外周注射Ghrelin对非洲雏鸵鸟大肠中纤维素酶活性的影响

    陈迪杰　杨杰　王家乡

    摘要：为了研究Ghrelin对非洲雏鸵鸟大肠中纤维素酶活性的影响，为非洲雏鸵鸟的生长发育及饲养管理提供理论依据，试验选取16羽45日龄非洲雏鸵鸟，平均体重（5.5±0.8） kg，按照雌雄各半的原则随机分成4组（每组2个重复，每个重复2羽）。采用颈部皮下注射不同浓度Ghrelin（0、10、50、100 μg/kg，生理盐水稀释，注射剂量为1 μL/羽）后，检测大肠中纤维素酶的活性变化，试验期7 d。结果显示，一定剂量的Ghrelin能够促进雏鸵鸟大肠中纤维素酶的活性，从而增强其消化吸收能力，促进雏鸵鸟的生长。

    关键词：非洲雏鸵鸟；Ghrelin；纤维素酶；大肠

    中图分类号：S829.9 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2018）05-0008-02

    非洲鸵鸟（African ostrich）原产于非洲草原和阿拉伯沙漠地带，属鸟纲鸵鸟目的食草性鸟类，也是目前现存鸟类中的惟一的二趾鸟类。人工饲养的鸵鸟主要有3种类型：红颈鸵鸟、蓝颈鸵鸟、黑颈鸵鸟，其中黑颈鸵鸟即南非选育的非洲鸵鸟[1]。非洲鸵鸟的消化道具有很强的酵解作用，特别是对粗纤维具有极强的消化分解能力，因此本研究通过采用颈部皮下注射不同浓度Ghrelin后，检测其盲肠和结肠肠中纤维素酶的活性变化，探明Ghrelin对非洲雏鸵鸟消化能力的影响，从而为非洲雏鸵鸟的生长发育及饲养管理提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 试验材料

    1.1.1 试验动物 选取健康的45 d非洲雏鸵鸟16羽，平均体重（5.5±0.8） kg，随机分为4组，每组4羽，雌雄不限，均来自于长江大学鸵鸟研究所。

    1.1.2 试验基础日粮 试验过程使用自配育雏料，主要是由青菜配合肉用仔鸡前期配合饲料，饲料使用荆州海大饲料有限公司的产品。

    1.1.3 试剂 非洲鸵鸟Ghrelin，GSS（Octanoyl）FLSPEYKKIQKQKDPKKPTTKLHC由上海强耀生物科技有限公司合成。

    1.2 试验方法

    1.2.1 试验设计 颈部皮下注射不同浓度外源性Ghrelin，其浓度分别为0（对照组）、10、50、100 μg/kg，用生理盐水稀释，注射剂量为1 μL/羽，注射时间为每天上午8：00，连续注射6 d，于第7天上午8：00取材。

    1.2.2 饲养管理 整个饲养阶段在长江大学鸵鸟研究所进行，为避免影响试验效果，雏鸵鸟采用分栏饲养。每天定时给料，具体时间为8：00、11：00、14：00、17：00四个时间段各喂一次，记录每天总采食量。在试验开始前，对鸵鸟舍全场进行全面彻底喷雾式消毒，在饲喂试验期间，严格按照长江大学鸵鸟研究所消毒程序进行消毒。

    1.2.3 样品的采集与处理 饲养至第7天的非洲雏鸵鸟称重。经跖静脉注射10%的乌拉坦（1 g/kg）稀释液进行全身麻醉，打开腹腔迅速取部分盲肠和结腸食糜放入10 mL带盖离心管中，立即放入液氮罐中速冻20 min后取出放入-80 ℃冰箱中冷冻保存，供测定酶活性用。

    1.2.4 纤维素酶活的测定 准确称取食糜质量，按质量（g）∶试剂一（mL）=1∶9的比例加入9倍体积的试剂一，冰水浴匀浆，4 000 r/min常温离心10 min，取匀浆上清液一部分待测，另一部分沸水浴5 min（使酶失活）后取出冷却，制成煮沸的匀浆上清液。向测定管加入匀浆上清液50 μL，对照管加入煮沸的匀浆上清液50 μL。再分别向上述测定管、对照管加入试剂一50 μL、试剂二200 μL、蒸馏水50 μL，混匀，37 ℃孵育30 min后，立即取出放入沸水浴中煮沸15 min，取出流水冷却，4 000 r/min常温离心10 min，制备糖化液上清液。另取两支试管，作为测定管和对照管。分别向测定管和对照管加入糖化液上清液50 μL，空白管加入蒸馏水50 μL，标准管加入2 mg/mL葡萄糖标准液50 μL，再向上述测定管、对照管、空白管及标准管分别加入试剂三150 μL，混匀，沸水浴反应15 min，取出流水冷却。再向上述各管加入蒸馏水1 000 μL，混匀，波长550 nm，1 cm光径，去离子水调零，测定各管OD值（南京建成，货号：A138）。

    1.3 统计分析

    获得的全部数据用SAS数据处理软件进行统计分析。所得数据以平均数±标准差表示，通过t检验法比较各组间的差异显著性。P<0.05为差异显著，P>0.05为差异不显著。

    2 结果与分析

    从表1中可以看出，当Ghrelin浓度为10 μg/kg时，雏鸵鸟盲肠中纤维素酶的活性增加，且与对照相比差异显著（P<0.05），结肠中纤维素酶的活性虽然有所降低，但与对照相比差异不显著（P<0.05）；当Ghrelin浓度为50 μg/kg时，盲肠和结肠中纤维素酶的活性都降低，且与对照相比差异均显著（P<0.05）；当Ghrelin浓度为100 μg/kg时，盲肠和结肠中纤维素酶的活性都增加，且与各组差异均达显著水平（P<0.05）。以上结果说明， 一定剂量的Ghrelin能够促进雏鸵鸟大肠中纤维素酶的活性，从而增强其消化吸收能力，促进雏鸵鸟的生长。

    3 小结与讨论

    纤维素酶是起协同作用的多组分酶系，有研究认为该酶系中的组分可分为两类，I类水解可溶性纤维素较水解不溶性纤维素更为容易，Ⅱ类则相反[2]。鸡、鸭、鹅等动物的粗纤维几乎全部是在盲肠内被消化的，这种消化依赖于盲肠微生物产生的纤维素酶，并且纤维素底物对酶解的敏感度受其结构的影响很大，包括纤维中木质素的含量、比表面积、结晶度及聚合度等[3]。已有研究表明不同品种的鸡盲肠纤维素酶活力不同[4]，本研究结果表明，鸵鸟的纤维素酶在结肠和盲肠中都存在，盲肠中的活性远远大于结肠，这就从理论上解释了为什么鸵鸟能够消化纤维素，且进一步说明鸵鸟的粗纤维除在盲肠内被消化外，在结肠中也有部分被消化，且高剂量的Ghrelin能够增加盲肠和结肠中纤维素酶的活性，从而提高雏鸵鸟的消化能力。

    参考文献：

    [1] 王益民，任战军，石芳萍.非洲黑颈鸵鸟原种繁殖性能研究[J].西北农业学报，2007，16（1）：43-44.

    [2] 王 璋.食品酶学[M].北京：轻工业出版社，1990.

    [3] 那 安，崔福绵，马建华，等.康氏木霉AS3.4001纤维素酶系的研究[J].微生物学报，1985，25（1）：31-37.

    [4] 王 娟，臧素敏，元 娜，等.太行鸡、海兰灰蛋鸡生长期消化道主要酶系变化规律比较[J].西北农业学报，2010，19（6）：38-43.