《中草药对兔球虫卵囊体外发育的影响》-农学论文，现代农业论文-论文范文参考-科学狗论文网

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中草药对兔球虫卵囊体外发育的影响

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方素芳刘康雅崔平苏杰褚耀诚马利芹魏香蒲

摘要 ? ?为探讨白头翁、常山、南瓜子、青蒿、柴胡、绞股蓝、秦皮、石榴皮、板蓝根、黄檗、槟榔、马齿苋等12种中草药水煎剂对兔球虫卵囊孢子化的影响，选用100%、50%、25%不同浓度的单味药物对未孢子化的兔球虫进行体外抑制试验，于第3、5天分别计数。然后洗去中药组的药液，加等量2.5%重铬酸钾溶液，继续培养3 d，计算每组卵囊的孢子化率。结果表明，所选用的12种中草药中白头翁、南瓜子、柴胡、绞股蓝的3个浓度均可以明显抑制卵囊孢子化;而石榴皮、马齿苋、板蓝根仅100%浓度对抑制球虫卵囊有一定效果;常山、青蒿、秦皮、黄檗、槟榔抑制球虫卵囊孢子化的作用效果不明显。洗去中药后，只有100%、50%浓度的绞股蓝有部分卵囊没有孢子化，白头翁、南瓜子、柴胡、马齿苋组兔球虫在重铬酸钾环境中仍可继续生长，说明单味中药对卵囊只能抑制其发育而不能有效杀灭，即脱离中药环境，兔球虫仍可继续发育。

关键词 ? ?中草药;兔球虫;体外发育;孢子化;抑制作用

中图分类号 ? ?S829.1 ? ? ? ?文献标识码 ? ?A

文章编号 ? 1007-5739（2020）22-0176-03 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?開放科学（资源服务）标识码（OSID）

传统的兔球虫病防治方法多为药物防治，但是面临日益严重的困难和挑战，兔球虫像其他球虫一样很容易产生耐药性虫株，致使新生产的抗球虫药在使用很短的一段时间后即产生抗药性而失去使用价值，抗球虫药很难长期占据市场。药物的残留以及对环境的污染，给食品工业安全生产和人民卫生健康带来严重威胁，找到防治球虫病的新方法是养殖业者和防制专家共同追求的目标。周新锐等[1]、常晓辉等[2]报道，鸡球虫对中草药不易产生耐药性，毒副作用小，具有广阔的发展前景。但是目前中草药的利用大多数为体内用药阶段，关于中草药对球虫卵囊体外发育的影响报道较少[3]。为此，本研究选取南瓜子、柴胡、白头翁等12种中药进行体外抑制兔球虫卵囊孢子化试验，以期为新型兔球虫消毒剂的研发及新型抗球虫中药的研究提供参考。

1 ? ?材料与方法

1.1 ? ?试验材料

中草药：白头翁、常山、南瓜子、青蒿、柴胡、绞股蓝、秦皮、石榴皮、板蓝根、黄檗、槟榔、马齿苋等12种中草药，均购自河北祁新中药颗粒饮片有限公司，采用煎煮法制成含生药 1 g/mL的提取液，备用。

兔球虫卵囊：选用孔氏艾美耳球虫卵囊，由河北北方学院兽医寄生虫实验室提供，试验前通过人工感染无球虫兔进行复壮，获得新鲜未孢子化球虫卵囊，备用。

1.2 ? ?试验设计

在光口瓶中分别加入浓度100%、50%、25%的白头翁、常山、南瓜子、青蒿、柴胡、绞股蓝、秦皮、石榴皮、板蓝根、黄檗、槟榔、马齿苋等不同浓度的汤剂40 mL。另外设2瓶2.5%重铬酸钾溶液40 mL作为对照，于每个光口瓶中均加入4×106未孢子化球虫卵囊，放入振荡培养箱（HZQ-F160）中，在27 ℃条件下进行培养，于第3、5天分别计数。然后洗去中药组的中药液，加等量2.5%重铬酸钾溶液，继续培养3 d，计算每组卵囊的孢子化率。

1.3 ? 中药制剂制备

称取白头翁、常山、南瓜子、青蒿、柴胡、绞股蓝、秦皮、石榴皮、板蓝根、黄檗、槟榔、马齿苋各40 g制成汤剂。具体方法为：以白头翁为例，称取白头翁40 g，加入350 mL蒸馏水浸泡20 min，文火煮30 min，过滤，滤渣再加350 mL蒸馏水，文火煮30 min，过滤，合并二次滤液，加热浓缩至40 mL，制成100%中药汤剂（即1 mL溶液含有1 g干物质），高压灭菌，备用。其他几种药液制备方法与白头翁的制备方法相同。按照试验设计，用时配成不同浓度的汤剂。

1.4 ? ?卵囊孢子化率计算

分别在培养3、5、8 d后进行孢子化卵囊的计数，取1滴卵囊和药液的混悬液在载玻片上并于10×40倍数的显微镜下进行观察，随机数100个球虫卵囊，记录其中已经孢子化的卵囊数量，从而得出其孢子化率。计算公式如下：

卵囊孢子化率（%）=孢子化卵囊数/100个卵囊×100。

2 ? ?结果与分析

2.1 ? ?单味中药作用3 d对兔球虫卵囊孢子化率的影响

将本试验的12种中草药制备成3个浓度的汤剂，研究其对兔球虫卵囊孢子化的抑制差异。结果发现，白头翁、南瓜子、柴胡、绞股蓝的3个浓度均可以明显抑制卵囊的孢子化;而石榴皮、马齿苋、板蓝根仅100%浓度对抑制球虫卵囊有一定效果;常山、青蒿、秦皮、黄檗、槟榔抑制球虫卵囊孢子化的作用效果不明显（表1）。

2.2 ? ?单味中药作用5 d对兔球虫卵囊孢子化率的影响

不同浓度单味中药作用5 d对兔球虫卵囊孢子化的影响，与不同浓度单味中药作用3 d对兔球虫卵囊孢子化的影响结果差异不明显，白头翁、南瓜子、柴胡、绞股蓝的3个浓度均可以明显抑制卵囊的孢子化;石榴皮、马齿苋、板蓝根仅100%浓度对抑制球虫卵囊有一定效果;常山、青蒿、秦皮、黄檗、槟榔对球虫卵囊孢子化抑制不明显（表2）。

2.3 ? ?洗去中药后兔球虫卵囊孢子化率的变化

单味中药作用5 d后，洗去中药组的中药液，加等量 2.5%重铬酸钾溶液，继续培养3 d，计数，观察兔球虫卵囊的孢子化率。结果发现，具有明显抑制卵囊孢子化的中药组，洗去中药之后，只有100%、50%浓度的绞股蓝有部分卵囊没有孢子化，白头翁、南瓜子、柴胡、马齿苋组兔球虫在重铬酸钾环境中仍然可以继续生长。这说明单味中药对卵囊只能抑制其发育而不能有效杀灭，即脱离中药环境，兔球虫仍然可以继续发育（表3）。

3 ? ?结论与讨论

3.1 ? ?单味中药抑制兔球虫卵囊孢子化的效果

本试验设3个浓度研究12种中草药汤剂对兔球虫卵囊孢子化的抑制效果。结果发现，白头翁、南瓜子、柴胡、绞股蓝的3个浓度均可以明显抑制卵囊的孢子化，兔球虫孢子化率为0～7%。刘 ?阳等[4]用100%浓度、50%浓度、25%浓度白头翁汤剂培养3 d，兔球虫孢子化率分别为85%、70%、60%;张国[5]用100%浓度、50%浓度、25%浓度白头翁汤剂培养4 d，兔球虫孢子化率分别为36%、46%、47%;张文香等[6]用100%浓度、50%浓度、25%浓度白头翁汤剂培养4 d，鸡球虫孢子化率分别为13%、14%、15%;高俊峰等[7]用100%浓度、50%浓度、25%浓度柴胡汤剂培养，兔球虫孢子化率分别为32%、33%、35%。

本文中石榴皮、马齿苋、板蓝根仅100%浓度对抑制球虫卵囊有一定效果，兔球虫孢子化率为3%～53%。刘 ?阳等[4]用100%浓度、50%浓度、25%浓度石榴皮汤剂培养3 d，兔球虫孢子化率分别为75%、81%、80%。

文中常山、青蒿、秦皮、黄檗、槟榔对抑制球虫卵囊孢子化作用效果不明显，兔球虫孢子化率为87%～98%。不同浓度单味中药作用3、5 d对兔球虫卵囊孢子化的影响结果差异不明显。刘 ?阳等[4]用100%浓度、50%浓度、25%浓度青蒿汤剂培养3 d，兔球虫孢子化率分别为76%、83%、76%;用100%浓度、50%浓度、25%浓度秦皮汤剂培养3 d，兔球虫孢子化率分别为49%、61%、55%。张国[5]用100%浓度、50%浓度、25%浓度青蒿汤剂培养4 d，兔球虫孢子化率分别为60%、64%、72%;用100%浓度、50%浓度、25%浓度秦皮汤剂培养4 d，兔球虫孢子化率分别为63%、65%、68%。张文香等[6]用100%浓度、50%浓度、25%浓度常山汤剂培养4 d，鸡球蟲孢子化率分别为26%、29%、40%;用100%浓度、50%浓度、25%浓度秦皮汤剂培养4 d，鸡球虫孢子化率分别为12%、14%、16%;用100%浓度、50%浓度、25%浓度青蒿汤剂培养4 d，鸡球虫孢子化率分别为13%、19%、24%。高俊峰等[7]用100%浓度、50%浓度、25%浓度常山汤剂培养，兔球虫孢子化率分别为35%、37%、39%;用100%浓度、50%浓度、25%浓度青蒿汤剂培养，兔球虫孢子化率分别为37%、42%、45%。

本研究结果与刘阳、高俊峰等的结果存在差异，分析原因可能是所用的兔球虫虫种不同。同时，中草药能抑制卵囊孢子化过程，使其孢子化率降低或延迟其孢子化时间，原因可能是因为一些中草药的药物成分能穿透卵囊壁引起抑制、杀灭作用，或是球虫卵囊对部分药性成分敏感因而致孢子化率降低[8]。中草药对兔球虫卵囊的作用机理仍有待研究。

3.2 ? ?单味中药杀灭兔球虫卵囊的效果

单味中药作用5 d后，洗去中药液，加等量2.5%重铬酸钾溶液，继续培养3 d。结果发现，只有100%、50%浓度的绞股蓝有部分卵囊没有孢子化，白头翁、南瓜子、柴胡、马齿苋组兔球虫在重铬酸钾环境中仍可继续发育，这说明单味中药对卵囊只能抑制其发育而不能有效杀灭。葛 ?凯等[9]选用23味不同浓度的中草药与未孢子化卵囊进行培养，在不同时间观察卵囊孢子化率，洗去药物进行培养，结果表明，商陆具有较好的抑制作用，随着时间延长，球虫卵囊孢子化率呈现下降趋势，且药物浓度越高，抑制效果越好。孟新宇[10]研究发现，珍珠草、川楝子和青蒿抑制卵囊孢子化作用最为明显，在与卵囊作用1、5、10 h后均能明显抑制孢子化程度，但随着作用时间的延长其卵囊孢子化率无显著差异。王玺德等[11]报道石榴皮水提物对离体培养兔球虫卵囊的杀灭作用药效很好。我国中草药资源丰富，但中草药的活性成分和药理作用非常复杂，筛选出具有抗球虫活性的单味中草药是研制抗球虫中草药复方制剂的必要环节。

4 ? ?参考文献

[1] 周新锐，田志英，古少鹏，等.中草药在鸡球虫病中的应用研究进展[J].中兽医学杂志，2010（1）：54-57.

[2] 常晓辉，薛飞群，张丽芳.鸡球虫病药物防治的研究现状[J].中国动物传染病学报，2011，19（5）：71-75.

[3] 马海利，郑明学，李远平，等.中药体外抗柔嫩艾美球虫的研究[J].中国兽医科技，2001，31（2）：25-26.

[4] 刘阳，郝桂英.6种中草药水提取物对兔球虫卵囊孢子化的影响[J].西昌学院学报（自然科学版），2017，32（1）：7-9.

[5] 张国.中草药对兔球虫卵囊孢子化的影响[J].新疆畜牧业，2012，21（7）：16-18.

[6] 张文香，张香斋，李佩国，等.中草药对球虫卵囊孢子化的影响[J].河北科技师范学院学报，2005，19（2）：23-25.

[7] 高俊峰，王卓林，侯美如.单味中药对兔球虫卵囊孢子化抑制效果的研究[J].黑龙江八一农垦大学学报，2014，26（1）：36-39.

[8] 李蕴玉，贾青辉，李佩国.单味中草药对球虫卵囊体外抑制的试验研究[J].黑龙江畜牧兽医，2015（5）：200-202.

[9] 葛凯，李培英，汪兴生，等.中草药对柔嫩艾美耳球虫卵囊孢子化的影响[J].安徽科技学院学报，2007，21（1）：1-5.

[10] 孟新宇.珍珠草对E.tenella卵囊孢子化率、脱囊率及致病力的影响[D].北京：中国农业科学院，2010.

[11] 王玺德，盛书娟，祝建平，等.石榴皮提取物对离体培养兔球虫卵囊的杀灭作用[J].中国畜牧兽医，2012，39（2）：212-215.

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