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急性淋巴细胞白血病患者miR-429表达分析

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余蕙君黄婷婷潘楠楠

【摘要】目的探讨急性淋巴细胞白血病患者miR-429表达情况。方法选取30例急性淋巴细胞白血病患者作为观察组，另选同期30例健康体检者作为对照组。比较两组研究对象miR-429表达水平;比较观察组miR-429不同表达水平患者年龄、性别、白细胞计数、血红蛋白、乳酸脱氢酶、骨髓原始细胞比例、危险分级、生存时间。结果观察组miR-429表达水平（2.48±0.15）高于对照组的（0.92±0.06），差异有统计学意义（P<0.05）。观察组30例患者中miR-429低表达16例，高表达14例。miR-429高表达患者年龄、性别、血红蛋白水平与miR-429低表达患者比較差异无统计学意义（P>0.05）;miR-429高表达患者白细胞计数、乳酸脱氢酶、骨髓原始细胞比例、危险分级均高于miR-429低表达患者，生存时间短于miR-429低表达患者，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-429表达和急性淋巴细胞白血病患者的预后有密切关系，可以作为评价预后的参考指标。

【关键词】急性淋巴细胞白血病;miR-429;预后;白细胞;骨髓原始细胞比例;危险分级

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.20.016

【Abstract】 Objective ? To discuss the expression of miR-429 in acute lymphoblastic leukemia patients. Methods ? There were 30 acute lymphoblastic leukemia patients selected as the observation group， and concurrent 30 healthy examinees as the control group. The expression of miR-429 of the two groups was compared. The age， gender， white blood cell count， hemoglobin， lactate dehydrogenase， bone marrow primordial cells ratio， risk classification， and survival time of patients with different expression levels of miR-429 in the observation group were compared. Results ? The expression of miR-429 （2.48±0.15） of the observation group was higher than that of the control group （0.92±0.06）， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Among the 30 patients in the observation group， 16 cases had low expression of miR-429 and 14 cases had high expression of miR-429. There was no statistically significant difference in age， gender， hemoglobin of miR-429 high expression patients compared with miR-429 low expression patients （P>0.05）. White blood cell count， lactate dehydrogenase， bone marrow primordial cells ratio and risk classification of patients with high expression of miR-429 were higher than those of patients with low expression of miR-429， and survival time was shorter than that of patients with high expression of miR-429， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion ? The expression of mir-429 is closely related to the prognosis of patients with acute lymphoblastic leukemia， which can be used as a reference index to evaluate the prognosis.

【Key words】 Acute lymphoblastic leukemia; miR-429; Prognosis; White blood cells; Bone marrow primordial cells ratio; Hazard classification

急性淋巴细胞白血病属于血液系统疾病，是患者的骨髓造血干细胞、淋巴祖细胞发生异常分化和恶性增殖，其临床症状是贫血、发热和感染[1]。急性淋巴细胞白血病可以分为B淋巴细胞白血病、T淋巴细胞白血病，属于儿童、青少年高发性肿瘤[2]。急性淋巴细胞白血病的临床治疗效果有一定程度的提高，但是仍有患者的预后很差，有效的探寻其发生、发展和预后的敏感指标，对于提高治疗效果有重要意义。miRNA是一种内源性非编码RNA分子，其包含18～24个内源性碱基，可以特异性调节目的基因表达，对于肿瘤的发生、发展具有重要影响。miR-429在不同类型肿瘤疾病中均有异常性表达，其和疾病的恶性程度有关联性。资料显示[3]，肺癌患者的病灶组织中miR-429水平较低时，其临床效果较好，提示其可以作为肿瘤预后的观察指标。但是目前关于急性淋巴细胞白血病患者miR-429表达的研究，却鲜有报道。本研究分析30例急性淋巴细胞白血病患者的临床资料，拟探讨急性淋巴细胞白血病患者miR-429表达情况，现报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料选取本院2016年3月～2018年3月的30例急性淋巴细胞白血病患者作为观察组，其中男13例，女17例;同时选取同期30例健康体检者作为对照组，其中男20例，女10例。两组一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。纳入标准：①两组研究对象的一般资料完整;②经过骨髓细胞形态学、免疫学、细胞遗传学、分子生物学对患者进行确诊。排除标准：①已经在其他医疗结构接受急性淋巴细胞白血病患者;②心、肝、肾严重功能不全者;③药物过敏者;④未按照要求完成治疗者。

1. 2 仪器与方法

1. 2. 1 试剂与仪器 ①胎牛血清;②TRLZOL试剂;③淋巴细胞分离液;④逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）试剂盒;⑤细胞培养板;⑥AriaMx定量PCR仪;⑦高速冷冻离心机;⑧ZCZY-CS8摇床。

1. 2. 2 方法对两组研究对象的骨髓样本进行采集，将单个核细胞分离，样本液4.0 ml/份+相等体积淋巴细胞分离液， 4 ℃， 450 × g进行离心，时间为20 min，?制备样本细胞液。RT-PCR检测：提取细胞内的总RNA，以分光光度法对RNA质量进行评估，以反转录合成cDNA。设置逆转录条件：①50℃ 15 min;②92℃ 2 min，反应产物放置在-20℃冷冻保存。设计miR-429引物。设置反应条件：①以95℃预变性处理，时间为5 min;②95℃变性处理，时间为15 s， 56℃复性，时间为20 s， 72℃延伸时间为45 s。从变性直到延伸32个循环，采用2-△△CT法对miR-429相对的表达水平。2-△△CT>2.5，提示miR-429高水平表达， 2-△△CT≤2.5，提示miR-429低水平表达。

1. 3 观察指标 ?比较两组研究对象miR-429表达水平;比较观察组miR-429不同表达水平患者年龄、性别、白细胞计数、血红蛋白、乳酸脱氢酶、骨髓原始细胞比例、危险分级、生存时间。

1. 4 统计学方法采用SPSS21.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示，采用t检验;计数资料以率（%）表示，采用χ2检验;等级计数资料采用秩和检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 两组研究对象miR-429表达水平比较观察组miR-429表达水平高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2. 2 miR-429 水平与急性淋巴细胞白血病患者疗效的关系观察组30例患者中miR-429低表达16例，高表达14例。miR-429高表达患者年龄、性别、血红蛋白水平与miR-429低表达患者比较差异无统计学意义（P>0.05）;miR-429高表达患者白细胞计数、乳酸脱氢酶、骨髓原始细胞比例、危险分级均高于miR-429低表达患者，生存时间短于miR-429低表达患者，差异有统计学意义（P<0.05）。見表2。

3 讨论

急性淋巴细胞白血病作为血液系统肿瘤性疾病，其主要症状是贫血、感染和出血，并且对于肝脏、脾脏和骨骼等形成浸润，危害患者的身体健康和生命安全。升高的miR-429 表达水平会造成急性淋巴细胞白血病细胞增殖，提高其迁移能力和耐药性，说明急性淋巴细胞白血病病情变化可能和miR-429 表达水平有一定的关联性。有研究表明[4]， miR-429 表达水平和卵巢癌细胞的侵袭力、迁移能力有相关性，也和病灶的恶性程度相关。急性淋巴细胞白血病临床特征比较复杂，其通过单一性少量的临床指标来指导临床治疗，受到一定的限制。

miR-429 表达水平和急性淋巴细胞白血病的临床疗效有一定的相关性，对其监测利于观察急性淋巴细胞白血病的临床效果。本研究中，观察组miR-429表达水平高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。观察组30例患者中miR-429低表达16例，高表达14例。miR-429高表达患者年龄、性别、血红蛋白水平与miR-429低表达患者比较差异无统计学意义（P>0.05）;miR-429高表达患者白细胞计数、乳酸脱氢酶、骨髓原始细胞比例、危险分级均高于miR-429低表达患者，生存时间短于miR-429低表达患者，差异有统计学意义（P<0.05）。提示急性淋巴细胞白血病临床造血干细胞分化障碍和miR-429 表达水平有一定的关系， miR-429高表达还可以增加肿瘤细胞的恶性程度，提高患者的危险分级，降低机体免疫功能和代谢水平的损伤，进而影响白细胞水平、乳酸脱氢酶。体外的细胞研究表明[5-7]， miR-429 高表达水平对于急性淋巴细胞白血病患者的PI3K-AKT信号通路形成干扰，进而影响白血病细胞的增殖，促使白细胞对于药物形成耐药性，影响临床疗效。既往研究中，治疗效果不佳或者生存期较短的急性淋巴细胞白血病患者miR-429 处于高表达水平，而生存期较长的患者， miR-429 处于低表达水平，此结果和本研究基本一致。

综上所述， miR-429表达和急性淋巴细胞白血病患者预后有密切关系，可以作为评价预后的参考指标。

参考文献

[1] 张丽翠，钟晨，马雅静，等. 急性淋巴细胞白血病患者 miR-429 表达水平及其预后价值. 中国实验血液学杂志， 2020， 28（1）：119-124.

[2] 吴嘉美，刘梦瑶，许何丽，等. hsa-miR-429的靶基因预测及功能分析. 解剖学进展， 2019， 25（3）：312-315.

[3] 郭春梅，刘淑清，孙明忠. miR-429与肿瘤. 中国生物化学与分子生物学报， 2018， 34（8）：826-832.

[4] 何枫，颜连启，李小磊. miR-429在疾病中的研究进展. 江苏医药， 2017， 43（17）：1266-1269.

[5] 黄文剑，吴琍，侯琳，等. 乳癌组织miR-429基因表达及甲基化检测. 青岛大学学报（医学版）， 2018， 54（1）：26-29.

[7] 李金媚. miR-373与肿瘤侵袭转移研究进展. 中华实用诊断与治疗杂志， 2015， 29（10）：946-948.

[8] 陈志伟，郭琳琳，吴嘉美，等. miR-1271-5p促进大鼠心肌细胞增殖. 解剖科学进展， 2018， 24（2）：153-155.

[收稿日期：2020-04-09]

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