一例犬细小病毒病的诊治报告

    甘亚宗

    摘要:对一例犬细小病毒病从临床症状、实验室诊断以及防治措施等方面进行了介绍。

    关键词:犬细小病毒病;诊断;防治

    中图分类号:S858.292 文献标识码:B 文章编号:1007-273X(2016)05-0019-01

    犬细小病毒病是犬的一种具有高度接触性传染的烈性传染病,临床上以急性出血性肠炎和心肌炎为特征。该病一年四季皆可发生,以发病急、病程短、传染性强、死亡率高为其特点,是危害我国养犬业最为严重的传染病之一[1]。

    1 发病过程及临床症状

    2015年12月,一只3月龄幼犬出现呕吐、腹泻、精神萎靡,粪便有明显血腥味,初步诊断为犬细小病毒病,对病犬进行隔离,进一步采用实验室检查确诊。

    2 实验室检查

    (1)材料:病犬粪便。

    (2)主要仪器及试剂:PCR仪、凝胶成像分析仪、电泳仪等;SDS、蛋白酶K、苯酚、氯仿、无水乙醇、dNTPs、TaqDNA聚合酶(购自TaKaRa公司)。

    (3)方法[2]。①CPV引物:上游引物,5′- GTACATTTAAATATGCCAGA -3′;下游引物,5′- ATTAATGTTCTATCCCATTG -3′。②病毒总DNA 的抽提:取1 g粪便,加入1 mL PBS液溶解,静置10 min,12 000 r/min 离心10 min;取上清液500 μL,加入50 μL 的SDS(10%),20 μL蛋白酶K(20 mg/mL),混匀,50 ℃水浴2 h,每20 min 摇匀一次。加入500 μL苯酚混匀,静置10 min,12 000 r/min离心10 min;取上清,加入等体积苯酚∶氯仿(1∶1),冰浴5 min,4 ℃ 12 000 r/min 离心5 min;取等体积氯仿冰浴5 min,4 ℃ 12 000 r/min离心5 min;取上清加入2.0~2.5 倍的无水乙醇及1/10体积的3 mol/L 的NaAc 混匀,置-20 ℃ 30 min或过夜,同上离心15 min;弃上清,加1 000 μL 75%乙醇,洗涤1 次。晾干EP 管中的DNA,加入30 μL的双蒸水溶解,-20 ℃保存备用。③PCR 反应体系与条件。PCR 反应体系:10×PCR Buffer 2.5 μL,dNTPs (2.5 mmol/L)2.0 μL,MgCl2 (25 mmol/L)1.0 μL,上下游引物(25 pmol/L)各0.5 μL,DNA 模板5.0 μL,TaqDNA聚合酶(5 U/μL)0.2 μL,加H2O 至25 μL。PCR 反应程序为:95 ℃预变性5 min;95 ℃变性30 s,45 ℃退火30 s,72℃延伸30 s,共35 个循环;末次72 ℃再延伸10 min。反应结束后取7 μLPCR产物在1%的琼脂糖凝胶上电泳,在凝胶成像系统上观察。

    (4)结果判定。采用PCR技术进行检测,结果见图1。利用犬二联弱毒苗作为阳性对照,结果显示阳性对照(标记1)与所检病料(标记3)均扩增出470 bp条带,与预期的目的条带大小一致,阴性对照(标记2)无任何条带(图1)。

    3 治疗

    (1)特异抗体治疗:给病犬注射抗犬细小病毒高免血清。

    (2)对症支持治疗:0.9%氯化钠+VC注射液+VB6注射液+地塞米松注射液(剂量参照说明书)静脉注射,另5%糖盐水+氯化钾注射液+头孢(剂量参照说明书)静脉注射。

    (3)辅助治疗措施:给病犬注射干扰素和黄芪多糖。

    经过3 d的治疗,病犬由每天大便4次减少为2次,粪便也逐渐成型。

    4 讨论

    犬细小病毒病在临床多发,一般情况下,犬细小病毒病的治疗周期为5~7 d,个别犬治疗3 d其临床症状基本稳定,也有个别病例需要更长时间,在刚开始治疗的过程中,部分犬临床症状会逐渐明显,此时一定要坚持用药,同时也要结合临床化验检查结果判定有无其他异常,如继发感染其他寄生虫病、病毒病、肠套叠等疾病。

    犬细小病毒病的治疗原则主要是对症支持治疗,加上抗犬细小病毒血清或单克隆抗体等,再配合使用其他药物,如黄芪多糖、干扰素等广谱抗病毒和提高机体抵抗力的药物来提高治愈率。

    在治疗的过程中,早期呕吐频繁,一般建议要禁食禁水,因为犬细小病毒对肠腺隐窝的侵害可引起肠绒毛萎缩,造成胃肠黏膜脱落,此时进食进水会使动物呕吐加重,造成体液丢失和电解质紊乱;同时也会刺激肠胃蠕动、产生胃酸,造成新的损伤;犬患细小病毒病时,剧烈的呕吐腹泻会造成大量体液丢失、电解质紊乱和酸碱平衡失调,治疗时纠正酸碱平衡、补充电解质和体液会对该病的治疗效果产生较大的影响。

    参考文献:

    [1] 郭 伟,商晓桂,单同领,等.犬细小病毒上海分离株全基因的克隆及进化树分析[J].中国动物传染病学报,2009,17(3):27-32.

    [2] 刘雪燕,黄 韧,刘忠华,等.猫肾F81传代细胞中犬细小病毒原位PCR检测方法[J].中国实验动物学报,2001,9(3):146-149.

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