标题 | 实验室常用猪精液的低温保存方法 |
范文 | 曹丹 马永和 张永平 随着养猪生产的发展和产业化进程的推进。人们对猪人工授精重要性的认识越来越深刻,在现代养猪生产和育种工作中,人工授精正成为一种非常重要的生产途径。在猪的生产方面,人工授精技术的应用低温保存与冷冻精液相比,具有更好的受胎率和产仔数,而且操作简单,取材方面,更利用推广应用。现将总结的猪精液的低温保存方法介绍如下: 1 精液的采集 用38°C左右的热水预热集精杯,并将杯内套入食品级塑料袋,并将消毒好的四层滤纸罩在杯口上,用橡皮筋套住。采用手握法采集精液,边采集边滤掉胶状物,精液采集后要立即丢掉滤纸,盖好杯盖,送往实验室检查。 2 精液品质的检查 采集精液后,迅速置于30°C左右的恒温水浴中,然后取样进行品质检查,精子活力在70%以上,且无异味,乳白色,方可用于保存或输精。 3 精液的稀释和保存 3.1 低温保存稀释液的配制 准确称取如下药品:葡萄糖2.5克、蔗糖3.3克、青霉素0.06克、链霉素0.1克、0.05%EDTANa2(乙二胺四乙酸二钠),置入烧杯中。量取去离子水80毫升将其溶解后,搅拌至少30分钟,分装于离心管内(规格50毫升)。离心机以7276倍重力,离心30分钟后,取其上清液分装于5毫升的离心管内,置于4°C保存備用。 3.2 精液的第一次降温、离心和稀释 把盛有符合要求的精液(存活率70%以上)塑料瓶用4层毛巾包裹好后,置于17°C的冰箱中进行1小时的降温。精液经降温处理后,分装于50毫升的离心管中,以250倍重力离心8分钟。收集上清液置于灭菌的塑料瓶内,再次置入冰箱内(17°C)内静置30分钟。用离心管(规格5毫升)分装,每个离心管内装入精液1毫升,用低温保存稀释液1∶2进行同温稀释。 3.3 精液的二次降温和4°C低温保存 用四层毛巾将精液离心管进行保温处理后,放入冰箱内(4°C)进行缓慢降温。观察离心管中的精液温度降到4°C时,将上述处理的离心管置入到4°C的恒温水中保存。 4 低温保存精液的使用 从冰箱中取出保存的精液,移液器移取50微升注入1.5毫升的离心管内,添加同温的低温保存稀释液1毫升,缓慢混合均匀后,置入35~37°C水浴锅中孵育15分钟。取10微升稀释后的精液在血细胞计数板上压片,并于37°C载物台上观察精子活力等相关指标。 5 低温保存方式的机理探讨 在0~5°C条件下,精子的活力被抑制,降低代谢水平,减少能耗,精子的存活时间得以延长。在低温保存下,10~0°C温度范围对精子是一个危险的温度范围区,如果精液从常温状态迅速降至0°C,精子就会发生不可逆的冷休克现象。所以精液在低温保存之前,需经预冷平衡。其具体做法为:每分钟降温0.2°C,用1~2小时完成降温全过程。 |
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