超高效液相色谱质谱联用法测定蔬菜中多杀霉素等4种农药残留研究
新的时代中，多种因素对植物产生了重要的影响，主要包括气候、种植制度和生态环境等，植物的病虫害发生的次数不断增多，其危害的程度不断加深，对于农业生产安全构成了严重的威胁。尤其是，在设施农业不断发展的过程中，很多的新型的設施病虫害不断发生。目前，对于人们来说，食品安全是非常重要的一个问题，高效低毒低残留农药的推广必定成为新的趋势。
实验部分
试剂与材料。标准品：多杀霉素、氟硅唑、茚虫威（纯度>99.0%）。
试剂：氯化钠，甲醇、乙腈、甲酸，Milli-Q高纯水，十八烷基键合硅胶吸附剂，N-丙基乙二胺吸附剂，石墨化炭黑吸附剂，无水硫酸镁，石墨碳黑-氨基串联固相萃取柱，氨基固相萃取柱，十八烷基键合硅胶固相萃取柱，弗罗里硅土固相萃取柱。
仪器。Agilent1290 UPLC-Agilent 6460 MS超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱联用仪：配ESI源；T25DS25高速匀浆分散器；GB11240-89电热恒温水浴锅；AC-40氮吹浓缩器；国华SHAC恒温振荡器；TDL-5-A离心机；Milli-Q制水机。
样品前处理。对样品进行定量选取，所选取的样品的数量不能少于1000g，完成其中的杂质的去除工作，从中选取能够食用的部分，将样品进行相应的浓缩，使其浓缩至500g，经制样机处理之后密封，使其在4℃冷藏保存。
（1）样品提取。蔬菜样品：对样品进行称取，基本的重量是10g，将其加入到100mL的离心管中，并且将20mL 的乙腈加入其中，高速匀浆1min，以5000r/min离心5min，上清液转移至加入3-5g NaCl的50mL离心管中，剧烈振摇1分钟，室温下静置1小时。
（2）样品净化。空心菜、芹菜、豇豆、黄瓜样品：移取上清液5mL到50mL小烧杯中，在50℃水浴温度下氮吹至大约1mL。在进行上样之前，首先需要用5mL乙腈-甲苯预淋PC/NH2串联柱，弃去；当液面到达填料顶部的时候，需要在最短的时间中将样品浓缩液转移到净化柱上，然后再用5mL乙腈-甲苯洗涤样液烧杯，同时，将洗涤液转移到净化柱中，重复4次洗涤转移，收集上述25mL洗脱液于100mL烧杯中，50℃水浴温度下氮吹至干。加入2.5mL乙腈混匀定容，经0.22?g微孔有机滤膜过滤后，供超高效液相色谱=质谱测定。
结果与讨论
净化条件的优化。蔬菜样品基质中含有较多的有机酸、维生素以及脂肪等，这些物质带来的基质效应将会严重影响检测结果的准确性。为降低或消除基质效应，选择合适的样品前处理方法至关重要。本研究对固相萃取（SPE） 与基质固相分散萃取法两种净化技术进行了比较。
采用 SPE 柱进行净化时，选择了 NH2，Florisil，C18，PC /NH2 4 种固相萃柱，并选择不同的淋洗液进行洗脱。NH2- SPE： 二氯甲烷 + 甲醇（ 95 + 5 ） 4 mL 预淋，10 mL 洗脱； Florisil-SPE： 丙酮 + 正己烷（ 10 + 90） 4 mL淋，10 mL 洗脱； C18- SPE： 乙腈 + 甲苯（ 3 + 1） 5 mL 预淋，10 mL 洗脱； PC /NH2- SPE： 乙腈 + 甲苯（ 3 + 1） 5 mL预淋，10 mL 洗脱，收集第 1 瓶（ 墨化碳易吸附农药，所以洗脱液又增加 15 mL，收集第 2 瓶） ； 分别收集洗脱液，吹干，定容，待测。
采用基质固相分散萃取（ 类似 Qu ECh ERS） 净化法时，选择 3 种不同的净化填料进行筛选： Qu E1（ 0.1g PSA-0. 3 g MgSO4） ； Qu E2（ 0.1g PSA-0.3g MgSO4-0.05 g Carb） ； Qu E3（ 0.3g MgSO4-0.1g C18- 0.1g PSA） 。
其他步骤参照文献。
以基质较复杂、色素较深的空心菜为例，添加 100μg /kg 的混标至空心菜空白样品中，重复测定 3次，以纯标计算得到的回收率结果。
通过以上方法的比较，并综合去除色素效果和回收率结果，发现淋洗液 10+15 mL既能保证方法回收率，又能除去色素等杂质，有利于保护色谱柱、离子源等，延长色谱柱、仪器的寿命。超高效液相色谱-质谱联用法测定蔬菜中多杀霉素等 4 种农药残留，根据上述试验，发现淋洗液用乙腈-甲苯混合溶剂，空心菜样品中 5 种化合物的回收率和杂质的去除效果最佳。
对此种方法进行有效的应用。对市售多种蔬菜共100个样品进行随机抽检。在空心菜、芹菜等12个样品中检出茚虫威，茼蒿、苋菜和芹菜三个样品中检出噻虫嗪，苋菜等2个样品中检出氟硅唑。对国标等对噻虫嗪等4种农药在相应蔬菜上最大的残留限量值进行查询和参照，在本次抽检的100个蔬菜样品中，有2个苋菜样品超标，需要对其进行严格、谨慎的应用。
作者简介：
邹敏（1983-），女，江西南昌人，江西省食品检验检测研究院工程师，主要从事食品检验检测技术工作。
实验部分
试剂与材料。标准品：多杀霉素、氟硅唑、茚虫威（纯度>99.0%）。
试剂：氯化钠，甲醇、乙腈、甲酸，Milli-Q高纯水，十八烷基键合硅胶吸附剂，N-丙基乙二胺吸附剂，石墨化炭黑吸附剂，无水硫酸镁，石墨碳黑-氨基串联固相萃取柱，氨基固相萃取柱，十八烷基键合硅胶固相萃取柱，弗罗里硅土固相萃取柱。
仪器。Agilent1290 UPLC-Agilent 6460 MS超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱联用仪：配ESI源；T25DS25高速匀浆分散器；GB11240-89电热恒温水浴锅；AC-40氮吹浓缩器；国华SHAC恒温振荡器；TDL-5-A离心机；Milli-Q制水机。
样品前处理。对样品进行定量选取，所选取的样品的数量不能少于1000g，完成其中的杂质的去除工作，从中选取能够食用的部分，将样品进行相应的浓缩，使其浓缩至500g，经制样机处理之后密封，使其在4℃冷藏保存。
（1）样品提取。蔬菜样品：对样品进行称取，基本的重量是10g，将其加入到100mL的离心管中，并且将20mL 的乙腈加入其中，高速匀浆1min，以5000r/min离心5min，上清液转移至加入3-5g NaCl的50mL离心管中，剧烈振摇1分钟，室温下静置1小时。
（2）样品净化。空心菜、芹菜、豇豆、黄瓜样品：移取上清液5mL到50mL小烧杯中，在50℃水浴温度下氮吹至大约1mL。在进行上样之前，首先需要用5mL乙腈-甲苯预淋PC/NH2串联柱，弃去；当液面到达填料顶部的时候，需要在最短的时间中将样品浓缩液转移到净化柱上，然后再用5mL乙腈-甲苯洗涤样液烧杯，同时，将洗涤液转移到净化柱中，重复4次洗涤转移，收集上述25mL洗脱液于100mL烧杯中，50℃水浴温度下氮吹至干。加入2.5mL乙腈混匀定容，经0.22?g微孔有机滤膜过滤后，供超高效液相色谱=质谱测定。
结果与讨论
净化条件的优化。蔬菜样品基质中含有较多的有机酸、维生素以及脂肪等，这些物质带来的基质效应将会严重影响检测结果的准确性。为降低或消除基质效应，选择合适的样品前处理方法至关重要。本研究对固相萃取（SPE） 与基质固相分散萃取法两种净化技术进行了比较。
采用 SPE 柱进行净化时，选择了 NH2，Florisil，C18，PC /NH2 4 种固相萃柱，并选择不同的淋洗液进行洗脱。NH2- SPE： 二氯甲烷 + 甲醇（ 95 + 5 ） 4 mL 预淋，10 mL 洗脱； Florisil-SPE： 丙酮 + 正己烷（ 10 + 90） 4 mL淋，10 mL 洗脱； C18- SPE： 乙腈 + 甲苯（ 3 + 1） 5 mL 预淋，10 mL 洗脱； PC /NH2- SPE： 乙腈 + 甲苯（ 3 + 1） 5 mL预淋，10 mL 洗脱，收集第 1 瓶（ 墨化碳易吸附农药，所以洗脱液又增加 15 mL，收集第 2 瓶） ； 分别收集洗脱液，吹干，定容，待测。
采用基质固相分散萃取（ 类似 Qu ECh ERS） 净化法时，选择 3 种不同的净化填料进行筛选： Qu E1（ 0.1g PSA-0. 3 g MgSO4） ； Qu E2（ 0.1g PSA-0.3g MgSO4-0.05 g Carb） ； Qu E3（ 0.3g MgSO4-0.1g C18- 0.1g PSA） 。
其他步骤参照文献。
以基质较复杂、色素较深的空心菜为例，添加 100μg /kg 的混标至空心菜空白样品中，重复测定 3次，以纯标计算得到的回收率结果。
通过以上方法的比较，并综合去除色素效果和回收率结果，发现淋洗液 10+15 mL既能保证方法回收率，又能除去色素等杂质，有利于保护色谱柱、离子源等，延长色谱柱、仪器的寿命。超高效液相色谱-质谱联用法测定蔬菜中多杀霉素等 4 种农药残留，根据上述试验，发现淋洗液用乙腈-甲苯混合溶剂，空心菜样品中 5 种化合物的回收率和杂质的去除效果最佳。
对此种方法进行有效的应用。对市售多种蔬菜共100个样品进行随机抽检。在空心菜、芹菜等12个样品中检出茚虫威，茼蒿、苋菜和芹菜三个样品中检出噻虫嗪，苋菜等2个样品中检出氟硅唑。对国标等对噻虫嗪等4种农药在相应蔬菜上最大的残留限量值进行查询和参照，在本次抽检的100个蔬菜样品中，有2个苋菜样品超标，需要对其进行严格、谨慎的应用。
作者简介：
邹敏（1983-），女，江西南昌人，江西省食品检验检测研究院工程师，主要从事食品检验检测技术工作。
