组织固定处理与包埋常见问题对策

    张换平

    【摘要】病理学组织检查作为疾病诊断的重要方法,同时也是制定手术方案的重要依据。石蜡切片属于使用较为广泛的组织学常规制片技术,整个制作过程包括了取材、固定、脱水等多个步骤,每一个步骤的操作均会影响到最终结果。本文主要探讨组织固定处理与包埋常见问题,全文从组织固定、组织包埋、包埋和标本定位等方面进行分析。

    【关键词】组织固定处理;包埋;常见问题;对策研究

    【中图分类号】R36 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095.6681.2019.28..02

    石蜡切片作为使用较为频繁的病理诊断技术,组织固定是组织脱水、透明、浸蜡等相关处理的前提,也是较为关键的一个步骤,与此同时,包埋操作的规范化与否会影响到组织切片质量。基于此,本文通过对组织固定处理与包埋常见问题以及对策分析,便于保证石蜡切片质量以及病理诊断结果,保证病理诊断质量,从而为临床诊治提供依据,相关内容分析如下。

    1 组织固定问题

    组织固定是为了较好的保存组织,实际组织标本固定期间,获取的标本需要最大程度保证其原有形态,比如条索状标本、大块标本等,组织固定期间避免造成原有组织出现扭曲。

    标本固定过程中使用最多的是10%中性缓冲福尔马林,这与10%中性缓冲福尔马林的使用特点有着密切关系,如10%中性缓冲福尔马林具有穿透速度快、组织硬化程度小等优势,这些都保证了不同标本有良好的固定效果。临床研究显示,病理组织通过10%中性缓冲福尔马林固定,病理组织能够保存较长时间,比如:病理组织的细胞核、细胞质均保存良好[1],多数也可进行免疫组化染色。

    组织固定过程中,部分人员在使用自动化仪器设备过程中,参数设置不合理,影响到标本在固定液中的停留时间,影响到组织标本实际固定效果。部分标本选择戊二醛、Helly等作为固定液,上述标本在固定液中停留时间过长会引起固定过度,影响到标本固定效果。

    2 组织包埋问题

    组织处理涉及到脱水、透明以及浸透操作,有效的组织脱水能够避免脱水不彻底以及透明不够问题,为不同组织切片提供良好条件。

    当前组织处理常用方法包括开放式与密闭式,由于开放式处理期间需要将标本从一个液体槽转移到另一个液体槽,整个操作存在安全风险,密闭式管理则能够避免上述问题,提高组织处理的安全性,避免人为操作以及环境对其影响。当然密闭式处理方法也存在不足,比如部分仪器设备无法使用部分液体,此外,活检小标本处理期间很容易造成富含脂肪组织、手术标本、活检小标本出现混合,影响到处理效果。

    组织处理期间需要保持环境的清洁,固定液需要及时更换,确保工作液面的可靠性,有标本的包埋盒应集中管理,便于控制整体标本处理质量;浸透石蜡温度需要超过石蜡熔点2~4℃,做好温度的测量与记录,避免温度过高或过低影响到组织处理效果,不利于后期切片。

    病理组织包埋期间,针对脱水不彻底问题,在使用乙醇作为脱水剂期间,如果时间允许,可选择低浓度乙醇进行多次处理,避免组织脱水过度问题;如果时间不允许,可使用95%乙醇,然后使用无水乙醇脱水,当前使用乙醇脱水方面,乙醇初期浓度控制在60%~65%,之后95%乙醇换2次,无水乙醇换2次。组织脱水期间应避免使用高浓度乙醇处理,同时应严格控制标本停留时间,避免组织出现扭曲以及硬度过大问题,不利于切片操作[2]。

    針对透明切片着色均匀度较差问题,考虑有水分混入浸透蜡液中,在乳头状瘤、胃、皮肤等小标本处理期间,需要注意上述问题,此时可合理选择透明剂,比如将二甲苯更换为甲苯。

    3 包埋和标本定位问题

    包埋的期间需要采取有效的质控措施,如坚持包埋蜡块总数、包埋盒内组织的每天记录与核对,染色结束后核对蜡块数、切片数,检查不同切片、蜡块以及患者纪录是否一致,避免切片与标本来源的不一致,重视包埋期间的各项检查。

    组织包埋期间很容易出现切片组织损坏问题,比如组织排列方向不合理、组织摆放不合理等,对此,应重视组织定位以及方向包埋管理,如对较大而平的组织,包埋定位期间需要保证最大最平组织面朝下同时进入到包埋模内;可用模式对特殊组织面进行标识,提高包埋定期的准确性,提高标本包埋操作的合理性。

    包埋期间需要根据合适的不锈钢模型,包埋盒内组织在取出时,需要使用干净的热镊子,所有组织均需要放置到模型底部,确保组织和蜡液的充分融合,组织标本在有序排列后需要将模型移动到冷台,观察并在组织埋平后及时盖上包埋盒,并注入蜡液,大约等待10~15 s,再次补充少量蜡液,提高整个包埋盒固定质量,消除后续切片中因固定问题引起的震颤。包埋组织使用塑料包埋盒时,需要根据情况实施二次加蜡,提高整个包埋处理稳固性,消除切片期间因为固定不可靠引起的蜡块脱落问题;二次加蜡需要控制用量,避免过多蜡液影响切片质量[3]。

    4 小 结

    石蜡组织固定以及切片过程中会受到较多因素影响,实际处理期间需要重视组织固定处理以包埋中存在的问题,并及时采取因对措施,提高不同组织病理学检查与操作的规范性,提高切片质量,便于对不同病理组织作出有效诊断。

    参考文献

    [1] 严晓丽,杜梦楠,郑纪宁.石蜡包埋组织在分子生物学实验中的研究进展[J].中国老年学杂志,2018,38(22):5617-5620.

    [2] 吕叶辉,李志宏,刘 丽,等.人体脑组织福尔马林固定石蜡包埋样本中长链非编码RNA的提取及定量分析方法[J].上海交通大学学报(医学版),2018,38(04):400-406.

    [3] 张 燕,肖皓亮,周映辉,等.不同固定和包埋方法对大鼠骨组织免疫组化结果的影响[J].中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志,2017,10(06):557-560.

    本文编辑:赵小龙

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