龟甲中多肽的分析方法研究
【摘 要】 本文采用液相色谱质谱联用分析龟甲活性组分中的多肽,通过MOSCOT分析检索鉴定出3个肽类化合物的氨基酸序列。
【关键词】 龟甲 多肽 分析
1仪器材料
质谱(TripleTOF 5600,AB SCIEX),离子源(NanosprayⅢ source,AB SCIEX),液相系统(nanoACQuity,Waters),BEH130 C18柱(1.7μm, 100um×100mm,安捷伦),Symmetry C18柱(5μm, 180um×20mm,安捷伦),质谱乙腈,质谱甲醇。
2液相色谱质谱联用分析活性组分中的多肽
流动相A液(水:乙腈:甲酸 = 98:2:0.1)和B液(水:乙腈:甲酸 = 2:98:0.1)。每次上样量为2.25 ?g,A液以2 μL/min的流速洗脱15 min,进行肽段吸附和除盐。接下来含5% B液的流动相以300 nl/min流速洗脱1 min,洗脱梯度:40 min内B液梯度线型从5%升至35%,5 min从35%升至80%,然后80%持续洗脱5min,最后2min恢复柱料。数据采集时,机器的参数设置如下:离子源喷雾电压2.5 kv,氮气压力为30 psi,喷雾气压15 psi,喷雾接口处温度150℃;反射扫描模式;第二个四极杆(Q2)传输窗口设置为100Da为100%;检测器的检测频率为40 GHz;离子碎裂的能量设置为35±5 eV。
3數据库检索和多肽鉴定
采用MASCOT进行分析,检索NCBI-Chelonia蛋白库,设置非特异性酶切,最低多肽长度为5个氨基酸,母离子的质量偏差设置为50 ppm,碎片离子的质量偏差设置为0.2 Da。单个多肽的置信度大于95%为可信的鉴定。
4实验结果
采用液质联用技术对龟甲活性组分中的多肽进行分析鉴定,鉴定了3个肽类化合物的氨基酸序列,分别为GGYEIGYD(437.1833m/z)、GLPGPIGPA(397.7222m/z)、GPAGPRGPAGP(466.7545m/z)。
【参考文献】
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[3] 黄静芳,郑秋凌,李起竖,李博.脾氨肽口服冻干粉中活性多肽的分离及鉴定[J].中南药学,2019,17(05)
作者简介:郭有爱(1964年-),女,汉族,随州,工程师,大学本科,长江职业学院。