猪瘟与猪圆环病毒混合感染的实验室诊断与防治
摘要：以某养殖场的发病情况为例，介绍了猪瘟与圆环病毒混合感染的诊断与防治过程，希望对广大养殖户有所帮助。
关键词：猪瘟;猪圆环病毒病;混合感染;实验室诊断;防治
中图分类号：S858.28? ? ? ? 文献标识码：B? ? ? ? 文章编号：1007-273X（2020）06-0025-02
临床中猪瘟与猪圆环病毒病是生猪养殖中最容易发生的2类病毒性传染病，其中猪圆环病毒病属于严重的免疫抑制疾病，该病会造成猪群严重的免疫抑制，导致疫苗免疫失败，引起其他病原的继发感染或并发感染。猪瘟是由猪瘟病毒感染引起的急性、热性、接触性传染病，该病具有极高的传染性与致死性，在自然条件下，不同年龄与品种的猪均可感染。
1? 发病经过
2018年11月上旬，某养殖户从外地购进了130头90日龄左右的断奶仔猪。在购进后没有进行严格的隔离观察就混群养殖。猪群进入养殖场的第3天陆续出现临床症状，主要表现为精神状态变差，采食量逐渐下降，体温升高，气喘，腹泻，发病3～5 d后，发病猪数量逐渐增加，并陆续出现死亡现象。据调查，引进的断奶仔猪在20日龄接种了3头份的猪瘟疫苗，30日龄接种了口蹄疫疫苗，此外没有接种其他疫苗。养殖场养殖密度较大，不同年龄的猪混群养殖，整体卫生环境较差，粪便清理不及时。
2? 临床症状
该养殖场发病十分突然，发病后大部分患猪表现为精神萎靡不振，被毛杂乱，患猪卧地不起，嗜睡，身体逐渐消瘦，饲料利用率逐渐下降，部分猪停止生长发育，体重显著下降，有的患猪体温升高至41 ℃，最高升至42 ℃，眼结膜潮红、充血，个别患猪的眼结膜呈苍白色或黄疸症状。患猪眼睛流出大量脓性分泌物，鼻液中夹杂很多血液，先便秘后腹泻，随后便秘与腹泻交替出现，粪便中夹杂很多黏液或血丝，部分患猪排出的尿液中夹杂大量血液，呈蛋白尿。大多数患猪表现出明显的气喘症状，随后身体逐渐衰弱，后肢交叉或并在一起支撑，不能正常站立。部分患猪后期肢体出现严重的麻痹现象，四肢运动不协调，关节严重肿大变形，全身体表组织发红，并出现出血性斑块，颈部、背部皮肤出血最明显。患猪的耳尖、四肢内侧、腹部等毛少区域的皮肤呈紫红色，体表淋巴结显著肿大，部分患猪出现磨牙的症状，后期皮肤轻度黄染、排出黄色或深红色的尿液，膀胱积尿严重，小便不能正常排出。眼球向内凹陷，短时间内衰竭而死。
3? 病理学变化
将病死猪解剖后，发现大部分病死猪都呈现败血症，病变皮肤组织黏膜与实质器官存在广泛性充血现象，在脏器表面有大小不等的出血点、出血斑块，甚至出现出血性的条纹。病死猪的全身淋巴结肿大、出血，特别是颈部淋巴结、肠系膜淋巴结、支气管淋巴结、腹股沟淋巴结最明显，将肿大的淋巴结横切后，切面质地变硬，呈苍白色[1]，在淋巴结的边缘存在大量梗死病灶。肾脏颜色呈苍白色，质地肿大，存在数量不等的出血点，脾脏边缘存在梗死病灶。病死猪的喉头黏膜、会厌软骨、膀胱黏膜、心外膜、肺脏与肠系膜存在大量出血性变化，膀胱黏膜表面存在不同程度的充血、出血现象，黏膜表面有针尖大小的出血点。肺脏淤血、肿大明显，并且存在散在硬块，有纤维素样渗出物流出，扁桃体出现梗死。肠道存在不同程度的充血、出血，其中回肠与结肠段的肠壁严重扩张变薄，盲肠与结肠黏膜充血、出血严重，盲肠淋巴滤泡呈现纽扣状溃疡[2]。
4? 实验室诊断
结合上述病理变化与临床表现，可以对病情做出初步诊断，怀疑为猪瘟与猪圆环病毒感染，要确诊还需要采集病料进行严格的实验室诊断。在无菌条件下，采集患猪的病变肺脏组织、淋巴结组织、肝脏组织充分研磨后，取上层清液进行猪瘟、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸疾病综合征病毒、猪伪狂犬病毒等的PCR检测。具体方法如下：采集病死猪的大脑皮层组织、淋巴结组织、扁桃体组织，放置在50%的甘油生理盐水中，8 ℃环境下保存。每份样品分别称量1 g粉碎后充分研磨，加入1.5 mL生理盐水，研磨均匀后放置在离心管中离心2 min，取上清液放置在灭菌离心管中，再加入消化液与蛋白酶K振荡混合均匀后放置在56 ℃的水中消化1 h。将样品从水浴锅中取出后等温度下降到室温状态，向其中加入DNA结合液，然后将液体全部转移到吸附柱中，室温环境静置30 min，离心30 s，舍去收集管液体，加入DNA洗涤液，再进行离心重复上述步骤。将收集管中的液体舍去后，空心柱离心1 min，舍去残余的DNA洗涤液，然后将吸附柱放置在新的离心管中，向其中加入DNA洗脱液，室温环境2 min后离心处理30 s获得模板DNA，然后放置在扩增仪上， 94 ℃ 30 s，65 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共35次循环，72 ℃延伸7 min，然后进行电泳试验。结果发现圆环病毒与猪瘟病毒均在目的条带上出现了一条与阳性对照基本一致的线，由此可以判定病料中存在猪瘟与猪圆环病毒，即可确诊。
5? 紧急处理
猪瘟属于国家一类重特大传染病，猪圆环病毒病属于国家二类传染病，上述2种疾病都没有特效药物，发病后应将确诊的患猪立即扑杀进行无害化处理，并及时清理被患猪污染的环境，清理圈舍中的粪便、垫料，进行严格的堆积发酵。定时对整个猪群进行全面的猪瘟与猪圆環病毒2型检测，检测出隐性带毒猪后立即作淘汰处理，并将检测为阴性的猪群作为假定健康猪立即进行猪瘟与猪圆环病毒疫苗的免疫接种，并做好抗体水平监测工作，对免疫方案作出适当的调整，保证猪群抗体水平达标。选用2%的氢氧化钠溶液，1次/d进行猪舍消毒。猪舍内部选用聚维碘酮溶液进行消毒。在整个紧急处理期间，还需要做好养殖场的封锁隔离工作，禁止养殖场的生猪调运行为，并做好受威胁区域内养殖场的流行病学调查与抗体水平监测[3]，对于抗体不达标的猪群立即进行紧急免疫接种，确保辖区范围内的生猪养殖场猪瘟、猪圆环病毒病抗体水平达标，避免猪群出现严重的免疫抑制。
6? 科学预防
日常养殖管理过程中，应该加强对猪群的科学管理，控制合理的养殖密度，避免不同年龄的猪混群养殖，按照季节变化控制好养殖密度，保持猪舍内外部的环境良好，减少应激刺激，降低圆环病毒感染的机会，构建完善的生物安全体系，将卫生消毒工作贯穿于生猪养殖的全过程，最大限度地降低养殖场内传染源的传播流行。根据流行病学调查结果对免疫方案做出适当调整，做到科学免疫。
7? 小结
为降低上述2种疾病的发生率，需要不断加强对2种病的流行病学调查，掌握疾病的具体临床表现与病理变化，进行严格的实验室诊断，在明确具体致病原的基础上，采取紧急措施进行防控，控制传染源的传播流行范围，保证生猪养殖安全。
参考文献：
[1] 陈德飞，成治州.猪瘟与圆环病毒混合感染的诊治[J].今日畜牧兽医，2008（10）：20，69.
[2] 孟纪萍，王建梅，武晓虎，等.猪圆环病毒2型和猪瘟病毒抗体检测与分析[J].中国动物检疫，2012，29（12）：39-40.
[3] 邢香元，王? 斌，崔? 岩.兔病毒性出血症灭活疫苗的制备、保存、使用方法及注意事项[J].邯郸农业高等专科学校学报，2003（3）：20-22.
收稿日期：2020-05-13
作者简介：李建莲（1981-），女，河南光山人，助理兽医师，主要从事动物疫病实验室检测工作。
