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三七药材中快速批量分离提取人参皂苷Rd的方法分析

范文

喻录容　何先元

【摘要】目的：探究三七药材中快速批量分离提取人参皂苷Rd的方法。方法：先经乙醇提取三七药材中的总皂苷，再用大孔吸附树脂乙醇水溶液能分离，用硅胶柱“氯仿、甲醇、水”溶剂进行梯度洗脱进行纯化。结果：用大孔吸附树脂乙醇水溶液能成功分离三七总皂苷中的人参二醇组皂苷与人参三醇组皂苷。硅胶柱“氯仿、甲醇、水”溶剂进行梯度洗脱，可得到Rd单位。结论：大孔吸附树脂分离法和硅胶柱溶剂洗脱法结合的方式，适用于三七药材中快速批量分离提取人参皂苷Rd。

【关键词】三七;分离提取;人参皂苷Rd

三七，五加科植物，人参属，云南是我国的三七主产区。三七总皂苷（ Panax notoginseng saponins，PNS）是三七的主要活性成分。目前，已知的能从三七中分离出来的人参皂苷已经超过70种。其中，三七中人参皂苷Rd的含量为0.5%-0.7%。已有的医学研究表明，人参皂苷Rd对心脑血管、免疫系统和神经系统均具有一定的作用，可能成为脑中风临床治疗的新型药物。另有研究资料显示，与其他的皂苷相比，人参皂苷Rd具有更强的活性，在保护神经、阵痛等方面的作用更佳。但由于植物中的人参皂苷Rd含量较低，化学结构比较复杂，现有的科技手段仅能通过原植物的根茎叶中进行提取，并不能进行化学合成。而植物提取人参皂苷Rd的效率低、成本高，导致人参皂苷Rd的利用也并不广泛。本次研究选取云南文山的三七根茎为原材料，对其中含有的人参皂苷Rd进行分离提取，探索了快速批量分离提取人参皂苷Rd的方法。1材料与方法

1.1材料和试剂

三七根茎，产地为云南省文山县，购买自当地的药材市场，60头。AB-8型大孔吸附树脂，20～40目，上海源叶生物科技有限公司提供。层析用硅胶H，100～200目，青岛邦凯高新技术材料有限公司提供。化学试剂为分析纯。

1.2方法

1.2.1大孔吸附树脂柱分离：取三七根茎样品1000g，研碎成60目。加入90%乙醇2000ml，冷浸18h后过滤。药渣再次加入90%乙醇1800ml，热回流提取2次，每次2小时。冷却至常温。过滤，将三次所得的溶液进行合并。用65℃水浴减压回收溶剂，用甲醇溶解残渣。60×1200mm层析柱装填AB-8型大孔吸附树脂2000g，用25%乙醇平衡柱，放置樣液后，以此用25%，40%，80%，95%乙醇梯度洗脱，流速10ml/min，每500ml为1份，共80份。

洗脱液以硅胶H薄层色谱进行分析，展开剂比例：正丁醇：乙酸乙酯：水为4：1：5。10%硫酸乙醇溶液显色，合并色谱斑点相同组分，减压回收溶剂。

1.2.2分离和纯化：60×1200mm层析柱装填层析用硅胶2000g，用氯仿、甲醇平衡柱子，比例为84：16。将1.2.1分离出来的人参皂苷Rd组分浓缩液加入，依次用不同比例的氯仿、甲醇、水进行溶剂洗脱，分别是83：16：1;76：22：2;68.5：27.5：4;65：30：5;61：33：6。流速设置10ml/min，每500ml为1份，共80份。

洗脱液用硅胶H薄层色谱分析，展开剂正丁醇：乙酸乙酯：水=4：1：5。10%硫酸乙醇溶液显色，合并色谱斑点相同组分，减压回收溶剂。2结果

几种人参皂苷Rd在硅胶H板上的Rf值如表1所示。表1 几种人参皂苷Rd在硅胶H板上的Rf值

3讨论

目前，三七根茎中已经分离出来的有人参二醇组皂苷、人参三醇组皂苷、七叶胆皂苷和三七皂苷等H。其中，人参二醇组皂苷有Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、F2;人参三醇组皂苷有Re、Rg1、Rg2、Rh1;三七皂苷NR1、NR2、NR4、NR5、Fa、Fc、Fe;七叶胆皂苷GY-XⅧ。从粗皂苷中分离Rd主要应用经典逐层分析法和高效液相谱分析法，其中，经典逐层分析法所需要的时间长，操作复杂程度高，需要多次过柱才能获得，而高效液相谱分析法往往需要耗费大量的溶剂，成本也大幅度提高，且难以大量进行制备，只是使用在实验室内进行少量制备。分组分离的方式是近几年采用的一种Rd制备方式，具有分离步骤相对精简，制备的时间缩短，为Rd的批量制备提供了可能。

三七药材中的Rbl、Rgl的含量比较高，而Re、NR1、GY-XⅦ均与Rd的含量和色谱行为十分接近。本次研究应用了两种不同的溶剂体系“氯仿、甲醇、乙酸乙酯、水”和“正丁醇、乙酸乙酯、水”，分离Re、NR1与Rd。而用反相C18柱进行“甲醇、水”梯度洗脱，经过1次过柱就能够去除Re、NR1和Rg1，但是反相C18填料成本较高，因而选用了成本相对低的硅胶薄层板进行，展开剂为“氯仿、甲醇、水”和“正丁醇、乙酸乙酯、水”。研究其色谱行为。根据表1的结果，发现展开剂为“氯仿、甲醇、水”时，Rd与NR1的Rf值相同。展开剂为“正丁醇、乙酸乙酯、水”时，Re与NR1的Rf值相同。采用“正丁醇、乙酸乙酯、水”为流动相，能分离Rd和其他几种皂苷，但该流动相难易挥发，洗脱液的浓缩难度大。采用“氯仿、甲醇、水”为流动相，可与Re分离，分组分离后应用梯度分离，可让Rd和NR1与其他皂苷分离出来。

总而言之，大孔吸附树脂乙醇水溶液能成功分离三七总皂苷中的人参二醇组皂苷与人参三醇组皂苷，将人参二醇组皂苷用硅胶柱“氯仿、甲醇、水”溶剂进行梯度洗脱，一次过柱可得到高纯度的Rd单位。且操作简单，快捷，能够批量分离提取。

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