香诃止泻颗粒剂挥发油提取和包合工艺研究
柯瑾 梁玲 周田婷 朱培芳 乔宏亮 熊磊
摘要:目的建立广藿香挥发油提取和包合工艺条件。方法采用L9(3)4正交设计法对挥发油的提取和包合工艺进行考察。结果香诃止泻颗粒剂广藿香挥发油提取工艺优化为:浸泡4 h,加10倍水,回流提取8 h;挥发油β-环糊精包合工艺优化为:挥发油按1∶20(V/V)比例用乙醇溶解,挥发油与β-环糊精包合的比例为1∶8,挥发油醇溶液缓慢加入8%的β-CD溶液,55 ℃超声包合2 h。结论优化的提取和包合工艺合理、可行、稳定可控,可为申报医疗机构制剂奠定基础。
关键词:香诃止泻颗粒剂;广藿香酮;β-环糊精包合(β-CD)
中图分类号:R2842? ? 文献标志码:B? ? 文章编号:1007-2349(2018)06-0068-05
Study on Extraction and Inclusion Process of Volatile Oil from Xianghe Anti-diarrhea Granules
KE Jin1,Liang Ling1,ZHOU Tian-ting2,ZHU Pei-fang1,QIAO Hong-liang3,XIONG Lei1
(1 .Yunnan University of Traditional Chinese Medicine,Kunming 650500,China;
2 .Puer Songsao Grass Six Flavors Pharmaceutical Co ,Ltd ,Puer 665000,China;
3. Jilin Zixin Hannya Pharmaceutical Co ,Ltd ,Qingshi132300,China)
【Abstract】Objective:To establish the extraction and inclusion conditions for the volatile oil of patchouli Methods:L9(3)4 orthogonal design method was used to investigate the extraction and inclusion of volatile oil Results:The optimal extraction process of the volatile oil of patchouli from Xianghe anti-diarrhea granules was as follows:soak for 4 h,add 10 times water and reflux for 8 h The optimal inclusion process of the volatile oil of β-cyclodextrin was as follows:volatile oil at 1:20(V/V)dissolved by ethanol,the 1:8 of ratio of volatile oil to β-cyclodextrin,followed by slowly adding 8% of β-cyclodextrin solution for 2 hours of inclusion at 55°C ultrasound condition Conclusion:The optimal extraction and inclusion process is reasonable,feasible,stable and controllable,and can lay the foundation for applying pharmaceutical agents
【Key words】Xianghe anti-diarrhea granules,patchosterone,β-cyclodextrin inclusion(β-CD)
香訶止泻颗粒剂源于云南省名中医熊磊治疗小儿泄泻的临床效验方,临床疗效确切。本方具芳香化湿、运脾止泻之功,主治小儿脾气不运、湿浊内阻之泄泻[1]。由云南主产药材藿香、葛根、诃子、石榴皮等9味中药组成。中医认为,泄泻病变主要在脾胃,尤其与脾的运化功能失调关系密切[2]。脾主升清,胃主降浊,若脾胃失常,清气不升,浊气不降,清浊相并,下走大肠则至泄泻。前人亦有“无湿不成泻”、“湿多成五泻”之说,故治疗上总以运脾化湿为基本原则[3]。
香诃止泻汤中广藿香味辛、性微温、入脾胃经,具有芳香化浊,化湿止呕之功[4];诃子性平、味酸涩,酸能收敛,涩能止泻[5],与广藿香共为君药,两药相配,共凑健脾化湿、温胃化浊、涩肠止泻之功,且有标本兼治之妙。葛根味辛甘、性凉,入脾胃经,具有生津止渴,升阳止泻之功[6],茯苓健脾利水渗湿[7],车前子渗湿止泻,能“利小便实大便”[8],三药共为臣药。其余药物能行气、化湿、消痞,分别针对呕吐、痞胀、疼痛等泄泻伴随症状起辅助治疗作用。诸药合用,共凑健脾除湿、运脾化浊、行气止痛、温中固涩之效,使湿去脾运则腹泻自愈。
剂型选择为疗效确切、服用方便、便于携带、成本低、口感好、儿童顺应性好的颗粒剂,既保持了传统的中医药用药特色,又能最大限度地提取并保留处方中药挥发油不在煎煮过程中的挥散,本研究对方中君药广藿香挥发油的提取和包合进行研究。
1 仪器与试药
1.1.仪器Agilent1200高效液相色谱仪(美国Agilent公司);C18色谱柱(ZOR BAX SAX-C18 46×250 mm,5 μm);万分之一分析天平(上海菁海仪器有限公司);电子秤(余姚市金诺天平仪器有限公司);超声波清洗机(YL-040S型,上海冠特超声仪器有限公司);电子调温电热套(PHTW型,巩义市器华仪器有限责任公司);多头磁力加热搅拌器(HJ-4B型,常州国华电器有限公司),电热恒温干燥箱(DHG-9071A型,上海精宏实验设备有限公司)。
1.2.药材与试剂广藿香选用《中国药典》(2015版一部)收载的正品(批号:150201),购自云南泰华丰功药业有限公司。β-CD(纯度≥990%,上海瑞永生物科技有限公司);广藿香酮(纯度>98%,批号为151014,成都普菲德生物技术有限公司)。乙腈(色谱纯,默克股份两合公司;磷酸、乙醇(分析纯,天津市大茂化学试剂厂);纯净水(娃哈哈公司)。
1.3.试验方法
1.3.1.广藿香酮含量测定方法研究[10]
1.3.1.1.色谱条件色谱柱:C18色谱柱(ZOR BAX SAX-C18,46×250 mm,5 μm)流动相:乙腈-02%磷酸溶液(60∶40,V/V),等度洗脱15 min;检测波长:310 nm;流速:1 mL/min;柱温:35 ℃。
1.3.1.2.对照品溶液的制备取广藿香酮适量,加乙醇制成1 mL含22 μg的溶液,045 μm微孔滤膜过滤,取续滤液,即得。
1.3.1.3.供试品溶液的制备取广藿香油适量,加乙醇制成1 mL含500 μg的供试品溶液,045 μm微孔滤膜过滤,取续滤液,即得。
1.3.1..4线性关系考察精密吸取对照品溶液1,2,4,8,12,16,20 μL,测定峰面积,以峰面积(Y)对进样量μg(X)进行线性回归。
1.3.1.5.精密度考察精密吸取对照品溶液10 μL,连续测定6次,记录峰面积。
1.3.1.6.重现性考察取适量广藿香油,按供试品溶液制备方法平行操作6份,测定广藿香酮峰面积,计算广藿香酮含量。
1.3.1.7.稳定性试验精密吸取同一供试品溶液,于0,2,4,8,12 h分别进样,测定并记录峰面积。
1.3.1.8.加样回收率试验同一批广藿香油(含量:365%)取6份,每份005 g,精密称定。分别精密加入一定量的广藿香酮对照品溶液(约为样品中广藿香酮含量的10倍量),按供试品溶液制备方法制备样品,分别测定广藿香酮峰面积,计算回收率。
1.3.1.9.耐用性考察改变柱温、流速、波长、流动相比例,考察峰面积的差异。
样品的测定 取3份样品,每份01 g,按供试品溶液制备方法制备样品,测定样品中广藿香酮的含量。
1.3.2.挥发油提取工艺研究[11]
1.3.2.1.挥发油提取率考察广藿香750 g,8倍量水,浸泡8 h,从出第一滴蒸馏水开始计时,记录不同时间点挥发油体积并计算提取率(挥发油提取率(%)=挥发油收得量( mL)/药材重量(g)×100)。
1.3.2.2.提取工艺正交考察经预试验,以广藿香油中广藿香酮的含量和挥发油提取率为综合评分指标,进行L9(34)正交实验,筛选药材浸泡时间,加水量以及提取时间条件,以确定最佳提取条件,因素水平见表1。(综合评分=广藿香酮的含量/0289×30%+挥发油得率/001×70%)
1.3.2.3.验证试验取同一批广藿香3份,每份200 g,加10倍水,浸泡4 h,提取8 h,测定挥发油提取率和广藿香酮含量。
1.3.3.挥发油包合工艺研究[12]
1.3.3.1.包合物中挥发油的测定将已称定重量的包合物置于圆底烧瓶中,加入200 mL蒸馏水,连接挥发油提取器。按2015年版《中华人民共和国药典》(四部)通则目次2204挥发油测定法项下操作,读取挥发油体积,计算包合物的挥发油包封率(包封率(%)=包合物中挥发油回收量( mL)/(挥发油加入量( mL)×空白回收率)×100)。
1.3.3.2.挥发油空白回收率的测定量取挥发油10 mL,置于圆底烧瓶中,加入200 mL蒸馏水,按“222”方法蒸馏,记录挥发油体积,计算空白回收率(空白回收率(%)=挥发油回收量( mL)/量取挥发油量( mL)×100)。
1.3.3.3.包合方法的篩选取2份β-CD制成8%的饱和水溶液,将1 mL广藿香挥发油用20 mL乙醇溶解,恒温50℃下分别在电动搅拌、超声状态下将挥发油乙醇溶液慢慢滴入β-CD饱和水溶液中,包合2 h。待包合溶液冷却至室温后,放入冰箱冷藏过夜,抽滤,包合物用少量乙醇多次洗涤,置恒温烘箱中(40℃)下干燥24 h,称重,计算包合物得率和包封率
1.3.3.4.乙醇浓度的考察取1 mL广藿香挥发油3份,分别用无水乙醇、乙醇、90%乙醇20 mL溶解,恒温50℃下加入8%β-CD饱和溶液,超声法包合2 h,计算得率和包封率。
1.3.3.5.乙醇用量的考察将1 mL广藿香挥发油分别用10 mL、15 mL、20 mL乙醇溶解,照“1334”制备包合物,计算得率和包封率。
1.3.3.6.广藿香挥发油包合的正交试验经初步试验,以挥发油包封率为指标,进行L9(34)正交试验,筛选挥发油与β-CD的比例、β-CD的浓度、包合温度、包合时间条件,以确定最佳包合条件,因素水平表见表2
1.3.3.7.验证试验称取3份β-CD于锥形瓶中,照“1336”筛选最佳条件进行包合,测定挥发油回收量,计算得率和包封率。
2 结果与分析
2.1.广藿香挥发油提取工艺研究
2.1.1.广藿香酮含量测定方法研究
2.1.1.1.线性关系考察线性回归方程为:Y=68838X-45596,r =1。表明广藿香酮进样量在00224~0448 μg时,其与峰面积呈良好的线性关系,结果见图3。
2.1.1.2.精密度考察6次测定广藿香酮峰面积RSD为018%,表明仪器精密度良好。
2.1.1.3.重复性考察广藿香酮含量计算RSD为115%,广藿香酮平均含量为365%,表面该方法重现性良好。
2.1.1.4.稳定性考察 以广藿香酮的峰面积计算RSD為033%,表明供试品溶液0~12 h内稳定。
2.1.1.5.加样回收率考察平均回收率为9724%,RSD为175%。
2.1.1.6.耐受性考察该方法耐受性良好,结果见表3:
因为检测器属于浓度型检测器,当样品量一定时,检测器瞬间响应,峰高响应值与流动相流速无关,峰面积响应值与流动相流速成反比,峰面积与流速乘积为常数;且08×8378≈12×5592,所以,该方法耐用性好。
2.1.1.7.样品测定三批样品广藿香酮含量分别为364%、365%和365%,说明该方法稳定可控。
2.2.挥发油提取工艺研究
2.2.1.广藿香挥发油提取率考察由表4和图4可知藿香挥发油在提取8h以后就不再出油,所以在提取工艺研究中设8 h为最长的提取时间。
2.2.2.挥发油提取工艺正交试验结果由表5可知B>C>A,由此可见提取时间对挥发油得率和藿香油的广藿香酮含量影响较大;初步确定最佳提取条件为A1B3C2,即浸泡时间为4 h,提取时间为8 h,加水量为10倍量。
2.2.3.验证试验三批样品挥发油得率分别为08%、08%、08%,广藿香酮含量分别为258%、256%、258%,说明此提取条件稳定可行。
2.3.挥发油包合工艺研究
2.3.1.挥发油空白回收率考察本实验空白回收率为90%。
2.3.2.包合方法考察超声法的包合效果比电动搅拌法稍好,所以采用超声法包合结果见表6。
2.3.4.乙醇浓度考察用乙醇溶解挥发油制备包合物的包封率高于用90%乙醇和无水乙醇,因此,选择乙醇作广藿香挥发油溶剂,结果见表7。
2.3.5.乙醇用量考察将1 mL挥发油用20 mL乙醇溶解包合效果最佳,因此确定为包合条件,结果见表8。
2.3.6.正交试验结果由表9可知,A>B>C>D,因此得出结论:各因素对包合物挥发油包封率的影响大小为:挥发油与β-CD比例>β-CD浓度>包合温度>包合时间。确定最佳包合条件为A3B1C3D3,即最佳包合条件为挥发油:β-CD为1:8,β-CD浓度为8%,55℃包合2h。
2.3.7.验证试验该包合条件较稳定,结果见表10。
3 结论
本试验研究建立了香诃止泻颗粒剂挥发油提取及包合工艺。通过正交试验筛选,确定香诃止泻颗粒剂广藿香挥发油提取工艺为:浸泡4 h,加10倍水,回流提取8 h;挥发油β-环糊精包合工艺为:挥发油按1:20(V/V)比例用乙醇溶解,挥发油与β-环糊精包合的比例为1∶8,挥发油醇溶液缓慢加入8%的β-CD溶液,55 ℃超声包合2 h。本工艺条件合理稳定可控,为制剂研发医疗机构制剂奠定基础。
参考文献:
[1]聂坚,谢宇环,陈柏君,等芳香类中药在儿科临床运用及展望[J].云南中医学院学报,2015,38(2):87-100
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[3]葛涛涛,邹胜男杨季国教授治疗小儿泄泻四法经验[J].中医儿科杂志,2016,12(4):15-17
[4]徐雯,吴艳清,丁浩然广藿香的药理作用及机制研究进展[J].上海中医药杂志,2017,51(10):103-106
[5]王嘉伦,王培杰,易智威,等诃子的化学成分、药理作用及炮制配伍应用研究进展[J].中医药信息,2016,33(3):123-126
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摘要:目的建立广藿香挥发油提取和包合工艺条件。方法采用L9(3)4正交设计法对挥发油的提取和包合工艺进行考察。结果香诃止泻颗粒剂广藿香挥发油提取工艺优化为:浸泡4 h,加10倍水,回流提取8 h;挥发油β-环糊精包合工艺优化为:挥发油按1∶20(V/V)比例用乙醇溶解,挥发油与β-环糊精包合的比例为1∶8,挥发油醇溶液缓慢加入8%的β-CD溶液,55 ℃超声包合2 h。结论优化的提取和包合工艺合理、可行、稳定可控,可为申报医疗机构制剂奠定基础。
关键词:香诃止泻颗粒剂;广藿香酮;β-环糊精包合(β-CD)
中图分类号:R2842? ? 文献标志码:B? ? 文章编号:1007-2349(2018)06-0068-05
Study on Extraction and Inclusion Process of Volatile Oil from Xianghe Anti-diarrhea Granules
KE Jin1,Liang Ling1,ZHOU Tian-ting2,ZHU Pei-fang1,QIAO Hong-liang3,XIONG Lei1
(1 .Yunnan University of Traditional Chinese Medicine,Kunming 650500,China;
2 .Puer Songsao Grass Six Flavors Pharmaceutical Co ,Ltd ,Puer 665000,China;
3. Jilin Zixin Hannya Pharmaceutical Co ,Ltd ,Qingshi132300,China)
【Abstract】Objective:To establish the extraction and inclusion conditions for the volatile oil of patchouli Methods:L9(3)4 orthogonal design method was used to investigate the extraction and inclusion of volatile oil Results:The optimal extraction process of the volatile oil of patchouli from Xianghe anti-diarrhea granules was as follows:soak for 4 h,add 10 times water and reflux for 8 h The optimal inclusion process of the volatile oil of β-cyclodextrin was as follows:volatile oil at 1:20(V/V)dissolved by ethanol,the 1:8 of ratio of volatile oil to β-cyclodextrin,followed by slowly adding 8% of β-cyclodextrin solution for 2 hours of inclusion at 55°C ultrasound condition Conclusion:The optimal extraction and inclusion process is reasonable,feasible,stable and controllable,and can lay the foundation for applying pharmaceutical agents
【Key words】Xianghe anti-diarrhea granules,patchosterone,β-cyclodextrin inclusion(β-CD)
香訶止泻颗粒剂源于云南省名中医熊磊治疗小儿泄泻的临床效验方,临床疗效确切。本方具芳香化湿、运脾止泻之功,主治小儿脾气不运、湿浊内阻之泄泻[1]。由云南主产药材藿香、葛根、诃子、石榴皮等9味中药组成。中医认为,泄泻病变主要在脾胃,尤其与脾的运化功能失调关系密切[2]。脾主升清,胃主降浊,若脾胃失常,清气不升,浊气不降,清浊相并,下走大肠则至泄泻。前人亦有“无湿不成泻”、“湿多成五泻”之说,故治疗上总以运脾化湿为基本原则[3]。
香诃止泻汤中广藿香味辛、性微温、入脾胃经,具有芳香化浊,化湿止呕之功[4];诃子性平、味酸涩,酸能收敛,涩能止泻[5],与广藿香共为君药,两药相配,共凑健脾化湿、温胃化浊、涩肠止泻之功,且有标本兼治之妙。葛根味辛甘、性凉,入脾胃经,具有生津止渴,升阳止泻之功[6],茯苓健脾利水渗湿[7],车前子渗湿止泻,能“利小便实大便”[8],三药共为臣药。其余药物能行气、化湿、消痞,分别针对呕吐、痞胀、疼痛等泄泻伴随症状起辅助治疗作用。诸药合用,共凑健脾除湿、运脾化浊、行气止痛、温中固涩之效,使湿去脾运则腹泻自愈。
剂型选择为疗效确切、服用方便、便于携带、成本低、口感好、儿童顺应性好的颗粒剂,既保持了传统的中医药用药特色,又能最大限度地提取并保留处方中药挥发油不在煎煮过程中的挥散,本研究对方中君药广藿香挥发油的提取和包合进行研究。
1 仪器与试药
1.1.仪器Agilent1200高效液相色谱仪(美国Agilent公司);C18色谱柱(ZOR BAX SAX-C18 46×250 mm,5 μm);万分之一分析天平(上海菁海仪器有限公司);电子秤(余姚市金诺天平仪器有限公司);超声波清洗机(YL-040S型,上海冠特超声仪器有限公司);电子调温电热套(PHTW型,巩义市器华仪器有限责任公司);多头磁力加热搅拌器(HJ-4B型,常州国华电器有限公司),电热恒温干燥箱(DHG-9071A型,上海精宏实验设备有限公司)。
1.2.药材与试剂广藿香选用《中国药典》(2015版一部)收载的正品(批号:150201),购自云南泰华丰功药业有限公司。β-CD(纯度≥990%,上海瑞永生物科技有限公司);广藿香酮(纯度>98%,批号为151014,成都普菲德生物技术有限公司)。乙腈(色谱纯,默克股份两合公司;磷酸、乙醇(分析纯,天津市大茂化学试剂厂);纯净水(娃哈哈公司)。
1.3.试验方法
1.3.1.广藿香酮含量测定方法研究[10]
1.3.1.1.色谱条件色谱柱:C18色谱柱(ZOR BAX SAX-C18,46×250 mm,5 μm)流动相:乙腈-02%磷酸溶液(60∶40,V/V),等度洗脱15 min;检测波长:310 nm;流速:1 mL/min;柱温:35 ℃。
1.3.1.2.对照品溶液的制备取广藿香酮适量,加乙醇制成1 mL含22 μg的溶液,045 μm微孔滤膜过滤,取续滤液,即得。
1.3.1.3.供试品溶液的制备取广藿香油适量,加乙醇制成1 mL含500 μg的供试品溶液,045 μm微孔滤膜过滤,取续滤液,即得。
1.3.1..4线性关系考察精密吸取对照品溶液1,2,4,8,12,16,20 μL,测定峰面积,以峰面积(Y)对进样量μg(X)进行线性回归。
1.3.1.5.精密度考察精密吸取对照品溶液10 μL,连续测定6次,记录峰面积。
1.3.1.6.重现性考察取适量广藿香油,按供试品溶液制备方法平行操作6份,测定广藿香酮峰面积,计算广藿香酮含量。
1.3.1.7.稳定性试验精密吸取同一供试品溶液,于0,2,4,8,12 h分别进样,测定并记录峰面积。
1.3.1.8.加样回收率试验同一批广藿香油(含量:365%)取6份,每份005 g,精密称定。分别精密加入一定量的广藿香酮对照品溶液(约为样品中广藿香酮含量的10倍量),按供试品溶液制备方法制备样品,分别测定广藿香酮峰面积,计算回收率。
1.3.1.9.耐用性考察改变柱温、流速、波长、流动相比例,考察峰面积的差异。
样品的测定 取3份样品,每份01 g,按供试品溶液制备方法制备样品,测定样品中广藿香酮的含量。
1.3.2.挥发油提取工艺研究[11]
1.3.2.1.挥发油提取率考察广藿香750 g,8倍量水,浸泡8 h,从出第一滴蒸馏水开始计时,记录不同时间点挥发油体积并计算提取率(挥发油提取率(%)=挥发油收得量( mL)/药材重量(g)×100)。
1.3.2.2.提取工艺正交考察经预试验,以广藿香油中广藿香酮的含量和挥发油提取率为综合评分指标,进行L9(34)正交实验,筛选药材浸泡时间,加水量以及提取时间条件,以确定最佳提取条件,因素水平见表1。(综合评分=广藿香酮的含量/0289×30%+挥发油得率/001×70%)
1.3.2.3.验证试验取同一批广藿香3份,每份200 g,加10倍水,浸泡4 h,提取8 h,测定挥发油提取率和广藿香酮含量。
1.3.3.挥发油包合工艺研究[12]
1.3.3.1.包合物中挥发油的测定将已称定重量的包合物置于圆底烧瓶中,加入200 mL蒸馏水,连接挥发油提取器。按2015年版《中华人民共和国药典》(四部)通则目次2204挥发油测定法项下操作,读取挥发油体积,计算包合物的挥发油包封率(包封率(%)=包合物中挥发油回收量( mL)/(挥发油加入量( mL)×空白回收率)×100)。
1.3.3.2.挥发油空白回收率的测定量取挥发油10 mL,置于圆底烧瓶中,加入200 mL蒸馏水,按“222”方法蒸馏,记录挥发油体积,计算空白回收率(空白回收率(%)=挥发油回收量( mL)/量取挥发油量( mL)×100)。
1.3.3.3.包合方法的篩选取2份β-CD制成8%的饱和水溶液,将1 mL广藿香挥发油用20 mL乙醇溶解,恒温50℃下分别在电动搅拌、超声状态下将挥发油乙醇溶液慢慢滴入β-CD饱和水溶液中,包合2 h。待包合溶液冷却至室温后,放入冰箱冷藏过夜,抽滤,包合物用少量乙醇多次洗涤,置恒温烘箱中(40℃)下干燥24 h,称重,计算包合物得率和包封率
1.3.3.4.乙醇浓度的考察取1 mL广藿香挥发油3份,分别用无水乙醇、乙醇、90%乙醇20 mL溶解,恒温50℃下加入8%β-CD饱和溶液,超声法包合2 h,计算得率和包封率。
1.3.3.5.乙醇用量的考察将1 mL广藿香挥发油分别用10 mL、15 mL、20 mL乙醇溶解,照“1334”制备包合物,计算得率和包封率。
1.3.3.6.广藿香挥发油包合的正交试验经初步试验,以挥发油包封率为指标,进行L9(34)正交试验,筛选挥发油与β-CD的比例、β-CD的浓度、包合温度、包合时间条件,以确定最佳包合条件,因素水平表见表2
1.3.3.7.验证试验称取3份β-CD于锥形瓶中,照“1336”筛选最佳条件进行包合,测定挥发油回收量,计算得率和包封率。
2 结果与分析
2.1.广藿香挥发油提取工艺研究
2.1.1.广藿香酮含量测定方法研究
2.1.1.1.线性关系考察线性回归方程为:Y=68838X-45596,r =1。表明广藿香酮进样量在00224~0448 μg时,其与峰面积呈良好的线性关系,结果见图3。
2.1.1.2.精密度考察6次测定广藿香酮峰面积RSD为018%,表明仪器精密度良好。
2.1.1.3.重复性考察广藿香酮含量计算RSD为115%,广藿香酮平均含量为365%,表面该方法重现性良好。
2.1.1.4.稳定性考察 以广藿香酮的峰面积计算RSD為033%,表明供试品溶液0~12 h内稳定。
2.1.1.5.加样回收率考察平均回收率为9724%,RSD为175%。
2.1.1.6.耐受性考察该方法耐受性良好,结果见表3:
因为检测器属于浓度型检测器,当样品量一定时,检测器瞬间响应,峰高响应值与流动相流速无关,峰面积响应值与流动相流速成反比,峰面积与流速乘积为常数;且08×8378≈12×5592,所以,该方法耐用性好。
2.1.1.7.样品测定三批样品广藿香酮含量分别为364%、365%和365%,说明该方法稳定可控。
2.2.挥发油提取工艺研究
2.2.1.广藿香挥发油提取率考察由表4和图4可知藿香挥发油在提取8h以后就不再出油,所以在提取工艺研究中设8 h为最长的提取时间。
2.2.2.挥发油提取工艺正交试验结果由表5可知B>C>A,由此可见提取时间对挥发油得率和藿香油的广藿香酮含量影响较大;初步确定最佳提取条件为A1B3C2,即浸泡时间为4 h,提取时间为8 h,加水量为10倍量。
2.2.3.验证试验三批样品挥发油得率分别为08%、08%、08%,广藿香酮含量分别为258%、256%、258%,说明此提取条件稳定可行。
2.3.挥发油包合工艺研究
2.3.1.挥发油空白回收率考察本实验空白回收率为90%。
2.3.2.包合方法考察超声法的包合效果比电动搅拌法稍好,所以采用超声法包合结果见表6。
2.3.4.乙醇浓度考察用乙醇溶解挥发油制备包合物的包封率高于用90%乙醇和无水乙醇,因此,选择乙醇作广藿香挥发油溶剂,结果见表7。
2.3.5.乙醇用量考察将1 mL挥发油用20 mL乙醇溶解包合效果最佳,因此确定为包合条件,结果见表8。
2.3.6.正交试验结果由表9可知,A>B>C>D,因此得出结论:各因素对包合物挥发油包封率的影响大小为:挥发油与β-CD比例>β-CD浓度>包合温度>包合时间。确定最佳包合条件为A3B1C3D3,即最佳包合条件为挥发油:β-CD为1:8,β-CD浓度为8%,55℃包合2h。
2.3.7.验证试验该包合条件较稳定,结果见表10。
3 结论
本试验研究建立了香诃止泻颗粒剂挥发油提取及包合工艺。通过正交试验筛选,确定香诃止泻颗粒剂广藿香挥发油提取工艺为:浸泡4 h,加10倍水,回流提取8 h;挥发油β-环糊精包合工艺为:挥发油按1:20(V/V)比例用乙醇溶解,挥发油与β-环糊精包合的比例为1∶8,挥发油醇溶液缓慢加入8%的β-CD溶液,55 ℃超声包合2 h。本工艺条件合理稳定可控,为制剂研发医疗机构制剂奠定基础。
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