《外周血DNT细胞在自身免疫性疾病中的表达及意义》-理学论文，药学论文-论文范文参考-科学狗论文网

标题

外周血DNT细胞在自身免疫性疾病中的表达及意义

范文

江涛陈琳王雪野

【摘要】目的研究外周血双阴（double positive， DN）T细胞在自身免疫性疾病患者的分布特点，以及自身免疫性疾病患者经过免疫治疗后DNT细胞的变化情况。方法选择首次确诊未经治疗的38例自身免疫性疾病患者作为治疗前组，经过激素和或激素联合免疫抑制剂治疗后满4周的13例自身免疫性疾病患者作为治疗后组，同期30例健康体检者作为对照组。利用流式细胞术检测三组研究对象的外周血DNT细胞含量，比较三组研究对象外周血DNT细胞含量。结果治疗前组患者外周血DNT细胞含量为（4.93±2.78）%，高于对照组的（3.90±1.90）%，但差异无统计学意义（P>0.05）;治疗后组患者外周血DNT细胞含量为（2.20±0.80）%，低于治疗前组的（4.93±2.78）%，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论自

身免疫性疾病患者外周血DNT细胞含量高于健康人群，说明DNT细胞有免疫促进作用，自身免疫性疾病患者经过免疫治疗后DNT细胞较治疗前明显下降，说明DNT细胞参与下调免疫反应的作用。

【关键词】自身免疫性疾病;双阴T 细胞

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.33.110

Expression and significance of peripheral blood DNT cells in autoimmune diseases ? JIANG Tao， CHEN Lin， WANG Xue-ye， et al. Jilin Peoples Hospital， Changchun 130021， China

【Abstract】 Objective ? To study the distribution characteristics of double negative （DN） T cells in peripheral blood in patients with autoimmune diseases and the changes of DNT cells in patients with autoimmune diseases after immunotherapy. Methods ? There were 38 patients with autoimmune diseases diagnosed for the first time without treatment selected as the pre-treatment group， 13 patients with autoimmune diseases after 4 weeks of treatment with hormone or hormone combined immunosuppressant selected as the post-treatment group， and 30 healthy persons in the same period as the control group. Flow cytometry was used to detect the content of DNT cells in the peripheral blood of the three groups， and the content of DNT cells in the peripheral blood of the three groups was compared. Results ? The content of DNT cells in the peripheral blood in pre-treatment group was （4.93±2.78）%， which was higher than （3.90±1.90）% in the control group， but the difference was not statistically significant （P>0.05）. The content of DNT cells in the peripheral blood in post-treatment group was （2.20±0.80）%， which was lower than （4.93±2.78）% in pre-treatment group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion ? The content of DNT cells in the peripheral blood of the patients with autoimmune diseases is higher than that of the healthy people， which indicates that DNT cells have immune promoting effect. After immunotherapy， DNT cells in the patients with autoimmune diseases are significantly lower than that before treatment， which indicates that DNT cells participate in the down-regulation of immune response.

【Key words】 Autoimmune diseases; Double negative T cell

近期研究發现，机体内存在着一种T细胞亚群，这种亚群不同以往的CD4+和CD8+T细胞的，这类细胞命名为CD3+CD4-CD8-T细胞，即DNT细胞。经实验证明DNT细胞存在于健康人群体内，以及正常小鼠体内[1-4]。DNT细胞与免疫调节、自身免疫性疾病、器官移植排斥反应及肿瘤免疫耐受密切相关[5， 6]。其中自身免疫性疾病是指机体针对自身抗原而发生的免疫反应，从而使自身组织发生了损害的一种疾病。包括系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿性关节炎（RA）、干燥综合征（SS）、强直性脊柱炎（AS）、白塞氏病（BD）等。在我国王红霞等[8]做了关于24例RA患者外周血DNT细胞的检测，同时也对DNT细胞表面的 FAS受体相关表达做了研究，结果表明DNT细胞以及其表面的FAS受体表达明显增加，提示RA的发病机制中DNT细胞起到一定作用。SLE患者外周血中DNT细胞有着明显的升高[7]，甚至在SLE患者炎症器官受累中，产生了大量白细胞介素-17（IL-17），与SLE的发病被认为相关。袁伟等[9]检测了AS患者外周血DNT细胞水平明显高于健康人群的对照组，提示AS患者体内发生了细胞免疫紊乱， AS的发生发展与T细胞亚群的失衡可能有关。本研究通过流式细胞术对自身免疫系统疾病患者首次确诊（治疗前）和治疗后及健康人进行了外周血DNT细胞进行了检测，旨在探讨DNT在自身免疫性疾病中的表达与意义。现报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料选取吉林省人民医院风湿免疫科2014年

1月～2016年8月收治的51例自身免疫性疾病患者作为疾病组，所有入选的患者均符合最新的分类标准。其中RA 10例，

SLE 8例， AS 13例， BD 3例， SS 2例，银屑病关节炎4例，结缔组织病4例，其他自身免疫性疾病7例;其中男19例，女32例;年龄22～65岁，中位年龄43.2岁;其中51例患者包括首次确诊未经治疗的38例自身免疫性疾病患者作为治疗前组，经过激素和或激素联合免疫抑制剂治疗后满4周的13例自身免疫性疾病患者作为治疗后组。选择同期健康体检者30例作为对照组，其中男13例，女17例;年龄20～64岁，中位年龄40.5岁。

1. 2 试剂和仪器抗-CD3单抗、抗-CD28单抗均购自美国ebioscience公司;重组人白细胞介素（rhIL）-2、rhIL-4购自美国PEPRPTECH公司;RosettesepCD4、负选试剂盒， Easysep CD4、CD8、CD56正选试剂盒。淋巴细胞分离液购自达科为生物技术有限公司;CD3-PC5/CD4-FITC/CD8-PE， CD3-FITC/CD56-PE，购自法国贝克曼公司;流式细胞仪购自法国贝克曼公司。

1. 3 检测方法检测外周血DNT：抽取清晨空腹患者和对照组健康人静脉血2 ml， EDTA-K2抗凝，标本在6 h内处理。按照检测要求，分别向编好的流式试管中加入20 μl单克隆抗体，随后加入混匀的100 μl抗凝血，混匀，避光，室温孵育15 min，分别加入溶血剂，溶解未标记细胞及红细胞。应用流式细胞仪，检测外周血CD3+CD4-CD8-，严格按照说明书操作。

1. 4 观察指标比较三组研究对象外周血DNT细胞含量。

1. 5 统计学方法采用SPSS17.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计量资料以均数 ± 标准差（ x-±s）表示，采用t检验;计数资料以率（%）表示，采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

治疗前组患者外周血DNT細胞含量高于对照组，但差异无统计学意义（P>0.05）;治疗后组患者外周血DNT细胞含量低于治疗前组，差异具有统计学意义（P<0.05）。见表1，图1，图2。

3 讨论

DNT细胞是T细胞的一种亚型细胞，随着人们对DNT细胞的深入研究，很多人关注到了DNT细胞介导的免疫反应，有报道显示，在SLE和RA等自身免疫性疾病中调节性T细胞的免疫调节起了非常重要的作用[11， 12]。

Crispin等[13]的研究发现SLE患者外周血中DNT细胞显著升高，并发现在狼疮性肾炎（LN）的肾组织中DNT细胞明显积聚，而且还分泌了IL-17，然而外周血中的DNT则分泌的是γ-干扰素（IFN-γ），这两种细胞因子都参与了SLE患者肾脏炎症的发生发展。Zhang等[14]也发现了高表达IL-23R

与IL-17的DNT细胞在SLE的鼠模型中，并且发现这个浓度与疾病的严重程度有正相关性。Kyttaris等[15]用IL-23R处理小鼠淋巴结的淋巴细胞给缺陷小鼠输注了这种DNT细胞后，引发了小鼠狼疮样肾炎发生。免疫细胞比例失衡在自身免疫疾病的发病机制中起着重要作用，为将来自身免疫性疾病应用生物治疗提供了非常重要的理论基础[16]。本实验研究治疗前组患者外周血DNT细胞含量为（4.93±2.78）%，高于对照组的（3.90±1.90）%，但差异无统计学意义（P>0.05）;说明自身免疫性疾病患者外周血DNT细胞含量升高，与对照组虽然无差异，但说明DNT细胞有免疫反应促进作用。且本次实验显示：治疗后组患者外周血DNT细胞含量为（2.20±

0.80）%，低于治疗前组的（4.93±2.78）%，差异具有统计学意义（P<0.05），说明DNT具有下调免疫反应。

本实验证实，与健康对照组相比，自身免疫性疾病患者中DNT细胞含量升高，但差异无统计学意义，可能与疾病的病种多样性有关，各个免疫疾病的发病机制不尽相同，故在今后研究中需要进一步细化自身免疫性疾病的病种，可能会带来更有价值的结论。

随着人们对DNT细胞研究的进一步深入研究，对DNT细胞的了解和认识也将越来越丰富，应进一步研究在不同疾病在发病、进展及转归过程中，相关的基因突变及细胞因子的表达，还有对药物反应等方面的变化情况，以期深入推动更多疾病的免疫治疗以造福患者，造福人类。

综上所述，自身免疫性疾病患者外周血DNT细胞含量高于健康人群，说明DNT细胞有免疫促进作用，自身免疫性疾病患者经过免疫治疗后DNT细胞较治疗前明显下降，说明DNT细胞参与下调免疫反应的作用。

参考文献

[1] Zhang ZX， Yang L， Young KJ， et al. Identification of a previously unknown antigen-specific regulatory T cell and its mechanism of suppression. Nature Medicine， 2000， 6（7）：782-789.

[2] Voelkl S， Gary R， Mackensen A. Characterization of the immunoregulatory function of human TCR-αβ+CD4-CD8-double-negative T cells. Eur J Immunol， 2011， 41（3）：739-748.

[3] Ford MS， Young KJ， Zhang Z， et al. The immune regulatory function of lymphopr -oliferative double negative T cells in vitro and in vivo. J Exp Med， 2002， 196 （2）：261-267.

[4] Sionov RV， Kfir Erenfeld S， Spokoini R， et al. A role for bcl-2 in notch1-depen -dent transcription in thymic lymphoma cells. Adv Hematol， 2012 （2012）：435241.

[5] Caroleo B， Staltari O， Gallelli L， et al. Pegylated interferon/telbivudine sequential therapy in Hepatitis Be antigen negative severe chronic hepatitis B patient. J Res Med Sci， 2013， 18（4）：368-369.

[6] Shi YH， Shi CH. Molecular characteristics and stages of chronic hepatitis Bvivus infection. World J Gastroenterol， 2009， 15（25）：3099-3105.

[7] Voelkl S， Gary R， Macensen A. Characterrization of the immunoregulatiry function of human TCR-al-phabeta+CD4-CD8-double-negative T cells. Eur J ?Immunol， 2011， 41（3）：739-748.

[8] 王紅霞，裘宇容，包杰，等. 类风湿关节炎患者外周血TCRαβ+CD4-CD8-T细胞与FAS介导的凋亡关系研究. 重庆医科大学学报， 2012， 37（4）：311-314.

[9] 袁伟，崔刘福，宋海澄，等. 强直性脊柱炎患者外周血CD4-CD8-双阴性T细胞的检测及意义. 中国煤炭工业医学杂志， 2017， 20（1）：44-47.

[10] Takakubo Y， Konttinen YT. Immune-regulatory mechanisms in systemic autoimmune and rheumatic diseases. Clin Dev Immunol， 2012（ 2012）：941346.

[11] Biossier MC， Assier E， Biton J， et at. Regulatory T cells（Treg） in rheumatoid arthritis. Joint Bone Spine， 2009， 76（1）：10-14.

[12] Miyara M， Amoura Z， Parizot C， et at. Glibal natural regulatory Tcell depletion in active systemic lupus erythematosus. J Immunol， 2005， 175（12）：8392-8400.

[13] Crispín JC， Oukka M， Bayliss G， et al. Expanded double negative T cells in patients with systemic lupus erythematosus produce IL-17and infiltrate the kidneys. J Immunol， 2008， 181（12）：8761-8766.

[14] Zhang Z， Kyttaris VC， Tsokos GC. The role of IL-23/IL-17 axis in lupus nephritis. J Immunol， 2009， 183（5）：3160-3169.

[15] Kyttaris VC， Zhang Z， Kuchroo VK， et al. Cutting edge： IL-23 receptor deficiency prevents the development of lupus nephritis in C57BL/6-lpr/lpr mice. J Immunol， 2010， 184（9）：4605-4609.

[16] Priatel JJ， Utting O， Teh HS. TCR/self-antigen interactions drive double-negative T cell peripheral expansion and differentiation into suppressor cells. J Immunol， 2011， 167（11）：6188-6194.

[收稿日期：2019-06-06]

随便看

科学优质学术资源、百科知识分享平台，免费提供知识科普、生活经验分享、中外学术论文、各类范文、学术文献、教学资料、学术期刊、会议、报纸、杂志、工具书等各类资源检索、在线阅读和软件app下载服务。