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中国李组织培养技术研究

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摘要：以中国李“帅李”茎段为外植体，通过对不同基本培养基、不同植物生长调节种类和浓度的筛选，建立“帅李”的组织培养再生体系，为”帅李”的组织快繁提供技术指导。结果表明：初代培养宜选用培养基WPM+0.2～0.4mg/L 6- 苄基腺嘌呤（ 6-BA ）+0.08～0.12mg/L 吲哚丁酸（ IBA ）;最佳增殖培养基为WPM+1.0mg/L苯基噻二唑基脲（ TDZ ）+0.08mg/L IBA +0.4mg/L 6-BA，能诱导形成4～5个丛生芽，将嫩茎接种在添加0.5mg/L萘乙酸（ NAA）的 1/2MS培养基中，生根率为33.3%。

关键词：帅李;组织培养;再生体系

中图分类号：S-3文献标识码：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20190730014

李（Prunus）是我国栽培历史悠久的果树之一，有着丰富的种质资源[1]。李的童期长，雌蕊败育率高、遗传高度杂合，实生苗后代普遍性状分离，此外常规的扦插或嫁接方法繁殖苗木速度慢、繁殖系数低，这些问题已成为李生产发展的制约因素;如何缩短李的育种时间，快速繁育苗木是李育种工作者长期努力的目标。

“帅李”是山东临沂主栽李品种，是中国李的一个优良品种，果实卵圆形，果皮紫红色，果肉淡黄色，口感极好，耐贮运[2]。到目前为止，“帅李”的再生相关研究工作开展较少。本试验对中国李“帅李”的组织培养技术进行初步的研究，以期建立“帅李”的茎段再生系统，为中国李的苗木快速繁育提供技术支持。

1 材料与方法

1.1 试验材料

于2016年4月在临沂市农业科学院试验基地“帅李”上采取一年生枝条上的活动芽包括顶芽和茎段为试材。

1.2 试验方法

将田间取回来的外植体，剪成3cm左右带芽茎段，浸泡30min，用流动的自来水冲洗1h左右。在超净工作台上，先用70%酒精消毒30s，再用0.5%NaClO加吐温-20℃ 2～3滴消毒15min[3]。再用无菌水冲洗3～4次，将茎段剪成1cm左右，每个茎段带有一个腋芽，接种到初代培养基上，先暗培养7d，然后转移到光下培养。

1.3 初代培养基的筛选

试验采用3因素3水平的正交设计L9（33）（见表1），将消毒过的茎段或顶茎接种到初代培养基，每个处理接种外植体30个，重复3次，30d后统计成活率、增殖倍数。培养温度为（25 ± 1 ）℃， pH 5.6～5.8，光照时间为 12h/d，光照强度为2 000 lx。

基本培养基：MS、WPM、LP，其中附加蔗糖30g/L，琼脂 6.5g/L;植物生长调节剂：IBA（0.04mg/L、0.08mg/L、0.12mg/L），6-BA（0.2mg/L、0.4mg/L、1.0mg/L）

1.4 无菌苗增殖

培养基：WPM，其中添加IBA 0.08mg/L，6-BA 0.4mg/L，蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L;

细胞分裂素： TDZ（0、0.2mg/L、0.4mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L、1.2mg/L）。将选取初代培养获得的生长均匀的无菌苗接种到增殖培养基，每个处理接种10个，重复3次。30d后分别统计增殖倍数。

1.5 生根培养

基本培养基：1/2MS，其中附加蔗糖15g/L，琼脂6.5g/L;

生长素：NAA （0、0.25mg/L、0.5mg/L、0.75mg/L、1.0mg/L）。将长度大于2cm嫩茎接种到生根培养基，每个处理接种15个嫩茎，先暗培养7d后再转入光下培养。处理重复3次，30d后统计生根率，生根倍数。

1.6 观察结果及统计方法

成活率=成活外植体/接种外植体总数×100%;

增殖倍数=增殖芽总数/接种芽苗总数×100%;

生根率=生根苗数/接种苗总数×100%;

生根倍数=生根总条数/生根苗总数;

实验数据借助于DPS17.0软件进行统计分析。

2 结果与分析

2.1? 初代培养基中不同基本培养与植物生长调节剂浓度的筛选? 将消毒过的茎段或顶茎接种到表1中9个不同处理的培养基上，30d后观察统计成活率。试验结果表明，WPM基本培养基诱导效果最好，MS诱导效果其次，LP培养后期生长较差。其中处理9成活率最高，达47.7%，与处理2、7、8没有表现出显著差异，但与处理1、3、4、5、6表现出差异显著。结合嫩芽生长后期，处理8、9效果较好，即WPM+0.08～0.12mg/L IBA +0.2～0.4mg/L 6-BA。

2.2 不同TDZ浓度对增殖的影响

将初代培养获取的无菌苗嫩芽切下后分别接种在不同植物生长调节剂组合的WPM培养基中，从表2可看出，随着TDZ浓度的增加，增殖倍数呈现上升趋势。处理5增殖倍数最高，达4.7，与处理4、6之间差异不显著，但与处理1、2、3差异显著。单从增殖倍数来看，处理5即WPM+1.0mg/L TDZ+0.08mg/L IBA +0.4mg/L 6-BA为最佳增殖培养基。

2.3 不同浓度NAA对生根的影响

在1/2MS培养基中添加不同浓度的NAA对生根影响很大，从表3结果可以看出，5个处理生根率差异显著，处理3、4之间没有差异。其中处理3（NAA 0.5mg/L）生根率最高，达33.3%，生根倍数达2.1。处理4次之，根的基部产生少量的愈伤团，以致阻碍了生根，且嫩芽后期生长缓慢，因此，最佳生根培养基为1/2MS+0.5mg/L NAA。

3 结论

本试验以中国李“帅李”的茎段为外植体，分析了不同基本培养与植物生长调节剂对成活率、增殖和生根的影响，初步建立起“帅李”的组织培养植株再生体系。结果表明最佳初代培养基WPM+0.08～0.12mg/L IBA +0.2～0.4mg/L 6-BA;最佳增殖培養基WPM+1.0mg/L TDZ +0.08mg/L IBA +0.4mg/L 6-BA;最佳生根培养基1/2MS+0.5mg/L NAA。

参考文献

[1] 李玉琴，张玉梅.生物技术在李上的应用[J].河北林业科技，2006（1）：35-36.

[2] 牛庆霖，苑克俊，于婷娟，等.山东省李产业发展现状研究[J].北方园艺，2015（18）：185-188.

[3] 邹英宁，李国怀，樊青峰，等不同抗氧化剂对中国李茎段培养的影响[J].华中农业大学学报，2006，25（1）：84-86.

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