试管倒插法诊断家畜血吸虫病效果观察

    汪承相+张建华+李勇+柯栋栋+张琼+费世清+程刚+汪少华

    摘要：2006-2008年采用斑点金标免疫渗滤法（DIGFA）血检诊断阳新县牛（羊）血吸虫病，血检结果为阳性病牛（羊）再采用试管倒插法（顶管法）进行粪便孵化而确诊。结果表明，实行以上两种方法进行诊断，准确率极高。是控制血吸虫病流行、保护人民身体健康的最佳办法。

    关键词：血吸虫病；诊断；试管倒插法；阳新县

    中图分类号：S855.9+9 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2016）05-0005-02

    血吸虫病是我国南方地区流行最为严重的人畜共患寄生虫病。建国后，开始实施以控制传染源为主的综合防治方针。实行围垦灭螺，查治人畜疾病，研究多种传染源的诊断方法。传统的血吸虫病检查方法主要为粪检，其粪便样量是每头牛50～100 g，山羊10～15 g。实行一粪一检，工作量大且效果不佳。笔者从2006年开始在阳新县采用斑点金标免疫渗滤法（DIGFA）诊断牛（羊）血吸虫病，先用血检筛选出结果为阳性病牛（羊），再用粪便孵化（顶管法）进一步确诊。几年来，通过采取一系列综合防治措施，使阳新县家畜血吸虫病感染率逐年下降。耕牛感染率由2006年的6.58%下降到2008年的1.66%，下降4.92个百分点。山羊感染率由6.67%下降到2008年的0.67%，下降了6.0个百分点。从而使牛（羊）血吸虫病的感染强度逐年减弱（水牛更为明显）。实践证明，每年实行春查、春治、秋查、秋治。一粪三检，采用上述两种检查方法，可收到较好的效果。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    （1）粪缸（试管盖），试管，20～40目粪筛，橡皮筋，记号笔，竹筷，剪刀，医用纱布，脱脂棉，直径50 cm筛箕（过滤井水、河水），30%氯漂白粉50 g，水温计2支，10 cm×20 cm涂有墨汁的黑色纸板5块，塑料缸2口，食盐1 000 g。

    （2）待检牛（羊）粪样，牛200～300 g，山羊45～80 g。家畜血吸虫病粪样送检登记卡。

    1.2 方法

    （1）洗粪水。洗粪水在孵化前1 d准备充足，河水、井水先用备好的两层纱布中间夹一层脱脂棉，放在筛萁上将水过滤于塑料缸中，并在水中加入30%氯漂白粉，比例按每50 kg加0.39 g；如用自来水，应将水存放于容器中20 h，使氯元素逸出后备用。

    （2）编号。粪缸用记号笔编号。被检牛（羊）粪样依次放在预先排列好的粪缸旁，一粪三检，做好登记。粪筛、筷子放入粪缸中，加入洗粪水约650 mL。

    （3）洗粪。三人一组，检查人员将粪样按量挑入粪筛中搅动淘洗（注：牛粪>80 g，羊粪>15 g），淘洗到可以看到粪样中的粗纤维为止。

    （4）沉淀换水。第一次为30 min；第二次为20 min，第三次10 min。从第一次起，每次待粪渣下沉后，倒出上层粪汁1/3；第二次为上层粪水一半。

    （5）孵化。第二次换水后加入孵化水。孵化水用家庭饮用纯净水。将纯净水加满粪缸后沉淀10 min，盖上盖。盖上前每支试管在离试管口4～6 cm处套上橡皮筋以作固定。防止因粪缸盖中央圆孔与试管不合而滑落粪缸中。将纯净水加入试管中，用右手食指和中指夹住试管，大拇指堵住试管口，成为密封状态，使试管为倒立状态，将带有试管盖的试管放入粪缸中，并轻轻移开大拇指，使粪缸中粪水顶托住试管中的纯净孵化水。这样试管虽然是倒立于粪缸中，但试管水仍是清亮的。然后将已合好盖子的粪缸移到平面台子上（如木桌子、铺板、乒乓球台）进行孵化观察。

    （6）观察毛蚴。粪缸已沉淀虫卵孵化1～3 h后，在孵化水温适宜时，毛蚴开始从卵中逸出。毛蚴有较强的向光性，均向试管清水中集中做左右上下直线运动。观察时需将涂有墨汁的黑色纸板置于试管前方，成为黑色背景有助于观察。毛蚴呈梭形，灰白色，即便是一个毛蚴在试管中运动也易于发现。

    2 注意事项

    （1）用粪量要足。用一粪三检，每个粪样牛不得少于300 g，羊不得少于45 g。应收集新鲜粪便。

    （2）洗粪尽量将虫卵洗入粪缸中，羊粪洗粪时用镊子夹碎，倒水应轻倒上部粪汁，以免将虫卵倒掉，且只能倒掉1/3粪水。

    （3）做到一粪缸一粪筛-双筷子，切不可交叉使用。

    （4）孵化诊断结束后粪缸、粪筛、筷子应消毒清洗后再用。

    （5）观察毛蚴时应分组按洗粪换水先后顺序观察。观察时间为加盖后1、2、3 h，每一试管观察时间不少于2 min。且眼睛不要移动。

    （6）孵化台应设在光线充足的地方。

    （7）夏季水温高于15 ℃时，为延缓毛蚴过早逸出，孵化水应加入1.0%～1.2%盐水。

    （8）个别兽医由于责任心不强，将一牛粪便分成多样送检，采血时，将一牛血液分成多份血样送检或采集陈旧粪样，直接影响诊断结果。应加以重视。

    3 结果与分析

    由表1、表2可见，2006-2008年共血检耕牛 28 151头，山羊8 686只。粪检耕牛7 744头、山羊 2 038只，耕牛感染率下降了4.92个百分点，山羊感染率下降了6.0个百分点。

    4 讨论

    诊断家畜血吸虫病的方法很多，实践中大范围内普查诊断可采用斑点金标免疫渗滤法（DIGFA），该方法省时、省工、易操作，可作为血检的首选。但血检也有其不足之处。一是评判失误（误判），出现假阳性。二是因疫区家畜接触疫水而重复感染，重复治疗。牛（羊）体内已没有成虫（但体内有抗体），血检时仍呈阳性反应，因而粪检是最准确的诊断手段。经多次血检呈阳性反应而粪检为阴性的家畜，笔者没有统计。病畜体内产生了抗体，粪检为阴性的家畜，在后续不感染的情况下，其体内抗体衰减规律有待研究。阳新县血吸虫病经过多年的查治，其感染强度逐年减弱。检查过程中要注意，粪便孵化中，粪样量应相对增加。每头牛粪样量应采集200～300 g，山羊45～80 g，一粪三检，一年两次（春、秋），可提高检出率。此外，由于粪样虫卵少，孵化后试管中毛蚴只有1～3只，因此化验人员要有过硬的技术和高度的责任心，仔细观察。血吸虫病防治是以政府主导、多部门协作，多手段并用的一项系统工程，按照我国血吸虫病控制和阻断标准，只有人畜同步防治，认真落实国务院各项防治措施，保证各项防治经费落实到位，才能最终消灭血吸虫病。