组织固定处理与包埋常见问题对策

    张换平

    【摘要】病理学组织检查作为疾病诊断的重要方法，同时也是制定手术方案的重要依据。石蜡切片属于使用较为广泛的组织学常规制片技术，整个制作过程包括了取材、固定、脱水等多个步骤，每一个步骤的操作均会影响到最终结果。本文主要探讨组织固定处理与包埋常见问题，全文从组织固定、组织包埋、包埋和标本定位等方面进行分析。

    【关键词】组织固定处理;包埋;常见问题;对策研究

    【中图分类号】R36 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095.6681.2019.28..02

    石蜡切片作为使用较为频繁的病理诊断技术，组织固定是组织脱水、透明、浸蜡等相关处理的前提，也是较为关键的一个步骤，与此同时，包埋操作的规范化与否会影响到组织切片质量。基于此，本文通过对组织固定处理与包埋常见问题以及对策分析，便于保证石蜡切片质量以及病理诊断结果，保证病理诊断质量，从而为临床诊治提供依据，相关内容分析如下。

    1 组织固定问题

    组织固定是为了较好的保存组织，实际组织标本固定期间，获取的标本需要最大程度保证其原有形态，比如条索状标本、大块标本等，组织固定期间避免造成原有组织出现扭曲。

    标本固定过程中使用最多的是10%中性缓冲福尔马林，这与10%中性缓冲福尔马林的使用特点有着密切关系，如10%中性缓冲福尔马林具有穿透速度快、组织硬化程度小等优势，这些都保证了不同标本有良好的固定效果。临床研究显示，病理组织通过10%中性缓冲福尔马林固定，病理组织能够保存较长时间，比如：病理组织的细胞核、细胞质均保存良好[1]，多数也可进行免疫组化染色。

    组织固定过程中，部分人员在使用自动化仪器设备过程中，参数设置不合理，影响到标本在固定液中的停留时间，影响到组织标本实际固定效果。部分标本选择戊二醛、Helly等作为固定液，上述标本在固定液中停留时间过长会引起固定过度，影响到标本固定效果。

    2 组织包埋问题

    组织处理涉及到脱水、透明以及浸透操作，有效的组织脱水能够避免脱水不彻底以及透明不够问题，为不同组织切片提供良好条件。

    当前组织处理常用方法包括开放式与密闭式，由于开放式处理期间需要将标本从一个液体槽转移到另一个液体槽，整个操作存在安全风险，密闭式管理则能够避免上述问题，提高组织处理的安全性，避免人为操作以及环境对其影响。当然密闭式处理方法也存在不足，比如部分仪器设备无法使用部分液体，此外，活检小标本处理期间很容易造成富含脂肪组织、手术标本、活检小标本出现混合，影响到处理效果。

    组织处理期间需要保持环境的清洁，固定液需要及时更换，确保工作液面的可靠性，有标本的包埋盒应集中管理，便于控制整体标本处理质量;浸透石蜡温度需要超过石蜡熔点2～4℃，做好温度的测量与记录，避免温度过高或过低影响到组织处理效果，不利于后期切片。

    病理组织包埋期间，针对脱水不彻底问题，在使用乙醇作为脱水剂期间，如果时间允许，可选择低浓度乙醇进行多次处理，避免组织脱水过度问题;如果时间不允许，可使用95%乙醇，然后使用无水乙醇脱水，当前使用乙醇脱水方面，乙醇初期浓度控制在60%～65%，之后95%乙醇换2次，无水乙醇换2次。组织脱水期间应避免使用高浓度乙醇处理，同时应严格控制标本停留时间，避免组织出现扭曲以及硬度过大问题，不利于切片操作[2]。

    針对透明切片着色均匀度较差问题，考虑有水分混入浸透蜡液中，在乳头状瘤、胃、皮肤等小标本处理期间，需要注意上述问题，此时可合理选择透明剂，比如将二甲苯更换为甲苯。

    3 包埋和标本定位问题

    包埋的期间需要采取有效的质控措施，如坚持包埋蜡块总数、包埋盒内组织的每天记录与核对，染色结束后核对蜡块数、切片数，检查不同切片、蜡块以及患者纪录是否一致，避免切片与标本来源的不一致，重视包埋期间的各项检查。

    组织包埋期间很容易出现切片组织损坏问题，比如组织排列方向不合理、组织摆放不合理等，对此，应重视组织定位以及方向包埋管理，如对较大而平的组织，包埋定位期间需要保证最大最平组织面朝下同时进入到包埋模内;可用模式对特殊组织面进行标识，提高包埋定期的准确性，提高标本包埋操作的合理性。

    包埋期间需要根据合适的不锈钢模型，包埋盒内组织在取出时，需要使用干净的热镊子，所有组织均需要放置到模型底部，确保组织和蜡液的充分融合，组织标本在有序排列后需要将模型移动到冷台，观察并在组织埋平后及时盖上包埋盒，并注入蜡液，大约等待10～15 s，再次补充少量蜡液，提高整个包埋盒固定质量，消除后续切片中因固定问题引起的震颤。包埋组织使用塑料包埋盒时，需要根据情况实施二次加蜡，提高整个包埋处理稳固性，消除切片期间因为固定不可靠引起的蜡块脱落问题;二次加蜡需要控制用量，避免过多蜡液影响切片质量[3]。

    4 小 结

    石蜡组织固定以及切片过程中会受到较多因素影响，实际处理期间需要重视组织固定处理以包埋中存在的问题，并及时采取因对措施，提高不同组织病理学检查与操作的规范性，提高切片质量，便于对不同病理组织作出有效诊断。

    参考文献

    [1] 严晓丽，杜梦楠，郑纪宁.石蜡包埋组织在分子生物学实验中的研究进展[J].中国老年学杂志，2018，38（22）：5617-5620.

    [2] 吕叶辉，李志宏，刘 丽，等.人体脑组织福尔马林固定石蜡包埋样本中长链非编码RNA的提取及定量分析方法[J].上海交通大学学报（医学版），2018，38（04）：400-406.

    [3] 张 燕，肖皓亮，周映辉，等.不同固定和包埋方法对大鼠骨组织免疫组化结果的影响[J].中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志，2017，10（06）：557-560.

    本文编辑：赵小龙