| 标题 | 布鲁菌病细胞免疫诊断靶点抗原研究进展 |
| 范文 | 齐瑶 摘 要：布鲁菌病是一种具有高传染性的动物疾病，广泛流行于世界各地，同时，该病具有人畜共患的特点，对人类健康造成极大威胁，如何及时有效的确诊布鲁菌病，对其针对性的采取防控措施，提高治疗效果具有非常重要的现实意义。现如今，在布鲁菌病诊断过程中细菌学诊断方法、分子生物学诊断方法以及血清学诊断方法应用比较普遍。但是细胞免疫学诊断方法目前还处在研发阶段，对布鲁菌病细胞免疫诊断靶点抗原研究，对提高布鲁菌病诊断效果，提升防护水平意义重大。 关键词：布鲁菌病;细胞免疫;诊断方法 布鲁菌病主要由布鲁杆菌感染所引起，是一种具有高传染性的疾病，不仅感染动物，还会感染人。同时布鲁杆菌生物种的毒力及其致病能力存在很大差异，牛布鲁菌、犬布鲁菌和绵羊布鲁菌等主要感染牛、羊、犬等啮齿动物等。羊型布鲁菌型对人具有较强的感染性，牛型少见。布鲁菌病发病后，会对多个器官造成损害，导致这些器官功能衰退，影响生活与劳动能力。因布鲁菌病自身特点与现代防疫疫苗的使用，在诊断布鲁菌病过程中，时常发生交叉反应与假阳性的问题。目前诊断布鲁菌病主要的方法有细菌学方法，分子生物学技术以及血清学方法等。而细菌学检查诊断方法，不仅准确率高，还有较高的可靠性，是布病诊断的“金标准”。 布鲁菌是一种兼性胞内寄生菌，侵入机体造成感染之后，会出现明显的细胞免疫学改变，同时还有体液免疫应答发生。细胞介导的免疫反应会引发很多细胞因子产生，在机体内对感染进行对抗。检测不同细胞因子，不仅可以将机体感染状况反映出来，同时还能反映机体免疫水平。而且布鲁菌病感染初期，通过检测手段就能及时发现这些特异性的细胞因子，及时的作出诊断。现在对于布鲁菌病免疫原性蛋白的研究主要集中在外膜蛋白和菌体蛋白。 一、外膜蛋白 原核生物细胞膜主要由外膜蛋白所组成，不仅对机体中细菌正常形态结构起着重要的维持作用，同时也是确保细菌繁殖生存的重要成分。通过对外膜蛋白进行免疫学以及基因组学研究发现，该类蛋白对于疾病诊断与预防有着重要的作用。其免疫原性特征较强，可以对机体形成刺激作用，引发免疫应答，形成特殊的细胞因子，所以外膜细胞是免疫诊断的重要靶点。 1.BCSP31蛋白 该蛋白存在较强的特异性与反应性。通过蛋白芯片开展布鲁菌蛋白免疫学检测过程中，发现在山羊感染后的血清中才存在这种蛋白的抗体，但是人感染布鲁菌病患者血清中没有发现此类抗体。所以通过此蛋白能够有效区分人群和动物布鲁菌感染以及相关疫苗免疫。在BCSP31蛋白基础上建立的分子生物学检测方法，应用于布鲁菌感染的特异性诊断，将成为布鲁菌病血清学特异性诊断靶点。 2.Omp10蛋白 在布鲁菌病感染后，Omp10蛋白作为重要的抗原蛋白，在布鲁菌中普遍存在，但在牛感染血清中，此蛋白不会发生反应，而在养感染的血清中会有相应的反应发生。所以，在诊断布鲁菌病中可以作为重要的诊断候选靶点。 3.Omp31蛋白 该蛋白为粗糙型布鲁菌保护性抗原蛋白，除牛种之外的其他布鲁菌病内都存在其基因，达到98%以上的基因同源性。该蛋白作为细胞免疫抗原，具有较强的优势，可将其作为重要的细胞免疫诊断靶点。 二、菌体蛋白 1.L7/L12蛋白 在布鲁菌胞浆内L7/L12蛋白是其重要的核蛋白，和其他蛋白共同组成核糖体，各种布鲁菌内达到97.1%的基因同源性，为重要的一种细胞优势抗原，可以对染病动物单核细胞起到特异性的刺激作用，同时对IFN –γ具有上调其转录与表达作用，在布鲁菌侵入阶段机体对抗型作用中有着重要的意义。通过该蛋白进行相关DNA疫苗制备，能够引发机体发生体液、细胞免疫应答等，显示牛感染布鲁菌病后，全血中受抗原蛋白体外刺激引发的IFN –γ和疾病存在密切的联系，倘若通过一些定量关系来展现这种联系，这对布鲁菌细胞免疫诊断具有非常重要的意义。所以，在个体感染以及免疫中，该蛋白是IFN –γ产生的主要刺激源，可以作为细胞免疫诊断的重要靶點。 2.GroEL蛋白 GroEL蛋白广泛存在于病原微生物中，在蛋白质的正确折叠和组装、蛋白质的变复性以及跨膜转运等过程中起 重要作用，同时也是一种免疫优势抗原。在布鲁菌感染机体以后，GroEL能够参与诱导机体的体液免疫和细胞免疫。GroEL在进化过程中具有较高的保守性，作为诊断靶点具有一定的特异性。S19 疫苗株免疫小鼠后，提取的小鼠脾脏细胞在GroEL体外刺激下可产生 IFN-γ 。这预示着疫苗免疫后，GroEL可刺激免疫细胞产生IFN-γ ，表明GroEL一种良好的刺激原，是细胞免疫诊断靶点抗原的候选蛋白之一。 三、结语 机体感染布鲁菌之后，会发生诱导细胞免疫应答，对应的细胞产生分泌表达，并形成抗体来对抗病原菌。所以，布鲁菌感染后，通过检测抗体水平，难以及时发现。机体细胞发生免疫反应之后，会产生IFN-γ。特异性抗原蛋白刺激之后的淋巴细胞，分泌的 IFN-γ水平，能够将感染机体的状态充分反映出来。所以，宿主感染状Omp以及菌体蛋白的反映能够通过检测细胞因子而体现，机体细胞免疫受其刺激而引发，并为潜在的特异性细胞因子的刺激源，可以作为细胞免疫诊断的重要候选靶点蛋白，基于该特点能够为建立细胞免疫学诊断方法提供重要的依据。布鲁菌抗原蛋白与牛外周血鲁菌素BrPPD，IFN-γ 体外释放，具有较好的研究意义。体外刺激下的BrPPD与抗原蛋白，接种布鲁菌疫苗免疫的牛外周血可以释放大量的 IFN-γ ，IFN-γ的释放水平与BrPPD皮试试验血清抗体凝集动态变化之间存在相关，并且调高抗原蛋白的刺激浓度可以上调IFN-γ释放水平。在提高淋巴细胞IFN-γ释放水平的基础上，如能摸索出IFN-γ释放量与布病感染间的关系，布病的细胞免疫诊断方法有望进入临床应用。 近些年来，研究布鲁菌蛋白功能方面还比较局限，伴随研究蛋白组学技术的逐渐发展，上述这些蛋白的研究也会逐渐增强，一种或几种靶点蛋白，在体外通过单一或者结合的方式刺激特异性细胞因子的释放能够反映布病的感染状态，不仅如此，一些特异性的靶点蛋白还可用于区分自然感染和疫苗接种，这对于布病的诊断具有重大的意义。 参考文献： [1]王杏芹，桑彩霞，王锋，张启耀，马坚，赵金东. ?人畜布鲁氏杆菌病的检测分析及防制[J]. 新疆畜牧业. 2016，（11）. [2]王东梅，胡大勇，汪滢滢. ?浅谈布鲁氏杆菌病的危害和预防措施[J].吉林畜牧兽医. 2017（02）. [3]丁勇，张晓清，冀永红，刘宝俊，董文柱，宋海军. ?羊布鲁氏杆菌病的流行调查[J]. 河北畜牧兽医. 2016，（04）. |
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