标题 | 组织悬液HER-2阳性标本在免疫组化室内质控中作为阳性对照的作用和价值 |
范文 | 罗胜 宋彦锟 【摘要】 目的:探討免疫组化室内质控中应用组织悬液作为HER-2(人表皮生长因子受体-2)阳性对照的效果,为建立更好的HER-2免疫组化室内质控提供参考。方法:择取2018年1月-2019年12月笔者所在医院的37例HER-2(3+)的胃癌根治标本,包埋成石蜡块连续切片,行免疫组化染色,另取切片搅碎后制成组织悬液,分别进行免疫组化染色和常规HE染色,于试验后4、12周时,复行免疫组化染色,比较观察染色定位及强度情况。结果:组织悬液标本HE染色镜下观察均可见异形癌细胞,多数平铺,轮廓清晰。免疫组化染色的胃癌组织悬液标本,HER-2表达均见于细胞膜,染色强度均为强阳性(3+),同石蜡切片定性定位与染色均相符。试验后4、12周复行免疫组化,HER-2染色定位与强度同前无明显改变。结论:组织悬液癌细胞HER-2阳性定位明确,染色强度准确,质量稳定易判读,能够保障染色过程可靠,可以作为免疫组化室内质控,为HER-2染色提供阳性参考。 【关键词】免疫组化 室内质控 组织悬液 HER-2 阳性对照 doi:10.14033/j.cnki.cfmr.2020.19.023 文献标识码 B 文章编号 1674-6805(2020)19-00-03 Role and Value of HER-2 Positive Specimens in Tissue Suspensions as Positive Controls in the Quality Control of Immunohistochemical Laboratory/LUO Sheng, SONG Yankun. //Chinese and Foreign Medical Research, 2020, 18(19): -61 [Abstract] Objective: To investigate the effect of using tissue suspension as a positive control of HER-2 (human epidermal growth factor receptor-2) in the quality control of indoor immunohistochemistry, and provide a reference for establishing a better quality control of HER-2 immunohistochemistry indoor. Method: From January 2018 to December 2019, 37 radical specimens of HER-2 (3+) gastric cancer in our hospital were selected and embedded into paraffin sections for immunohistochemical staining, and then the sections were broken to make tissue suspension. Immunohistochemical staining and routine HE staining were carried out respectively. At 4 and 12 weeks after the test, immunohistochemical staining was carried out again to observe the location and intensity of staining. Result: The heteromorphic cancer cells were observed under HE staining microscope, most of them were flat and clear. The expression of HER-2 was found in the cell membrane of gastric cancer tissue with immunohistochemical staining, and the staining intensity was strong positive (3+), which was consistent with the qualitative localization and staining of paraffin section. After 4 and 12 weeks of the experiment, immunohistochemistry was carried out again, and the location and intensity of HER-2 staining were the same as before. Conclusion: HER-2 positive localization of cancer cells in tissue suspension is clear, the staining intensity is accurate, the quality is stable and easy to read, which can guarantee the reliable staining process, and can be used as the indoor quality control of immunohistochemistry, providing positive reference for HER-2 staining. [Key words] Immunohistochemistry Indoor quality control Tissue suspension HER-2 Positive control First-authors address: The First Affiliated Hospital of Fujian Medical University, Fuzhou 350005, China 人表皮生长因子受体-2(HER-2),表皮生长因子受体(FEFR)家族成员,是一种原癌基因,于细胞表面表达,可以通过参与信号通道通路活动影响细胞增殖与分化[1]。其癌基因及蛋白产物P185在乳腺癌、胃癌、直肠癌、卵巢癌等多种肿瘤中存在过度表达和扩增,是诱导细胞恶性转化的促发因素,与恶性肿瘤发生进展密切相关,是临床治疗监测的重要预后指标,近年随着分子生物学研究的深入及靶向治疗的突破进展,也成为靶向治疗药物选择的重要靶点。有统计数据显示,约30%的乳腺癌患者HER-2扩增/过度表达,其肿瘤侵袭性强,患者预后相对较差[2]。对于HER-2蛋白表达的检测,免疫组化是公认可靠且常用的方法,但受机械故障、人为误差、抗体商品种类繁多等因素影响,检测仍存在假阴性风险,影响结果准确性,不利于临床治疗,因此,检测有必要设立阴性与阳性对照,加强免疫组化质量控制,保证质量监测持续性[3]。为探究更为简便可靠的质控方法,文章现择取胃癌根治标本展开调研,拟采用组织悬液作为HER-2阳性对照,探究可行性,以期为建立更好的HER-2免疫组化室内质控提供参考,现报道如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 择取笔者所在医院病理科2018年1月-2019年12月的37例胃癌标本为研究对象。纳入标准:胃癌根治术切除样本,以10%中性缓冲福尔马林固定;免疫组化检测样本肿瘤组织,HER-2强阳性表达(3+);病理样本对应患者对本研究知情同意。排除标准:HER-2表达明显异质性。检测试剂与仪器:DAKO公司Envision检测系统及配套试剂兔抗人HER-2单克隆抗体。 1.2 方法 选择肿瘤组织丰富区域的标本,制成10 mm×5 mm×5 mm组织块,酒精梯度脱水,浸蜡包埋后备用。切片机设6 μm层厚,连续切片50张,置于离心管中,另滴加二甲苯溶液6 ml,以玻璃搅拌棒轻搅至切片粉碎,石蜡溶解,上机离心2 min,离心速率4 000 r/min,半径10 cm,取底部沉淀,同法加入二甲苯溶液,搅拌后离心,重复过程3次。然后加无水乙醇溶液6 ml,同法重复离心3次取底部沉淀,以充分洗脱二甲苯。最后按1∶30的配比向底部沉淀中滴加无水乙醇制成悬液,置于4 ℃低温保存备用,组织悬液制备完成。取两张防脱载玻片,吸取预先摇匀的悬液,分别各滴2 μl,60 ℃烘烤2 min后,其中一份样本常规HE染色,一份免疫组化染色。另取石蜡块切片染色,比较观察两种样本的染色定位及强度情况。于试验后4、12周时,复行组织悬液HER-2免疫组化染色,对比之前的阳性定位及强度情况。 2 结果 镜下观察HE染色的37份胃癌组织悬液标本,均可见异形癌细胞。其中,35例癌细胞多数平铺,轮廓清晰,2例样本发现细胞重叠较多,适当加大组织保存液比例,复行HE染色,镜下观察细胞显像良好,见图1。行免疫组化染色的37份胃癌组织悬液标本,HER-2表达均见于细胞膜,同胃癌石蜡切片标本染色定位一致,染色强度均为强阳性(3+),同石蜡切片标本也相符,见图2。试验后4、12周复行免疫组化,HER-2染色定位与强度同前无明显改变,见图3。 3 讨论 临床对于HER-2基因的研究既往主要集中在乳腺癌,病理作用也较为明确,被视为判断乳腺癌预后的独立指标[4]。但近年研究发现,HER-2在胃癌、卵巢癌、膀胱癌、食管癌、肠癌等恶性肿瘤中也存在阳性表达,除了能够反映病程进展及预后,也提示多耐药可能,对临床用药具有指导意义[5]。有研究显示,胃癌患者HER-2过表达占比10%~45%,阳性表达者对术后辅助化疗的敏感性欠佳,远期生存情况不及阴性患者理想,因此,准确检测胃癌患者HER-2状态,对指导临床治疗及预后评估具有重要意义[6]。 免疫组化是利用抗原抗体反应,通过化学反应显色标记抗体来定位、定量、定性组织细胞内抗原的检测技术,是临床公认的检测HER-2的有效手段[7]。但为了确保HER-2免疫组化检测结果准确可靠,加强质量控制、尽可能避免误差仍十分必要。根据相关检测指南与专家共识,HER-2免疫组化染色必须设立对照,阳性对照推荐不同染色强度组织芯片,阴性对照推荐癌旁正常上皮组织[8]。为获得精准染色对照,提高检测结果准确性,国外临床多使用组织芯片,或采用羊膜卷对照,也有关于手工制作多组织“香肠”块的报道[9]。不过,多组织芯片制作技术要求高,工艺烦琐,而商品化质控品价格较高,以此替代耗材成本大,又难于普及,临床应用存在局限[10]。 从国内来看,单组织蜡块对照仍是目前临床最主要使用的对照方法,但是此法需要消耗大量组织样本,而且在HER-2检测需求增加背景下,频繁为待检样本切取对照不仅耗时耗力,亦难于质量控制[11]。为简化质控流程,提高可操作性,国内曾有学者尝试在HER-2免疫组化中应用匀浆液[12],本次临床研究亦基于此目的展开组织悬液制备研究,结果显示胃癌组织悬液标本HE染色镜下观察均可见异形癌细胞,清晰度理想,免疫组化染色均可于细胞膜见HER-2阳性表达,染色定位及染色强度同胃癌石蜡切片标本一致,数周后復检,HER-2染色定位与强度同前无明显改变,保存时间长久,提示染色定位与强度准确且质量稳定。另外,组织悬液的制备方法相对简单,滴加对照快捷,可以节省对照所用时间和人力,同时满足多组织于一张玻片进行对照检测的需要,更易于强化对切片的质控效果,而且制作一次组织悬液可以满足较长时间的检测需求,所用样本量少,不会过度损耗存档样本。 不过值得注意的是,组织悬液HER-2免疫组化后,有时镜下可见染色阳性减弱甚至呈阴性,可能与染色过程中的某些因素有关,为保证结果准确性,需重新检测并另加阳性石蜡组织对照。实际操作中,防脱载玻片滴加悬液组织后,通过酒精挥发与烘烤,可以获得牢固的黏附效果,亦不会污染待检样本。而为了尽可能避免组织污染,考虑仪器染色冲洗自玻片头端向末,对照添加于玻片末端右下,可以防止对样本的干扰。 综上,组织悬液制备简单,滴加对照易操作,癌细胞HER-2阳性定位明确,染色强度准确,质量稳定易判读,能够保障染色过程可靠,可以作为免疫组化室内质控,加以推广使用,为HER-2染色提供阳性参考。 参考文献 [1]陈敏,刘键平,龙晓雨,等.全自动免疫组化和荧光原位杂交方法检测胃癌HER2状态[J].西部医学,2017,29(7):902-907. 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