分析HPLC—MS/MS法快速检测中成药及保健食品中6种减肥类非法添加化学成分

目的：通过HPLC-MS/MS法快速检测中成药及保健食品中6种减肥类非法添加化学成分。方法：将药品与甲醇混合制备成混合標准溶液与供试品，在工作条件下采用ESI电离源和MRM扫描方式进行测定分析。结果：HPLC-MS/MS法可准确检测中成药及保健食品中6种减肥类非法添加化学成分，检测限为（0.1-1.0）ng。结论：HPLC-MS/MS法灵敏度高、操作简便、快速，具有良好的适用性和有效性。
近年来，在具有减肥功效的中成药物和保健品中发现非法添加化学成分的报道屡见不鲜。常见的添加成分有盐酸西布曲明、盐酸麻黄碱、盐酸芬氟拉明、呋塞米、酚酞、咖啡因。这些药物长期服用会对消费者的健康和生命造成威胁。因此，探索科学合理的检测方法是十分必要的。本文建立HPLC-MS/MS法对中成药及保健食品中这6种减肥类非法添加化学成分，取得良好的成果，现报道如下。
仪器与方法
仪器与试药。研究采用的仪器包括美国Aglient 1200-G6410B三重四极杆液质联用仪与ESI电离源。采用的药品均购自中国药品生物制品检定所，包括盐酸西布曲明、盐酸麻黄碱、盐酸芬氟拉明、呋塞米、酚酞、咖啡因。研究中所用水为超纯水、流动相中所用甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯。雾化气和干燥气为高纯氮气。流动相分别为甲酸钠-甲醇、甲酸-甲醇、甲酸-乙腈溶液、乙酸钠-甲醇、甲酸铵-乙腈溶液、乙酸钠-乙腈溶液、乙酸-甲醇、乙酸-乙腈。其中铵溶液浓度为（5-20）mmol/L，酸溶液浓度为（0.1-0.5）%。
方法。（1）工作条件：研究对呋塞米采取负离子模式监测，对其余5种对照药品均采用正离子模式监测，色谱柱温为30℃、进样量为10uL、流速为0.5ml/min、毛细管电压为4.0kV、雾化气压力为20psi、干燥气温为350℃、干燥气流量为12L/min。采取最高相对离子丰度的子离子作为检测离子，采取MRM（多反应监测）模式，范围为50-400。（2）制备实验溶液。①混合标准溶液，将6种对照药品分别取适量，与甲醇溶液进行溶解和稀释，制成10ug/ml的混合溶液。②供试品溶液：片剂、丸剂。细致研磨粉碎，取一次服用量。胶囊剂。去其内容物，研细，称取1次口服剂量。口服液。量取1次口服剂量。软胶囊。称取软胶囊总重，采用注射器抽出内容为置于50ml量瓶。将药品加入30ml甲醇涡旋处理10min，超声提取10min，冷却，以甲醇定容至刻度后摇匀，再将其以0.22um有机滤膜过滤，待用。
测定。取供试品，对照品溶液，以1.2.1所述工作条件进行测定分析，确保色谱峰的保留时间、特征碎片离子与混合对照品一致，对供试品溶液进行过多次反映离子监测扫描。计算对照品和样品的相对离子丰度比（在允许偏差范围内），则可判定供试品中是否含有非法添加化学成分。
结果分析
相对离子丰度最大容许误差。相对离子丰度≤10%，最大允许偏差为（±50）%。 相对离子丰度>（10-20）%，最大允许偏差为（±30）%。 相对离子丰度>（20-50）%，最大允许偏差为（±25）%。 相对离子丰度>50%，最大允许偏差为（±20）%。
对照片、样品离子流图。笔者对市面上流通的42批减肥类中成药及保健食品进行，其中有11批检出非法添加化学成分，添加种类多为咖啡因、酚酞、盐酸西布曲明，对照品离子流图如图1、样品离子流图如图2。
检测限。研究采取甲醇溶液将对照品进行逐步稀释，以工作条件进行测定，当S：N（信噪比）为3：1时，化学成分检出限均<1.5ng。
讨论
中成药及保健食品市场产品质量参差不齐，监督难度较大，不法分子受利益驱使添加化学成分。这些成分主要通过刺激肠壁、降低食欲、兴奋中枢神经、刺激新陈代谢的途径达到快速减肥的目的，长期服用会对消费者的生命健康造成极大的威胁。
现行的检测体系（多为多个流动相体系检测法）存在诸多缺陷，方法繁琐、分离度差、耗时长。研究构建的HPLC-MS/MS法的原理为计算定性离子与定量离子丰度比，进而来确认样品的阳性结果。采取HPLC-MS/MS法能够有效的避免日常检验中出现假阳性的判定结果，节省了检验时间，提高了检验的精准度。笔者首先尝试将流动相比例进行调整，结果发现对1ml/L的甲酸-甲醇溶液进行梯度洗脱能够在较短时间内分离，提高分离度（≥1.5）。这一比率能够明显改善其他体系运行过程中出现的管道易堵塞、基线噪音较大、柱压较高、峰重叠等问题。其次，考虑到现行文献中对LC-MS/MS法的测定标准中未讨论到相对丰度比。笔者对HPLC-MS/MS法补充如下，对于同等实验条件下，样品液与标准液中待测物质的色谱峰相对保留时间≤2.5%，扣除背景色谱，目标物离子与对照品的相对离子丰度在表1的误差允许范围内（对均出线），则可判定样品中存在目标物品。