鸡马立克氏病毒感染对鸡脑部神经系统损伤的研究

    张孝清

    摘要：选取4日龄无特定病原鸡分析鸡马立克氏病毒感染对鸡脑部神经系统损伤的影响，根据不同毒力特征（814、rMS、WC1203、Ms5、BS）MDV-1毒株感染，对不同接毒时间（接毒后1、3、5、7、10、14、21、28 d）动态检测病毒载量变化情况进行有效记录，对不同毒株感染后鸡脑部组织病理学检查结果进行分析。结果表明，不同毒力MDV-1毒株在无特定病原鸡脑部存在不同的复制规律，其中强毒自身的复制能力明显高于弱毒，而特超强病毒株早期复制速度最快;感染早期，强毒对无特定病原鸡脑组织神经系统损伤程度更高，与弱毒相比存在明显差异;感染21 d，强毒所造成的脑部损伤明显更强。说明不同毒株对无特定病原鸡所产生的脑神经系统损伤程度不同，毒株毒性越强损伤越重。

    关键词：鸡马立克氏病;病毒感染;神经系统

    中图分类号：S858.31? ? ? ? 文献标识码：A? ? ? ? 文章编号：1007-273X（2018）11-0006-02

    鸡马立克氏病属于鸡常见疾病，主要由鸡马立克氏病毒血清1型（MDV-1）引发，可对神经系统造成严重损伤，也会导致免疫抑制，属于接触性传染性疾病，对鸡饲养造成明显影响[1，2]。神經系统症状在马立克氏病毒感染的鸡群中不仅发病早，同时鸡只淘汰率较高。为进一步掌握鸡马立克氏病毒感染情况，试验对不同毒力MDV-1感染对神经系统损伤程度进行详细分析，并研究其结果，现做详细报道。

    1? 材料与方法

    1.1? 材料

    鸡：无特定病原鸡，购自国内某兽医研究所实验中心;病毒株：MDV-1毒株，购自世界生物资源中心（ATCC），由本实验室进行保存。

    试剂、仪器：分子生物水、DNA提取试剂盒、PBS。

    FQ-PCR引物：①检测基因为MDV-1特异基因Meq;②内参基因为鸡的管家基因Ovo。

    1.2? 方法

    取180羽无特定病原4日龄鸡，随机分组，每组30羽，采用负压隔离器对其进行饲养。6组鸡分别采用腹腔接种方法，以1 000 PFU/羽剂量将814、rMS、WC1203、Ms5、BS病毒株注射给6组试验鸡，病毒接种后，对其不同时间段脑部情况进行分析。

    1.3? 组织病理检查

    对上述不同组别鸡脑部组织进行收集，然后进行病理切片检查。采用10%福尔马林对神经组织进行有效固定，固定24 h后采用乙醇进行脱水处理，并采用二甲苯、无水乙醇的混合液石蜡包埋。制备石蜡切片，做好染色处理，观察病理变化。

    1.4? 观察指标

    对不同毒力MDV-1毒株在无特定病原鸡脑部复制规律进行分析和对比，分析不同毒力对无特定病原鸡脑组织神经系统损伤程度，做好详细记录。

    1.5? 统计数据分析

    试验结果用Spss20.0软件分析，结果用（x±s）表示，用t检验，P<0.05差异有统计学意义。

    2? 结果与分析

    2.1? 病毒复制规律分析

    双重荧光定量检测方法证实，在不同时段下，不同毒力MDV-1毒株在无特定病原鸡脑部，存在不同的复制规律;强毒复制能力明显高于弱毒（P<0.05），而特超强病毒株早期复制速度最快。观察结果表明，①感染后5 d，可在BS株感染的鸡脑组织中发现病毒，感染7 d后均能检测出病毒，说明BS株增殖能力最强，与毒力等级呈正比关系;②感染10 d至最后，强毒载量一直高于弱毒（P<0.05），说明感染中晚期，毒力与病毒复制能力呈正相关;③感染10 d及21 d两个节点上，无论是强毒，还是弱毒，均出现2个复制高峰期。强毒感染17 d时，病毒载量呈现最低表现，弱毒感染14 d时最低，说明两种毒性在试验鸡脑部潜伏期不同。④接种病毒10 d后，不同弱毒株与其他三种强毒株在病毒载量上已经不存在明显差异性（P>0.05），说明感染中后期强毒之间的复制能力变化与毒力无明显关联（图1）。

    2.2? 脑神经组织病理学变化

    感染早期，强毒对无特定病原鸡脑组织神经系统损伤程度更高，与弱毒相比存在明显差异（P<0.05）。研究结果证实，感染5 d时，虽然能够在BS株感染后的脑组织中检测出马立克氏病毒，但是病理切片显示，感染5 d后，无论是强毒还是弱毒，受到感染的脑组织切片均会发生一定病理改变。强毒感染后，试验鸡脑组织多为局部胶质细胞浸润，弱毒感染后，试验鸡脑组织胶质细胞浸润比较有限，说明强毒对脑组织损伤程度更加严重。感染21 d，强毒所造成的脑部损伤明显更强，但是弱毒载量出现第2个高峰值，2种毒力对试验鸡脑部病理损伤程度有明显的差别。

    3? 小结与讨论

    研究发现，鸡马立克氏病毒感染毒力不断强化，我国鸡马立克氏病毒感染毒力变化情况与世界公认状况基本相符[3]。通过多年观察发现，我国鸡马立克氏病新分离出来的病毒株，在致病特征上出现一定改变，其中BS是我国分离出来的病毒株，毒力比较高，超过一般强毒及超强毒。

    结合MDV-1致病性，可将感染分为4种病原型，即温和型（mMDV）、强毒型（vMDV）、超强毒型（vvMDV）和特超强毒型（vv+MDV）。不同毒力毒株感染后，鸡产生的致病特征也不尽相同[4]。

    很多研究文献认为[5，6]，鸡马立克氏病毒血清1型的毒力越强，在病毒感染前期，其在鸡体内复制速度越快，同时也会显著增加病毒载量。通过研究复制动力学，基本上证实了这个规律，即致病性与病毒复制能力呈正相关。

    本研究结果显示，不同毒力 MDV-1 毒株在无特定病原鸡脑部，存在不同的复制规律，其中强毒自身的复制能力明显高于弱毒，而特超强病毒株早期复制速度最快;感染早期，强毒对无特定病原鸡脑组织神经系统损伤程度更高，与弱毒相比存在明显差异;感染21 d，强毒所造成的脑部损伤明显更强。不同毒株对无特定病原鸡所产生的脑神经系统损伤程度不同，毒株毒性越强损伤越重。

    参考文献：

    [1] 陈洋宙.鸡马立克氏病病毒Meq蛋白特异性单克隆抗体研制及其初步应用[D].扬州：扬州大学，2018.

    [2] 付? 丽，王海秋.鸡马立克氏病的诊断及综合防治分析[J].吉林畜牧兽医，2017，38（11）：42.

    [3] 朱? 婷.鸡马立克氏病病毒分离株AH1410的致病性与基因序列分析[D].江苏扬州：扬州大学，2018.

    [4] 周忠文，苏? 帅，崔? 宁，等.整合REVLTR的自然重组马立克氏病毒GX0101的全基因组序列分析[J].中国兽药杂志，2017，51（10）：1-10.

    [5] 王梦云，周宏达，韦美甜，等.马立克氏病毒UL36蛋白的表达及其去泛素化酶活性分析[J].畜牧与兽医，2017，49（5）：77-82.

    [6] 王守文.内脏型鸡马立克氏病继发大肠杆菌病例报告[J].山东畜牧兽医，2017，38（3）：78-79.