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3163例新生儿十五项耳聋基因筛查结果分析

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连结静王昊程兆俊梅瑾

[摘要] 目的评估杭州地区新生儿的耳聋基因突变情况，为遗传咨询提供参考。方法回顾性分析2018年6月～2019年6月在杭州市妇产科医院进行新生儿十五项耳聋基因筛查的标本，共3163例。使用微阵列芯片杂交法对遗传性耳聋相关的15个突变位点进行检测，并用Sanger测序法对有突变位点的样本进行相应确证。结果在3163例新生儿中，检测到168例耳聋基因突变携带者（检测到171个突变位点），突变基因携带率为5.31%（168/3163），其中单杂合突变型158例，235del C/299del AT复合突变1例，235delC纯合突变1例、176del 16/538C>T双突变1例，1494C>T突变1例，1555A >G突变7例。结论检测的4个基因15个突变位点中，以GJB2基因235delC位点突变最高。本研究丰富了十五项耳聋基因筛查及突变位点携带率流行病学的资料，为杭州地区耳聋的遗传咨询及预防提供依据。

[关键词] 新生儿;耳聋基因;突变携带率;基因筛查;听力筛查

[中图分类号] R764.43? ? ? ? ? [文献标识码] B? ? ? ? ? [文章编号] 1673-9701（2020）35-0134-03

[Abstract] Objective To evaluate the mutation of deafness genes among newborn babies in Hangzhou area so as to provide reference for genetic counseling. Methods A total of 3163 cases of 15 deafness gene screenings among newborn babies carried out in Hangzhou Women's Hospital from June 2018 to June 2019 were retrospective analyzed. Microarray chip hybridization was used to detect 15 mutation sites related to hereditary deafness， and Sanger sequencing was used to confirm the samples with mutation sites. Results A total of 168 deafness gene mutation carriers（with 171 mutation sites detected） were detected among 3163 newborn babies， with a mutation gene carrying rate of 5.31%（168/3 163）， including 158 cases of single heterozygous mutation， 1 case of 235del C/299del AT compound mutation， 1 case of 235del C homozygous mutation， 1 case of 176del 16/538C>T double mutation， 1 case of 1494 C>T mutation， and 7 cases of 1555A>G mutation. Conclusion Among the 15 mutation sites of the 4 genes detected， the 235del C site of GJB2 gene has the highest mutation. The study has enriched the epidemiological data of 15 deafness gene screenings and mutation site carrying rates， providing basis for counseling on and prevention of inheritance of deafness in Hangzhou area.

[Key words] Newborn babies; Deafness gene; Mutation carrying rate; Gene screening; Hearing screening

耳聾是由听觉系统发生病变，从而引起听力功能障碍。耳聋最主要的危害是给患者自身生活及与别人的交往带来严重的不便利，严重者可导致抑郁自闭。在我国耳聋患者已超过2780万人，每年有6～8万耳聋新生儿出生，占新生儿的（1～3）/1000，其中超过60%的新生儿耳聋是遗传因素导致[1]。因此，对新生儿进行遗传性耳聋基因筛查显得尤为重要。有研究显示，不同地区及不同种族的人群在耳聋基因突变位点的携带率上存在着差异[2-3]，本研究回顾性分析了杭州地区3163例新生儿的4个耳聋基因15个变异位点的筛查结果，丰富了杭州地区耳聋基因突变位点及携带率流行病学的资料，为该地区耳聋的遗传咨询及预防提供参考，减低出生缺陷。

1 资料与方法

1.1一般资料

纳入2018年6月～2019年6月在杭州市妇产科医院进行新生儿耳聋基因检测标本，共3163例，研究对象监护人签署《耳聋基因芯片检测申请单与知情同意书》。按照《新生儿疾病筛查技术规范（2010版）》管理规范和采血常规的要求，采取新生儿的足跟血进行滤纸干血斑的制备。

1.2 方法

1.2.1 试剂? 十五项遗传性耳聋相关基因检测试剂盒（成都博奥晶芯生物科技有限公司，国械注准20173401343）。

1.2.2 检测方法? 按照成都博奥晶芯生物科技有限公司的十五项遗传性耳聋相关基因检测试剂盒说明要求，使用核酸提取试剂盒提取新生儿干血斑中的DNA，和质控品（空白样本、阴性对照品及遗传阳性对照品）进行PCR扩增。扩增完成后，使用微阵列芯片杂交法对标本进行4个基因15个位点的检测[GJB2（35del G、235delC、176del16、299del AT）、GJB3（538C>T）、SLC26A4（2168A>G、IVS7-2A>G、1174A>T、1226G>A、1229C>T、1975G>C、2027T>A、IVS15+5G>A）和线粒体DNA12 SrRNA （1494C>T、1555A>G）]。对基因芯片筛查中出现突变位点的样本使用Sanger测序法进行确证[4]。

2 结果

在3163例新生儿样本中，检出耳聋基因突变位点携带者168例（176del 16/538C>T突变1例，按GJB2突变和GJB3突变各计1次），4个检测的耳聋基因突变携带率见表1。

在3163例检测样本中共检出171个突变位点，突变型等位基因频率5.41%（171/3163），其中单杂合突变型158例，235del C/299del AT复合突变1例，235delC纯合突变1例、176del 16/538C>T双突变1例，1494C>T突变1例，1555A >G突变7例，见表2。

3 讨论

听力障碍会直接影响新生儿的语言发育，从而导致由聋致哑，给新生儿的生长发育及社会生活带来非常严重的影响，而常规听力学筛查无法发现迟发型、药物敏感性和渐进性耳聋患者，耳聋基因的筛查在一定程度上弥补了这个缺陷[4]。目前已经发现的耳聋基因相关位点已有300多个，其突变位点的携带在不同的国家地区存在差异[5]。在我国，常见的耳聋相关基因及突变位点主要有GJB2（235delC、176del16、299del AT）、GJB3（538C>T）、SLC26A4（2168A>G、IVS7-2A>G、1174A>T）和線粒体DNA12SrRNA（1494C>T、1555A>G）。现阶段对这4个基因研究较为透彻[6-8]，其相关的突变位点所引起的临床诊断已有明确的认知[9]。同时，耳聋基因的诊断技术也在不断的发展[10]，如PCR扩增片段的Sanger测序、靶向捕获结合高通量测序以及基于热点突变检测的诊断技术，如寡聚核糖核酸芯片杂交检测法、飞行时间质谱法、Taqman探针法等技术的发展及应用，缩短检测时间，提高结果的准确性，同时降低检测费用，进一步加快耳聋基因筛查的推广[11-12]。

随着优生优育理念的不断深入，耳聋基因筛查已经成为新生儿常规的筛查项目，而新生儿的基因筛查可在一定程度上体现该地区的耳聋基因突变携带率情况[13]，但在杭州地区尚缺乏大样本的耳聋基因筛查的流行病学数据。在本研究中，共对3163例新生儿进行4个耳聋基因15个位点的检测，发现所测出的基因位点的突变携带率为5.41%（171/3163），其中以GJB2基因突变携带率最高，SLC26A4次之，两者分别占基因突变位点总数的57.89%（99/171）和30.41%（52/171）。同时，本研究中的3163例新生儿中，男1643例，突变基因携带率5.48%（90/1643），女1520例，突变基因携带率为5.33%（81/1520），男女在携带率上没有差异。本研究中杭州地区的耳聋基因突变位点的携带率与北京、湖南地区接近[7，14]，与贵州、新疆等少数民族较多的地区存在较大的差异[13，15]。研究中3163例新生儿的听力筛查结果未通过的有165例，未通过听力初筛率为5.22%[16]，后期随访确诊3例为先天性耳聋新生儿（1例基因筛查结果为235delC纯合突变;1例235delC/299del AT复合杂合突变;1例耳聋基因筛查正常，原因不明），即本研究中先天性耳聋发病率为0.95‰（3/3163），略低于指南中（1～3）‰的发生率。

综上所述，本研究分析杭州地区的3163例新生儿的4个耳聋基因的15个位点的筛查结果，在一定程度上填补了杭州地区耳聋基因突变位点的分子流行病学资料的空缺，对孕期夫妇的孕前检查有一定的指导意义。用耳聋基因的十五项筛查进行遗传学检测可以明确耳聋人群中40%的遗传学病因，再结合家系分析和查体可以诊断95%以上的遗传性耳聋[17]，故建议备孕夫妇将耳聋基因筛查列入孕前检查的常规检查项目，通过遗传咨询减少耳聋新生儿的出生率。有研究显示，在双方均携带突变耳聋基因的情况下，通过对其生育进行全程的指导和干预，可以预防性的减少近1/3～2/5的先天性耳聋患者出生[13，18]。耳聋基因筛查对降低遗传性耳聋新生儿的出生率具有重要的意义，对耳聋基因突变位点的携带者可进行孕前遗传指导和孕期所需进行的耳聋相关的筛查而获得优生儿。对于携带耳聋突变基因的新生儿，可根据不同的位点突变类型，进行相应的处理及预防，避免听力的减退和聋哑残疾的发生，还可以指导部分耳聋患者进行针对性的治疗。如头胎新生儿为遗传性耳聋或耳聋突变基因的携带者时，二胎孕妇可采用羊水穿刺测序进行耳聋基因的筛查[19];如备孕夫妇为相同突变耳聋基因的携带者或一方为携带者另一方为纯合子时，可采用人工干预，如辅助生殖中的PGD技术，获得生育听力正常的子代[20-23]。总之，对于耳聋重点在于预防和早期发现和治疗，新生儿及备孕夫妇的耳聋基因筛查可有效地减低先天性耳聋残疾儿的出生，以达到优生优育的目的。

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（收稿日期：2019-11-26）

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