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细辛水煎液和挥发油混合物对利血平诱导抑郁模型大鼠的影响

范文

王晓丹郭星汉崔瑛

摘要目的：观察细辛水煎液和挥发油混合物对利血平诱导抑郁模型大鼠的抗抑郁作用并探讨其作用机制。方法：除正常对照组外，其余各组大鼠每天给予利血平腹腔注射，造模第4天各组大鼠开始灌胃给药，连续给药12 d。记录大鼠的体质量、肛温及敞箱实验大鼠运动距离、站立次数变化。采用酶联免疫吸附试验法（ELISA）测定单胺类递质及其代谢产物的含量。结果：与正常对照组比较，模型组大鼠体质量、肛温、敞箱运动距离与站立次数均显著降低，差异有统计学意义（P<0.05），脑组织中5-羟色胺（5-HT）、多巴胺（DA）、去甲肾上腺素（NE）含量显著减少，差异有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较，细辛水煎液和挥发油混合物高、中、低剂量组均能够不同程度的纠正利血平所致大鼠体质量、肛温、敞箱运动距离与站立次数降低的趋势，增加大鼠脑组织中5-HT、DA、NE的含量，降低大鼠腦组织中5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）、3，4-二羟基苯乙酸（DOPAC）、高香草酸（HVA）的含量。结论：细辛水煎液和挥发油混合物在利血平诱导抑郁大鼠模型上表现出较好的抗抑郁作用，其抗抑郁作用的发挥可能与增强单胺类递质的合成，同时抑制单胺类递质的代谢密切相关。

关键词细辛;抑郁;机制;单胺类递质

Effects of Mixture of Xixin Decoction and Volatile Oil on Reserpine-induced Depression in Rats

WANG Xiaodan，GUO Xinghan，CUI Ying

（Henan University of Chinese medicine，Henan，Zhengzhou 450046，China）

Abstract Objective：To observe the antidepressant effect of Xixin Decoction and volatile oil mixture on reserpine-induced depression in rats and explore its mechanism.Methods：Except the normal control group，intraperitoneal injections of reserpine was given 0.3 mg/kg abdominal cavity injection every day.The rats in each group were given orally for 12 consecutive days after the 4th day of intraperitoneal injection.The changes of body weight and rectal temperature of rats，the distance of movement and the number of times of standing were observed.The contents of monoamine transmitters and their metabolites were determined by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）.Results：Compared with the control group，body weight，the rectal temperature，the distance of behavioral movement and standing times in the model group were significantly reduced （P<0.01），the contents of serotonin （5-HT），dopamine （DA） and adenaline （NE） in the brain tissue of the model group were significantly decreased （P<0.01）.com

pared with the model group，the high，medium and low doses of Xixin decoction and volatile oil mixture can correct the decreasing trend of of body weight，rectal temperature，behavioral distance and standing times induced by reserpine to different degrees，and increase the content of 5-HT，DA and NE in the rat brain tissue，and decrease the content of 5-hyroxyindole acetic （5-HIAA），4-dihydroxyphenylacetic （DOPAC），homovanillic （HVA） in the rat brain tissue.Conclusion：Xixin Decoction and volatile oil mixture showed a good antidepressant effect on reserpine-induced depression in rats，and the antidepressant effect may be related to its ability to enhance the synthesis of monoamine transmitters and inhibit the metabolism of monoamine transmitters.Quality metabolism is closely related.

Keywords Herba Asari; Depression; Mechanism; Monoamine transmitters

中图分类号：R242;R285.5文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.01.013

抑郁症是一种复杂的心理障碍性疾病，其病情严重，发病率逐年增加、发病人群广[1-3]。当前治疗抑郁症多采用的是西药，主要有盐酸氟西汀、盐酸文拉法辛、丙咪嗪等代表性药物[4]。上述药物对抑郁症有一定的治疗作用，但在使用过程中也出现了非常多的不良反应。中医药虽没有抑郁症病名，但通过辨证施治有较好的的疗效和较大的安全优势。因此，有必要从中药中发掘有效药物，为防治抑郁症服务。

细辛是马兜铃科细辛属植物北细辛Asarum heterotropoides Fr.Schmldt var.mandshuricum（Maxim）Kitag.、汉城细辛Asarum sieboldii Miq.Asarumsieboldii Miq.var.seoulense Nakai与华细辛Asarum sieboldii Miq.的干燥根和根茎，味辛、性温，具有祛风散寒、通窍止痛、温肺化饮的功效，用于风寒感冒、头痛、牙痛、鼻塞鼻渊、风湿痹痛、痰饮咳喘等[5-7]。细辛挥发油中含黄樟脑、3-蒈烯、3，5-二甲氧基甲苯、丁香酚甲醚苯等[8]。现代药理学研究表明细辛具有强心、解热镇痛、镇静、局部麻醉、抗炎等多种药理作用[9]。

我们前期开展了细辛抗抑郁作用研究，研究表明细辛水煎液及挥发油都具有抗抑郁作用，其作用机制可能与提高脑内神经递质5-羟色胺（5-HT）、谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）含量有关[10]。本实验在前期实验的基础上，利用利血平诱导抑郁大鼠模型来考察细辛水煎液和挥发油混合物的抗抑郁功效，并初步探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

雄性SD大鼠SPF级，体质量（180±10）g。购自郑州大学实验动物中心，批号：41003100005615，许可证号码：SCXK（豫）2017-0001。饲养于大鼠IVC独立送风隔离笼具内，温度（25±2）℃，并由专人负责。

1.1.2 药物

细辛购于郑州张仲景大药房，药材原产地：辽宁，批号：170801。盐酸氯米帕明片（湖南洞庭药业有限公司，国药准字H10900027）。利血平注射液（天津金耀药业有限公司，生产批号：1705091）。

1.1.3 试剂与仪器大鼠5-HT、NE、DA、5-HIAA、HVA、DOPAC试剂盒（上海艾莱萨生物科技有限公司，生产批号：201803）;挥发油提取装置（郑州凯鹏实验仪器有限公司，型号：ZNHW-III0000ML）;大小鼠自主活动实验系统（成都泰盟软件有限公司，型号：OFT-100）;大鼠独立送风隔离笼具（苏州冯氏实验动物设备有限公司，型号：IVC-II）;快速电子体温计（郑州迈斯通医疗科技有限公司，型号：TS0-A）。

1.2 方法

1.2.1 分组与模型制备

SD大鼠适应性饲养3 d，称重后随机分成6组，每组10只，包括正常对照组、模型组、盐酸氯米帕明（0.05 g/kg）组，细辛水煎液和挥发油混合物高（20 g/kg）、中（10 g/kg）、低（5 g/kg）剂量组。除正常对照组之外，其余各组大鼠每天给予利血平0.3 mg/kg腹腔注射制备模型。

1.2.2 给药方法

造模第4天各组大鼠开始灌胃给予相应药物，连续给药12 d。盐酸氯米帕明组剂量0.05 g/kg，细辛水煎液和挥发油混合物高、中、低组剂量分别为20、10、5 g/kg，模型组和正常对照组给予同等体积的蒸馏水。

细辛水煎液和挥发油混合物的制备：取适量细辛粗粉，加入10倍量的蒸馏水浸泡1 h，采用水蒸气蒸馏法提取细辛挥发油，提取4 h，将提取出来的挥发油密封避光并冷藏保存，同时将水煎液过滤浓缩至含生药浓度为2 g/mL，将细辛挥发油全部加入到浓缩后的水煎液中，并加入0.5%羧甲基纤维素钠助溶，即得细辛水煎液和挥发油混合物[11-12]。

1.2.3 检测指标与方法

实验期间称量并记录大鼠体质量（g），末次给药1 h后，采用电子体温计测量大鼠的肛温（℃），然后使用OFT-100大小鼠自主活动实验系统对大鼠进行敞箱实验，记录5 min内大鼠在敞箱中的运动距离以及站立次数。敞箱实验完成之后，立即将大鼠处死，在冰台上剥离全脑，按照试剂盒说明书采用ELISA法检测脑组织中5-羟色胺（5-HT）、5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）、多巴胺（DA）、3，4-二羟基苯乙酸（DOPAC）、去甲肾上腺素（NE）和高香草酸（HVA）的含量。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0统计软件对实验数据进行分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，用F检验，以P<0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 細辛水煎液和挥发油混合物对利血平诱导抑郁模型大鼠体质量的影响

与正常对照组比较，模型组大鼠的体质量显著下降，差异有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较，盐酸氯米帕明组及细辛水煎液和挥发油混合物高、低剂量组大鼠体质量显著增加，差异有统计学意义（P<0.05），细辛水煎液和挥发油混合物中剂量组大鼠体质量有增加的趋势。见表1。

2.2 细辛水煎液和挥发油混合物对利血平诱导抑郁模型大鼠肛温的影响

与正常对照组比较，模型组大鼠的肛温显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较，盐酸氯米帕明组及细辛水煎液和挥发油混合物高、中、低剂量组大鼠肛温均显著升高，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.3 细辛水煎液和挥发油混合物对利血平诱导抑郁模型大鼠行为学的影响

与正常对照组比较，模型组大鼠的敞箱实验运动距离、站立次数均显著减少，差异有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较，盐酸氯米帕明组及细辛水煎液和挥发油混合物高、中、低剂量组均可以显著增加敞箱实验大鼠运动距离与站立次数，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

2.4 细辛水煎液和挥发油混合物对利血平诱导抑郁模型大鼠脑内单胺类递质及其代谢产物的影响

与正常对照组比较，模型组大鼠脑组织中5-HT的含量显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）;5-HIAA的含量无显著变化。与模型组比较，盐酸氯米帕明组及细辛水煎液和挥发油混合物高、中、低剂量组大鼠脑组织中5-HT的含量显著增加，差异有统计学意义（P<0.05）;盐酸氯米帕明组及细辛水煎液和挥发油混合物高、中剂量组大鼠脑组织中5-HIAA的含量显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）;细辛水煎液和挥发油混合物低剂量组大鼠脑组织中5-HIAA的含量无显著变化。与正常对照组比较，模型组大鼠脑组织中的DA含量显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）;DOPAC、HVA含量无显著变化。与模型组比较，细辛水煎液和挥发油混合物中、低剂量组大鼠脑组织中DA的含量显著增加，差异有统计学意义（P<0.05）;盐酸氯米帕明组及细辛水煎液和挥发油混合物高剂量组大鼠脑组织中DA含量有增加的趋势;盐酸氯米帕明组及细辛水煎液和挥发油混合物中、低剂量组大鼠脑组织中DOPAC含量显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）;细辛水煎液和挥发油混合物高剂量组大鼠脑组织中DOPAC含量无显著变化;盐酸氯米帕明组及细辛水煎液和挥发油混合物高、中剂量组大鼠脑组织中HVA含量显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）;细辛水煎液和挥发油混合物低剂量大鼠脑组织中HVA含量无显著变化。与正常对照组比较，模型组大鼠脑组织中NE的含量显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较，盐酸氯米帕明组及细辛水煎液和挥发油混合物高、低剂量组大鼠脑组织中NE的含量显著增加，差异有统计学意义（P<0.05）;细辛水煎液和挥发油混合物中剂量组大鼠脑组织中NE的含量有增加的趋势。见表4～6。

3 讨论

现代药理研究表明，细辛具有解热、镇痛、抗惊厥的作用[13]。本实验室前期进行了细辛抗抑郁作用研究，实验结果表明，细辛水煎液及挥发油均表现出抗抑郁作用[10]，本实验将细辛水煎液与挥发油混合，此方法避免了对细辛有效成分利用不完全的缺点，以期得到更好的抗抑郁作用。

利血平是一种降压药，具有倦怠、注意力不集中、性欲减退等精神抑郁不良反应。利血平抑郁模型可以在一定程度上模拟抑郁症患者的临床表现，其造模方法简便易行，因此在基础实验中被广泛应用[14]。利血平通过耗竭脑内单胺类神经递质从而诱发动物食欲不振、体温下降、自发活动减少、体质量降低等现象[15-16]。这类似中医寒症表现，细辛性温，有祛寒作用，选择利血平模型也符合中医对症用药思维。实验结果显示，模型组大鼠出现自主活动能力减退的现象，表明利血平诱导的抑郁模型造模成功;同时，模型组大鼠出现体质量增加缓慢、肛温下降的现象，给予细辛水煎液和挥发油混合物后，各剂量组大鼠体质量显著增加，肛温显著上升。在敞箱实验中，给药组大鼠的行为学运动距离、站立次数，较之模型组大鼠均有不同程度的提升，表明细辛水煎液和挥发油混合物具有抗抑郁作用，其中以高剂量组和中剂量组作用效果最明显。

抑郁症的发病机制假说众多，其中最主流的的假说为单胺类神经递质假说。该假说认为单胺类神经递质的含量或功能的改变很大程度上是由于其合成或储存发生障碍，降低或增加受体功能改变造成的。影响单胺类递质含量的主要因素是其合成及代谢，如果增加其合成功能，降低其代谢功能，则单胺类递质含量会增加，而其代谢产物水平会下降。5-HIAA是5-HT的代谢终产物，DOPAC和HVA是DA的代谢产物，其代谢产物的变化可间接反映5-HT和DA的情况。本实验采用酶联免疫吸附试验法对大鼠脑组织内单胺类神经递质及其代谢产物进行含量测定，结果显示，与正常对照组比较，模型组大鼠脑内5-HT、DA、NE含量下降明显。与模型组比较，细辛水煎液和挥发油混合物能够对抗利血平抑郁模型大鼠脑组织中5-HT、DA、NE水平减少，并且能够降低5-HIAA、DOPAC、HVA的水平。

因此，细辛水煎液和挥发油混合物在利血平诱导抑郁大鼠模型上表现出较好的抗抑郁作用，并且抗抑郁作用的发挥可能与其能够增强单胺类递质的合成，同时抑制单胺类递质的代谢有很大关系。

参考文献

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（2020-02-05收稿责任编辑：杨觉雄）

基金项目：河南省科技攻关项目（182102310317）

作者简介：王晓丹（1992.02—），女，硕士研究生，研究方向：中药药性及抗焦虑作用研究，E-mail：15136231165@163.com

通信作者：崔瑛（1961.05—），男，博士，教授，研究方向：中药药性及抗焦虑作用研究，E-mail：cyexin@126.com

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