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流式细胞术诊断急性混合细胞白血病临床意义探讨

范文

刘夫鹏　刘红黔

[摘要] 目的对急性混合细胞白血病临床诊断中流式细胞术的应用价值进行探讨。方法方便选择该院2014年1月—2017年12月收治的初发急性白血病患者416例，应用流式细胞仪和三色荧光标记抗体检测免疫表型。结果 416例初发急性白血病患者，28例（6.7%）为混合细胞白血病（MAL），其中20例（71.4%）B/髓系表达，6例（21.4%）T/B共表达，2例（7.1%）T/髓共表达;FAB分型诊断为急性淋巴细胞白血病（ALL）142例，62例纯淋系抗原表达，80例（56.3%）淋系伴髓系抗原表达（My+ALL）;FAB分型诊断为急性髓细胞白血病（AML）246例，158例纯髓系抗原表达，88例（35.8%）髓系伴淋系抗原表达（Ly+AML）;MAL28例，cCD3、CD79a、MPO表达比例分别为100.0%、100.0%、64.3%。MAL28例中表达CD34患者26例（92.9%）。18例（81.8%）CD117表达。结论实际中单纯通过细胞形态学无法准确诊断MAL、My+-ALL、Ly+-AML，流式细胞术免疫分型可弥补FAB分型不足，准确进行白血病细胞的分型诊断，为进一步开展临床治疗提供有效依据。

[关键词] 混合细胞白血病;流式细胞仪;免疫分型

[中图分类号] R733.7? ? ? ? ? [文献标识码] A? ? ? ? ? [文章编号] 1674-0742（2019）09（a）-0036-03

[Abstract] Objective To investigate the application value of flow cytometry in the clinical diagnosis of acute mixed cell leukemia. Methods A total of 416 patients with initial acute leukemia admitted to this hospital from January 2014 to December 2017 were convenient selected and enrolled. The immunophenotype was detected by flow cytometry and trichrome fluorescent antibody. Results Of the 416 patients with newly diagnosed acute leukemia， 28 cases（6.7%） were mixed cell leukemia （MAL），in cluding 20 cases（71.4%） were B/medullary， 6 cases（21.4%） were co-expressed， and 2 cases（7.1%） T/myeloid co-expression; FAB typing diagnosis of 142 cases of acute lymphoblastic leukemia （ALL）， 62 cases of pure lymphoid antigen expression， 80 cases （56.3%） of lymphoid system with myeloid antigen expression （My+ALL） FAB classification diagnosis of acute myeloid leukemia （AML） in 246 cases， 158 cases of pure myeloid antigen expression， 88 cases （35.8%） myeloid with lymphoid antigen expression （Ly + AML）; MAL 28 cases， cCD3， CD79a， MPO expression ratios were 100.0%， 100.0%， and 64.3%， respectively. In MAL28 patients， 26 patients （92.9%） expressed CD34， 18 cases（81.8%） had CD117 expression. Conclusion In practice， MAL， My+-ALL and Ly+-AML cannot be accurately diagnosed by cell morphology alone. Flow cytometry immunophenotyping can make up for the deficiency of FAB typing and accurately diagnose the classification of leukemia cells， providing effective basis for further clinical treatment.

[Key words] Mixed cell leukemia; Flow cytometry; Immunophenotyping

近年來细胞遗传学、免疫学、分子生物学技术发展迅速，MICM分型方案被广泛应用于临床白血病临床诊断，其中白血病免疫学分型发展最快，作为研究急性白血病的基础性手段，其有效补充了传统形态学检查不足[1-2]。该研究将分析并总结2014年1月—2017年12月应用流式细胞仪进行急性白血病血细胞簇分化抗原CD系列检测结果，对急性混合细胞白血病诊断中流式细胞术的应用价值进行明确，报道如下。

1? 资料与方法

1.1? 一般资料

方便选择该院收治初发急性白血病患者416例，患者均于流式细胞室行血细胞促分化抗原CD系列检测。416例患者中，142例为急性淋巴细胞白血病（ALL），其中包括女54例、男88例;年龄2～65岁，平均（27.8±3.5）岁。246例急性髓细胞白血病（AML），其中包括女110例、男136例;年龄范围7～81岁，平均（41.6±3.6）岁。28例混合细胞白血病（MAL），其中包括女6例、男22例;年龄范围7～65岁，平均（33.4±2.8）岁。有BD公司提供所有荧光标记单克隆抗体（McAb）及其他试剂;应用荧光包括PE（藻红蛋白荧光素）、FITC（异硫氰酸荧光素）、PerCP（叶绿素蛋白）;胞浆抗体为CD79a、MP0、cCD3;胞膜单克隆抗体为CD33、CD13、CD14、CD15、CD11b、CD117、CD3、CD4、CD5、CD7、CD10、CD8、CD20、CD19、HLA-DR、CD45。

1.2? 仪器和设备

单激光三色流式细胞仪由美国BD公司生产;高速低温离子机由美国贝克曼公司生产。

1.3? 试验方法

应用直接免疫荧光标记法进行荧光标记染色，治疗前为所有病例抽取外周血或抗凝骨髓3～5 mL。标本染色前进行细胞数计数，应用磷酸盐缓冲液稀释骨髓标本并计数，将有核细胞数密度调整为1×106个/mL，6 h内行染色体标记。

1.3.1? 胞膜抗原染色过程? 对流式专用试管进行标记，将PE、FITC、PerCP标记的抗体加入管中，同时设定同型对照（IgG1和IgG2a），加入抗凝骨髓后避光孵育15 min，溶血素2 mL裂解红细胞10 min，离心后去除上清，PBS洗涤，加入300 μLPBS后检测。胞浆抗原染色：固定已进行膜抗原标记的标本，加入破膜剂作用10 min，PBS洗涤后加胞浆抗体，避光孵育15 min，进行PBS洗涤，加300 μL缓冲液检测。

1.3.2? 流式细胞仪检测和分析? 应用三色标准荧光微球校准仪器进行仪器流路和光路的检测，对仪器的各种参数进行设置和调节，应用Cellquest软件对获取条件进行设置，依次上样获得数据，然后进行幼稚细胞群中白血病细胞表面标记的计算。结果判断时按照同型对照设置对抗原表达强弱进行描述。

1.4? 诊断标准

依据骨髓细胞形态学、临床表现、细胞化学染色、免疫分型指标确诊。依据FAB分型标准进行细胞形态学诊断，参照欧洲白血病免疫分型协作组（EGIL）标准进行MAL分娩分型诊断。

2? 结果

2.1? FAB分型

416例急性白血病患者FAB分型结果，见表1。

2.2? 免疫表型分型结果

初发急性白血病FAB分型和免疫分型结果，見表2。

2.3? 28例混合细胞白血病免疫分型主要抗原表达

28例混合细胞白血病免疫分型主要抗原表达情况，见表3。

3? 讨论

白血病患者的造血细胞在某分化阶段会大量积累白血病细胞，临床中检验分析这些细胞可对患者进行正确分型，进而为临床诊断和治疗提供有效依据[3-5]。临床中存在多种诊断白血病技术，其中应用最广泛的分型和诊断方法是形态学分型，其具有明确的分型标准。但作为经典分型标准，FAB具有一定局限，其对检验者的经验要求较高，同时存在较强的主观性，所以临床诊断符合率不高，形态学不足虽然能够通过细胞化学染色得到一定程度弥补，但细胞内环境变异性和染色方法的酶学灵敏性会形成制约，难以得到较高符合率[6-7]。

当前临床开始广泛认识到白血病免疫学分型的重要意义，流式细胞术是白血病免疫分型的重要方法，其通过不同荧光标记单克隆抗体标记细胞，获得SSC、FSC、多个荧光参数，在此基础上对细胞核、细胞质、细胞膜的免疫分型进行分析，进而实现对白血病细胞的有效检测，外周血、骨髓、脑脊液是可进行检测的标本类型，能够避免FAB分型方法的不足[8-10]。流式细胞术通过分析细胞核特定生物大分子，可对其分类、来源、分化状况进行精确判定，白血病分型准确性和诊断灵敏度大大提升，对于临床进一步开展治疗具有重要价值。

该研究中，416例初发急性白血病患者，28例（6.7%）为混合细胞白血病（MAL），其中20例（71.4%）B/髓系表达，6例（21.4%）T/B共表达，2例（7.1%）T/髓共表达;FAB分型诊断为急性淋巴细胞白血病（ALL）142例，62例纯淋系抗原表达，80例（56.3%）淋系伴髓系抗原表达（My+ALL）;FAB分型诊断为急性髓细胞白血病（AML）246例，158例纯髓系抗原表达，88例（35.8%）髓系伴淋系抗原表达（Ly+AML）;MAL28例，cCD3、CD79a、MPO表达比例分别为100.0%、100.0%、64.3%。MAL28例中表达CD34患者26例（92.9%）。18例（81.8%）CD117表达。可见，实际中单纯通过细胞形态学无法准确诊断MAL、My+-ALL、Ly+-AML，流式细胞术免疫分型可弥补FAB分型不足，准确进行白血病细胞的分型诊断。王建中[11]研究显示，FAB分型诊断为急性淋巴细胞白血病（ALL）36.7%，15.9%纯淋系抗原表达，20.8%淋系伴髓系抗原表达（My+ALL）;FAB分型诊断为急性髓细胞白血病（AML）63.3%，40.2%纯髓系抗原表达，23.1%髓系伴淋系抗原表达（Ly+AML）。这进一步验证了该研究结论。

综上所述，流式细胞术在急性混合型白血病诊断中具有较大意义，后期有待进一步探讨其与疾病治疗、预后的关系。另外该研究样本容量较小，未来研究中应进一步扩大样本容量，提升研究结果的科学性。在急性混合细胞白血病诊断中流式细胞术具有重要价值，其能够有效提升白血病细胞分型诊断效果，对于患者进一步接受有效治疗具有重要意义。

[参考文献]

[1]? 刘勇.急性B或T淋巴母细胞性白血病/淋巴瘤及伯基特淋巴瘤的转录因子表达谱：PAX5可作为前体B细胞的免疫染色标志物[J].中华病理学杂志，2016，39（8）：507.

[2]? 杨文钰，王慧君，陈玉梅.脑脊液流式细胞学检测技术在急性淋巴细胞白血病儿童并发中枢神经系统白血病中的诊断价值[J].中国实验血液学杂志，2015，20（1）：38-42.

[3]? 蒋能刚，朱焕玲，曾婷婷.脑脊液流式细胞免疫表型分析及其在中枢神经白血病诊断中的应用探讨[J].四川大学学报：医学版，2017，41（4）：664-668.

[4]? 黄竞，阿依姆妮萨·阿卜杜热合曼，徐丽.流式细胞免疫分型在骨髓增生异常综合征诊断和预后中的应用价值[J].医学检验与临床，2016，27（4）：53-58.

[5]? 谭畅，李凤，蒲泽晏.脑脊液MRD联合乳酸脱氢酶检测在中枢神经系统白血病诊断中的应用价值[J].国际检验医学杂志，2017，38（16）：2190-2192.

[6]? 刘光明，吴韶清，孙新.六色流式細胞术用于儿童急性B系淋巴细胞白血病相关免疫表型的检测[J].中国小儿血液与肿瘤杂志，2016，17（3）：104-109.

[7]? 吴雨洁，李建勇，朱明清.cMPO/cCD79α/cCD3/CD45抗体组合在交叉系列抗原表达急性白血病诊断中的应用[J].中华血液学杂志，2016，27（7）：449-451.

[8]? 邓小娟，王平，杨武晨，等.慢性粒细胞白血病加速期及急变期的形态学与免疫学分型的相关研究[J].重庆医学，2018，47（3）：308-310，315.

[9]? 张海燕，龙冰，孙燕玲，等.急性白血病化疗后感染的临床特征及危险因素分析[J].中国现代医药杂志，2018，20（1）：38-40.

[10]? 邢娜，张蕊，苏楠，等.异基因造血干细胞移植治疗Ph～+混合表型急性白血病一例报道并文献复习[J].中国全科医学，2017，20（33）：4212-4215.

[11]? 王建中.流式细胞术诊断急性白血病微小残留病：当前主要的技术问题和对策[J].诊断学理论与实践，2017，16（1）：7-11.

（收稿日期：2019-06-04）

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