进样，以浓度（X）对峰面积（Y）进行线性回归，得回归方程y=32040x-24.554，r=0.9991，灯盏花素在0.017 mg/mL～0.838 mg/mL范围内呈良好的线性关系。
2.6.3 重复性试验 取同一批供试品，照溶出度测定法（中国药典2010版二部附录X C 第二法溶出，分别测定野黄芩苷含量，测定结果显示重复性好，溶出度平均值87.11%，RSD为1.35%。
2.6.4 稳定性试验 取溶出液分别于0h、1h、3h、6h、9h、12h、18h、24h进样测定，溶出液24 h无显著性变化，溶出液较为稳定，RSD值1.85%。
2.6.5 准确度试验 精密称取野黄芩苷对照品20 mg至50 mL量瓶中，加磷酸盐缓冲液（PH6.8）溶解，稀释至刻度，作为对照储备液;分别精密量取对照储备液1 mL、2 mL、3 mL溶液至10 mL量瓶中，再按处方比例加入空白辅料3 mg、6 mg、9 mg，用磷酸盐缓冲液（PH6.8）稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得供试品溶液;另取上述对照储备液用磷酸盐缓冲液（PH6.8）稀释并制成每1 mL含0.08 mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液。取上述对照品溶液和供试品溶液，分别进样，按外标法计算，即得，实验结果回收率95%-105%之间，平均值97.8%，
2.6.6 范围试验 分别精密称取供试品0.5粒、1粒、1.5粒量各3份，照溶出度测定法溶出分别测定，RSD为1.74%。
2.6.7 中间精密度 3位不同人员对同一批供试品分别照溶出度溶出，Agilent1200，LC-2010A，Agilent1100不同高效液相进行检测，测定结果溶出度分别为，96.6%，94.1%，96.6%：RSD为2.64%。
2.6.8 耐用性实验 分别改变色谱条件中的流速为0.8 mL/min，1.0 mL/min，1.2 mL/min;柱温：20℃，30℃，40℃;流动相：甲醇—0.1%磷酸溶液（37：63），甲醇—0.1%磷酸溶液（35：65），甲醇—0.1%磷酸溶液（33：67）：柱子：Ecosil-C18，Kromasi 100-5 C18，Agilent Zorbax SB-C18，分别进样溶出液、对照品溶液，试验结果显示，测定条件有微的变动时，所用溶剂和辅料对溶出检测结果无影响，野黄芩苷峰分离度均1.5以上。
2.7 3批样品的溶出度测定 照溶出度测定法30 min的溶出度，测定3批样品（批号：20131101，20131102，20131103），测定结果见表1。
表1 3批样品溶出度测定结果
根据测定结果显示3批溶出度均大于80%，确定溶出度限度为标示量的80%。
3 讨论
溶出度是控制药品质量的重要指标，灯盏花素难溶性物質，生物利用度低，采用自乳化技术，增加灯盏花素溶解度，建立溶出度测定方法，更有效控制软胶囊质量。
溶出转速和溶出时间的选择，实验转速分别为 50转/min、75转/min和100转/min，分别在10、20、30、40、50和60 min的时间点取样，测定不同转速，不同时间的溶出度。从实验结果看出，转速50转/min灯盏花素软胶囊样品溶出度与75转/min溶出结果相近;转速100转/min溶出速度太快，10 min达最大浓度，不利于溶出度区分控制，确定转速50转/min;溶出度在40 min，50 min，60 min溶出值基本一致，且达到最大值，确定溶出时间40 min。
溶出度的溶出液检测方法采用高效液相色谱法，用高效液相色谱仪中的二极管阵列检测器检测得到野黄芩苷的最大吸收波长为335 nm，与文献一致，所以确定用335 nm作为此方法的检测波长。
检测方法色谱条件流动相研究，参考中国药典2010年版一部中“灯盏花素”含量测定方法及文献资料测定方方法，进行流动相的研究;流动相甲醇-0.1%磷酸溶液（40：60）[3]得到的野黄芩苷峰不能达到基线分离有拖尾峰;调整流动相甲醇-0.1%磷酸溶液野黄芩苷峰型达到基线分离，分离度达1.5以上，笔者选用甲醇-0.1%磷酸溶液（35：65）为溶出度检测的流动相。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].一部.北京：中国医药科技出版社，2015.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].四部.北京：中国医药科技出版社，2015.
[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].一部.北京：中国医药科技出版社，2010.
[4]周毅生，翟冬艳，段琼辉，等.灯盏花素口崩片质量标准的研究[J].中成药，2007，29：1446-1450.
[5]赵梅，谷俊峰.HPLC 法测定灯盏花素注射液中灯盏花乙素的含量[D].贵州医学院学报，2011，4：360.
[6]邵鑫，周洁，姚武.灯盏花素片中灯盏乙素含量的HPLC 法测定[D].黄山学院学报，2012，6：53-54.
[7]姜志远，刘世萍，曲婷.灯盏花素片溶出度测定方法的考察[J].中国药师，2011，（14）：1014-1016.
（收稿日期：2018-03-19）
