《溶血、脂肪血及保存条件对HBVDNA、HIVRNA核酸检测的影响》-理学论文，药学论文-论文范文参考-科学狗论文网

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溶血、脂肪血及保存条件对HBVDNA、HIVRNA核酸检测的影响

范文

漆爱红

【摘要】目的探讨溶血、脂肪血及保存条件对乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBV DNA）、人类免疫缺陷病毒核糖核酸（HIV RNA）核酸检测的影响。方法回顾性分析30份行HBV DNA、HIV RNA核酸检测标本的临床资料，应用罗氏MPX V2.0试剂，分别于4℃、25℃、37℃及-30℃的条件下测定4 h、24 h、48 h、72 h、1周、4周HBV DNA、HIV RNA的Ct值，并在不同溶血及脂肪血中测定HBV DNA、HIV RNA的Ct值。结果 -30℃、4℃、25℃温度下保存HBV DNA、HIV RNA的Ct值比较，差异无统计学意义（P>0.05）。在37℃条件下， HBV DNA在72 h及1周的Ct值高于其他时间及温度下的Ct值，差异有统计学意义（P<0.05）。高浓度TG并不影响核酸检测（NAT），差异无统计学意义（P>0.05）。而Hb浓度在97 g/L时出现NAT检测抑制，其他浓度无明显影响，差异有统计学意义（P<0.05）。结论高血脂标本<7.93 mmol/L可以接收，溶血标本>34 g/L时需重新留取样本，血液标本检测时间不宜超过72 h，保存温度以-30℃最佳。

【关键词】 HBV DNA;HIV RNA;溶血;脂肪血;Ct值

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.33.111

目前临床对血液制品的检测均采用核酸检测技术（NAT），能有效检出因病毒变异、隐匿性感染等因素，导致的污染血液。但在实际工作中，血液标本容易受到保存温度、溶血、脂肪血等因素影响，进而导致核酸检测结果出现误差[1]。罗氏MPX V2.0试剂说明书中也提出了相应的指导意见，但各地区的实验室对HBV DNA、HIV RNA检测的影响因素不同。本研究进一步分析了溶血、脂肪血及保存条件对HBV DNA、HIV RNA核酸检测的影响，现报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料来源回顾性分析2018年1～12月在本中心行HBV DNA、HIV RNA核酸检测的30例标本的临床资料。所有血液标本经血清学检测HBV DNA、HIV RNA均为阴性，同时收集HBV DNA、HIV RNA 检测阳性的血浆，经病毒浓度定量检测后，加入血清学及NAT 检测均为阴性的透亮血浆，制成12～30倍的核酸试剂检测下限浓度的HBV DNA、HIV RNA标本。

1. 2 方法使用罗氏Z480荧光定量PCR儀核酸检测系统。分别将标本置于-30℃、4℃、25℃、37℃的环境中放置4 h、24 h、48 h、72 h、1周、4周，采用荧光PCR法检测。收集血液标本中的红细胞悬液、严重乳糜血浆，将红细胞悬液制成全溶血样本，将两个样本离心制成溶血样本及脂肪血样本，然后将溶血样本、脂肪血样本、血清学及NAT检测均为阴性的血浆标本、12～30倍核酸试剂检测下限浓度HBV DNA、HIV RNA标本，保持这两个样本的HBV DNA、HIV RNA最终浓度约为2～5倍核酸试剂检测下限浓度[2];采用6混样模式，在全自动STAR加样仪中混匀制成血红蛋白（Hb），分为浓度97、34、17、8、5及3 g/L的溶血标准样本，以及TG浓度在7.93、3.80、2.63、1.83及1.49 mmol/L的脂肪血标准样本，分别行Hb浓度、TG浓度及NAT检测。

1. 3 观察指标比较不同保存条件下HIV RNA、HBV DNA的Ct值;比较不同Hb、TG浓度下HIV RNA、HBV DNA的Ct值。

1. 4 统计学方法采用SPSS19.0统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示，采用t检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2. 1 不同保存条件下HIV RNA、HBV DNA的Ct值比较

-30℃、4℃、25℃温度下保存HBV DNA、HIV RNA的Ct值比较，差异无统计学意义（P>0.05）。在37℃条件下， HBV DNA在72 h及1周的Ct值高于其他时间及温度下的Ct值，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2. 2 不同Hb、TG浓度下HIV RNA、HBV DNA的Ct值比较高浓度TG并不影响NAT检测，差异无统计学意义（P>0.05）。而Hb浓度在97 g/L时出现NAT检测抑制，其他浓度无明显影响，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

3 讨论

Hb对核酸检测的影响主要是通过卟啉环与Taq酶的不可逆结合，抑制Taq酶活性[3-6]。脂肪血对核酸检测的影响主要通过乳糜微粒屏蔽和吸收荧光，产生荧光淬灭作用，降低了荧光信号强度，减少扩增效率[7-10]。本研究结果显示， -30℃、4℃、25℃温度下保存HBV DNA、HIV RNA的Ct值比较，差异无统计学意义（P>0.05）。在37℃条件下， HBV DNA在72 h及1周的Ct值高于其他时间及温度下的Ct值，差异有统计学意义（P<0.05）。说明HBV DNA在常温下稳定性较高，在37℃中可能有核酸降解的趋势。HIV RNA在各个不同温度下均很稳定。另外，本研究中，高浓度TG并不影响NAT检测，差异无统计学意义（P>0.05）。而Hb浓度在97 g/L时出现NAT检测抑制，其他浓度无明显影响，差异有统计学意义（P<0.05）。

综上所述，高血脂标本<7.93 mmol/L可以接收，溶血标本>34 g/L时需重新留取样本，血液标本检测时间不宜超过72 h，保存温度以-30℃最佳。

参考文献

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[收稿日期：2019-03-27]

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