四川省非洲猪瘟抗体检测结果与分析

    李丽+邓飞+裴超信+张睿+周莉媛+邵靓

    

    

    摘要：非洲猪瘟（African swine fever，ASF）已在全球多个国家发生和流行，是我国重点防范的外来动物疫病。加强监测对该病的防范有重要意义。采用美国Kernel公司的非洲猪瘟病毒抗体检测试剂盒对来源于四川省阿坝州、广元、巴中、达州、广安、成都、内江、资阳、遂宁和雅安等地的540份猪血清样品进行了检测，结果显示均为ASFV抗体阴性。

    关键词：四川省；非洲猪瘟；抗体检测

    中图分类号：S858.28 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2016）10-0010-03

    非洲猪瘟（African Swine Fever，ASF）又称为非洲猪瘟疫、疣猪病，是由双链DNA 病毒感染引起的猪的一种急性、高度传染性疾病[1]。其临床症状和病理变化与猪瘟相似，表现为发热、皮肤发绀和淋巴结、肾、胃肠黏膜充血、出血，急性型死亡率高达100%[2]。该病1921年首先发现于非洲东部国家肯尼亚，然后一直存在于撒哈拉以南的中、南部及西部的非洲国家[3]，据OIE统计，截至2012年底，全球共有48个国家报道发生过非洲猪瘟疫情。由于该病危害严重，OIE将其列为A 类法定报告动物疫病[4]，我国将其列为一类动物疫病。

    虽然目前我国尚无非洲猪瘟疫情，但由于该病具有高传染性及高死亡率且缺乏有效疫苗防治，随着经济全球化的发展，ASF对我国养猪业具有潜在的高风险性。加之近年来，该疫情在俄罗斯南部和北高加索地区继续扩散，我国与俄罗斯毗邻，因此跨境传播防控压力更为巨大。四川省自2015年积极开展实验室的血清学检测工作，加强对该病的持续监测，邓飞等曾对四川省北部及东北部的5个地级市猪血清进行抗体检测，结果均为阴性[5]。本试验持续监测上述5个地市的样品并新增成都等四川中部及东部的5个地级市猪血清监测。现将其报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 血清样品

    血清样本来源于四川省阿坝、广元、巴中、达州、广安的规模场及散养户90份以及成都、内江、资阳、遂宁、雅安的規模场、散养户及屠宰场450份，共计540份。

    1.2 检测试剂

    美国Kernel公司的非洲猪瘟病毒抗体检测试剂盒，批号：160118。

    1.3 检测方法

    （1）使用前所有试剂恢复至室温。

    （2）在ELISA反应板上每孔加50 μL稀释液，以50 μL/孔加入待检样品和阴阳性对照。阳性对照（E12、F12）和阴性对照（G12、H12）各设置两孔，检测样品设置一孔，每板检测样品90份。

    （3）封膜，振荡，37 ℃孵育60 min。

    （4）弃酶标板中的液体于装有NaOH的容器中，洗板机洗板4次，最后一次吸水纸上轻拍酶标板。

    （5）每孔加100 μL稀释好的酶标结合物，封膜，37 ℃孵育30 min。

    （6）洗板5次，最后一次吸水纸上轻拍酶标板。

    （7）每孔加100 μL底物，室温避光孵育15 min。

    （8）每孔加100 μL终止液，振荡混匀，酶标仪450 nm读取OD值。

    1.4 结果判定

    结果有效性确认：阴性对照（G12、H12）平均OD值/阳性对照（E12、F12）平均OD值≥4为有效，本试验检测的6个反应板结果均有效。

    PI值计算：PI=1-（OD450 nm样品值/OD450 nm阴性平均值）×100%

    结果判定：PI<40%，ASFV抗体阴性；PI≥40%，ASFV抗体阳性；PI在40%～50%之间为可疑，建议重新检测或以其他方法检测。

    2 结果与分析

    检测样品原始OD450 nm值见表1至表6。由表1～6可见，样品的ASFV抗体均为阴性。

    3 小结与讨论

    虽然我国目前没有ASF疫情，但从世界流行、传播、分布的态势来看，ASF 传入我国的风险性在不断加大。分析如下：一是引进种猪，这也是ASF传入的重大风险因素，病毒如果随着引种进入我国，一旦在猪群寄居，很快会在猪群蔓延、流行。二是中国同流行和散发非洲猪瘟各国频繁的经贸往来，将可能通过人员或产品将疫情带入。三是令人堪忧的养猪现状，国内很多猪场规模小，散养密度高，饲养管理不规范，环境卫生及生物安全不到位，这为非洲猪瘟的传播创造了良好的条件。第四，目前尚没有有效的疫苗和药物用于ASF 控制，惟一的控制方式是确保猪群健康，杜绝外来病发生。

    4 意义

    通过分析近年来ASF在世界范围内的流行趋势，该病从北方传入四川省的风险较大。因此，本实验室加强了对四川省北部、中部地区的监测。此项实验，一方面实时掌握四川省重点防范地区ASF的感染情况，防患于未然；另一方面，一旦四川省突发ASF，为“早、快、严、小”处置疫情提供科学依据和技术储备，尽可能减小ASF对四川省养猪业带来的危害。

    参考文献：

    [1] MURPHY F A，GIBBS E P J，HORZINEK M A，et al. Asfarviridae and Iridoviridae[A].MURPHY F A，GIBBS E P J， HORZINEK M A，et al. Veterinary virology[M]. 3rd. San Diego：Academic Press，1999.293-300.

    [2] 殷 震，刘景华.动物病毒学[M].第二版.北京：科学出版社，1997.1197-1205.

    [3] PENRIT H M L，THOMSON G R，BASTOS A S S. African swine fever[A].COETEZR J A W，TUSTIN R C. Infectious diseases of Livestock[M].Southern Africa：Oxford University Press，2005.1087-1119.

    [4] OIE. Terrestrial Animal Health Code. Chapter 2.6.6. African Swine Fever[EB/OL]. http：//www.oie.int/eng/normes/Mcode/ en_chapitre_2.6.6.htm，2007.

    [5] 邓 飞，李 丽.阻断ELISA法检测非洲猪瘟抗体[J].四川畜牧兽医，2016（6）：22-23.