四川省非洲猪瘟抗体检测结果与分析

    李丽+邓飞+裴超信+张睿+周莉媛+邵靓

    

    

    摘要:非洲猪瘟(African swine fever,ASF)已在全球多个国家发生和流行,是我国重点防范的外来动物疫病。加强监测对该病的防范有重要意义。采用美国Kernel公司的非洲猪瘟病毒抗体检测试剂盒对来源于四川省阿坝州、广元、巴中、达州、广安、成都、内江、资阳、遂宁和雅安等地的540份猪血清样品进行了检测,结果显示均为ASFV抗体阴性。

    关键词:四川省;非洲猪瘟;抗体检测

    中图分类号:S858.28 文献标识码:A 文章编号:1007-273X(2016)10-0010-03

    非洲猪瘟(African Swine Fever,ASF)又称为非洲猪瘟疫、疣猪病,是由双链DNA 病毒感染引起的猪的一种急性、高度传染性疾病[1]。其临床症状和病理变化与猪瘟相似,表现为发热、皮肤发绀和淋巴结、肾、胃肠黏膜充血、出血,急性型死亡率高达100%[2]。该病1921年首先发现于非洲东部国家肯尼亚,然后一直存在于撒哈拉以南的中、南部及西部的非洲国家[3],据OIE统计,截至2012年底,全球共有48个国家报道发生过非洲猪瘟疫情。由于该病危害严重,OIE将其列为A 类法定报告动物疫病[4],我国将其列为一类动物疫病。

    虽然目前我国尚无非洲猪瘟疫情,但由于该病具有高传染性及高死亡率且缺乏有效疫苗防治,随着经济全球化的发展,ASF对我国养猪业具有潜在的高风险性。加之近年来,该疫情在俄罗斯南部和北高加索地区继续扩散,我国与俄罗斯毗邻,因此跨境传播防控压力更为巨大。四川省自2015年积极开展实验室的血清学检测工作,加强对该病的持续监测,邓飞等曾对四川省北部及东北部的5个地级市猪血清进行抗体检测,结果均为阴性[5]。本试验持续监测上述5个地市的样品并新增成都等四川中部及东部的5个地级市猪血清监测。现将其报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 血清样品

    血清样本来源于四川省阿坝、广元、巴中、达州、广安的规模场及散养户90份以及成都、内江、资阳、遂宁、雅安的規模场、散养户及屠宰场450份,共计540份。

    1.2 检测试剂

    美国Kernel公司的非洲猪瘟病毒抗体检测试剂盒,批号:160118。

    1.3 检测方法

    (1)使用前所有试剂恢复至室温。

    (2)在ELISA反应板上每孔加50 μL稀释液,以50 μL/孔加入待检样品和阴阳性对照。阳性对照(E12、F12)和阴性对照(G12、H12)各设置两孔,检测样品设置一孔,每板检测样品90份。

    (3)封膜,振荡,37 ℃孵育60 min。

    (4)弃酶标板中的液体于装有NaOH的容器中,洗板机洗板4次,最后一次吸水纸上轻拍酶标板。

    (5)每孔加100 μL稀释好的酶标结合物,封膜,37 ℃孵育30 min。

    (6)洗板5次,最后一次吸水纸上轻拍酶标板。

    (7)每孔加100 μL底物,室温避光孵育15 min。

    (8)每孔加100 μL终止液,振荡混匀,酶标仪450 nm读取OD值。

    1.4 结果判定

    结果有效性确认:阴性对照(G12、H12)平均OD值/阳性对照(E12、F12)平均OD值≥4为有效,本试验检测的6个反应板结果均有效。

    PI值计算:PI=1-(OD450 nm样品值/OD450 nm阴性平均值)×100%

    结果判定:PI<40%,ASFV抗体阴性;PI≥40%,ASFV抗体阳性;PI在40%~50%之间为可疑,建议重新检测或以其他方法检测。

    2 结果与分析

    检测样品原始OD450 nm值见表1至表6。由表1~6可见,样品的ASFV抗体均为阴性。

    3 小结与讨论

    虽然我国目前没有ASF疫情,但从世界流行、传播、分布的态势来看,ASF 传入我国的风险性在不断加大。分析如下:一是引进种猪,这也是ASF传入的重大风险因素,病毒如果随着引种进入我国,一旦在猪群寄居,很快会在猪群蔓延、流行。二是中国同流行和散发非洲猪瘟各国频繁的经贸往来,将可能通过人员或产品将疫情带入。三是令人堪忧的养猪现状,国内很多猪场规模小,散养密度高,饲养管理不规范,环境卫生及生物安全不到位,这为非洲猪瘟的传播创造了良好的条件。第四,目前尚没有有效的疫苗和药物用于ASF 控制,惟一的控制方式是确保猪群健康,杜绝外来病发生。

    4 意义

    通过分析近年来ASF在世界范围内的流行趋势,该病从北方传入四川省的风险较大。因此,本实验室加强了对四川省北部、中部地区的监测。此项实验,一方面实时掌握四川省重点防范地区ASF的感染情况,防患于未然;另一方面,一旦四川省突发ASF,为“早、快、严、小”处置疫情提供科学依据和技术储备,尽可能减小ASF对四川省养猪业带来的危害。

    参考文献:

    [1] MURPHY F A,GIBBS E P J,HORZINEK M A,et al. Asfarviridae and Iridoviridae[A].MURPHY F A,GIBBS E P J, HORZINEK M A,et al. Veterinary virology[M]. 3rd. San Diego:Academic Press,1999.293-300.

    [2] 殷 震,刘景华.动物病毒学[M].第二版.北京:科学出版社,1997.1197-1205.

    [3] PENRIT H M L,THOMSON G R,BASTOS A S S. African swine fever[A].COETEZR J A W,TUSTIN R C. Infectious diseases of Livestock[M].Southern Africa:Oxford University Press,2005.1087-1119.

    [4] OIE. Terrestrial Animal Health Code. Chapter 2.6.6. African Swine Fever[EB/OL]. http://www.oie.int/eng/normes/Mcode/ en_chapitre_2.6.6.htm,2007.

    [5] 邓 飞,李 丽.阻断ELISA法检测非洲猪瘟抗体[J].四川畜牧兽医,2016(6):22-23.

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