超声辅助响应面法优化巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷共同提取工艺研究
张建海 冯彬彬 牛小花
摘要：目的 应用响应面法优化巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷的超声辅助提取工艺。方法 在单因素试验基础上，采用Box-Behnken试验设计和响应面分析法考察乙醇体积分数、超声提取时间、液固比对巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷含量的影响。结果 最佳超声辅助提取工艺为乙醇体积分数73%、超声提取时间22 min、料液比为1∶32，巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷得率分别为（15.90±0.12）%和（0.75±0.05）%。结论 本研究所建立的提取工艺能够提高巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷的提取率，与模型预测值相符。
关键词：巫山淫羊藿；朝藿定C；淫羊藿苷；超声辅助提取；响应面法
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.03.023
中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）03-0085-04
Abstract： Objective To optimize ultrasonic-assisted extraction Epimedin C and Icariin from Epimedii Wushanensis Herba by response surface methodology. Methods On the basis of single factor tests， Box-Behnken experimental design and response surface methodology were adopted to optimize extraction conditions with the concentration of ethanol， ultrasonic time and solid-liquid ratio as factors. HPLC was used to determine the content of Epimedin C and Icariin from Epimedii Wushanensis Herba. Results Optimal ultrasound-assisted extraction technology was as following： the concentration of ethanol was 73%； the ultrasonic time was 22 min； the ratio of liquid to material was 1：32. The contents of Epimedin C and Icariin from Epimedii Wushanensis Herba were 15.90% and 0.75%， respectively. Conclusion This extraction technology can improve the extraction efficiency of Epimedin C and Icariin from Epimedii Wushanensis Herba， which is in accordance with predicted value.
Key words： Epimedii Wushanensis Herba； Epimedin C； Icariin； ultrasound-assisted extraction； response surface method
巫山淫羊藿为小檗科淫羊藿属植物巫山淫羊藿Epimedium wushanense T.S.Ying的干燥叶，具有补肾阳、强筋骨等功效。巫山淫羊藿中的主要活性成分是淫羊藿苷、朝藿定C，其中朝藿定C的含量较高，因此巫山淫羊藿有区别于其他淫羊藿的药效特性[1-4]。2010年版《中华人民共和国药典》（一部）将其单列，表明巫山淫羊藿有其独特之处。近年来，我国学者就淫羊藿的主要成分提取工艺开展了很多研究工作[1-2，4]，但迄今对巫山淫羊藿的研究较少。超声波辅助提取法是利用超声波产生的强烈振动、高加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，加速有效成分进入溶剂，从而提高浸出率，缩短提取时间，具有操作方便、品质稳定等优点[5-8]。为了进一步优化巫山淫羊藿提取工艺，根据有关文献和预试验结果[2，9-12]，本研究采用乙醇作为溶剂，结合超声波辅助提取巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷，并通过Box-Behnken试验和响应面分析法优选提取工艺，为巫山淫羊藿的开发利用提供试验依据。
1 仪器与试药
美国Agilent1260智能柱温箱及VWD紫外检测器；KQ5200E型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；BSA224S电子天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；DGX-9143B-1型数显鼓风干燥箱，上海福玛实验设备有限公司；HH.SYZ1-NI型电热恒温水浴锅，北京市长风仪器仪表公司；SHB-IV双A循环式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司；Millipore纯水系统。
朝藿定C、淫羊藿苷对照品，中国食品药品检定研究院，批号分别为111780-200801、110737-200415）；乙醇、甲醇等均为分析纯，乙腈、甲醇为色谱纯；水为去离子水，其他试剂均为分析纯。巫山淫羊藿，采集野生植物，经西南大学王海洋教授鉴定为小檗科淫羊藿属植物巫山淫羊藿Epimedium wushanense T.S. Ying的干燥叶。
2 方法与结果
2.1 朝藿定C和淫羊藿苷含量测定
2.1.1 色谱条件 色谱柱为Agilent-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈和水，采用梯度洗脱（乙腈：0～10 min，20%；10～20 min，45%；20～25 min，55%；25～30 min，20%），流速为1.0 mL/min，温度25 ℃，检测波长270 nm，进样量20 μL[10-12]。
2.1.2 标准曲线的建立 取朝藿定C和淫羊藿苷对照品10 mg，精密称定，置于25 mL容量瓶中，加乙醇溶解，得朝藿定C和淫羊藿苷储备液，将朝藿定C和淫羊藿苷储备液配制成质量浓度均为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、200.00 mg/L的系列标准溶液，按“2.1.1”项下色谱条件分析，以峰面积对质量浓度进行线性回归，得朝藿定C回归方程Y=52.90X+82.25（r2=0.999 1），淫羊藿苷回归方程Y=22.37X+28.37（r2=0.999 6），朝藿定C和淫羊藿苷线性范围均为6.25～200.00 mg/L。
2.1.3 样品测定 将巫山淫羊藿叶片清洗、阴干、粉碎、过筛（孔径0.355 mm），在60 ℃干燥4 h。称取各试验设计的恒重后的巫山淫羊藿粉末0.2 g，精密称定，置具塞三角瓶中，按照设计的试验条件进行提取，过滤，滤液过微孔滤膜，即得样品溶液，进样。
2.2 单因素试验考察
2.2.1 乙醇体积分数 取巫山淫羊藿粉末1.0 g，精密称定，固定超声时间20 min，提取温度50 ℃，料液比1∶30，分别用体积分数为30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%的乙醇溶液提取，测定朝藿定C和淫羊藿苷得率。结果朝藿定C含量分别为（1.25±0.24）%、（1.34±0.45）%、（1.42±1.03）%、（1.46±0.67）%、（1.50±0.56）%、（1.49±0.94）%、（1.37±1.34）%，淫羊藿苷含量分别为（0.42±0.23）%、（0.48±1.07）%、（0.54±0.37）%、（0.68±0.62）%、（0.71±0.71）%、（0.67±0.92）%、（0.65±1.18）%，故综合考虑选择70%乙醇。
2.2.2 超声时间 取巫山淫羊藿粉末1.0 g，精密称定，固定乙醇体积分数70%，提取温度50 ℃，料液比1∶30，分别超声提取10、15、20、25、30、35、40 min，测定朝藿定C和淫羊藿苷得率。结果朝藿定C的含量分别为（1.32±0.57）%、（1.43±1.95）%、（1.52±0.75）%、（1.50±0.08）%、（1.48±0.24）%、（1.47±0.14）%、（1.45±0.46）%，淫羊藿苷含量分别为（0.57±1.04）%、（0.63±0.73）%、（0.70±0.26）%、（0.68±0.73）%、（0.66±0.26）%、（0.65±0.87）%、（0.67±0.21）%，故综合考虑选择超声提取20 min。
2.2.3 提取温度 取巫山淫羊藿粉末1.0 g，精密称定，固定乙醇体积分数70%，超声提取时间20 min，料液比1∶30，分别于30、40、50、60、70、80 ℃进行提取，测定朝藿定C和淫羊藿苷得率。结果朝藿定C含量分别为（1.42±0.25）%、（1.44±0.31）%、（1.49±0.58）%、（1.47±0.29）%、（1.48±0.27）%、（1.51±0.81）%，淫羊藿苷的含量分别为（0.62±1.01）%、（0.65±0.82）%、（0.68±0.54）%、（0.68±0.37）%、（0.65±0.64）%、（0.63±0.71）%，说明提取温度对朝藿定C的提取率影响不大，故综合考虑选择提取温度为50 ℃。
2.2.4 料液比 取巫山淫羊藿粉末1.0 g，精密称定，固定乙醇体积分数70%，超声提取时间20 min，超声温度为50 ℃，料液比（g/mL）分别为1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40进行提取，测定朝藿定C和淫羊藿苷得率。结果朝藿定C含量分别为（1.38±0.25）%、（1.41±0.78）%、（1.45±0.92）%、（1.48±0.17）%、（1.51±0.11）%、（1.50±0.28）%、（1.41±0.15）%，淫羊藿苷的含量分别为（0.48±0.28）%、（0.52±0.09）%、（0.58±0.17）%、（0.64±0.47）%、（0.69±0.28）%、（0.67±0.17）%、（0.65±0.58）%，故综合考虑选择料液比为1∶30。
2.3 响应面试验
根据单因素试验考察的结果，采用三因素三水平的Box-Behnken试验设计，以乙醇浓度、超声时间、料液比为自变量，以朝藿定C和淫羊藿苷的得率为因变量，研究响应值及最佳变量的组合。试验因素水平见表1。共设计17个试验，重复3次。根据响应面试验，按照“2.1”项下方法测定朝藿定C和淫羊藿苷含量，试验安排及结果见表2，响应面分析见图1，方差分析结果见表3。
从表3方差分析可知，对朝藿定C来说，B、C、A2、B2、C2为显著影响因素；在各影响因素中，超声时间（B）的影响最大，其次是料液比（C）、乙醇浓度（A）；在总的作用因素中，1次项和平方项的影响较大，而交互项影响相对较小。对淫羊藿苷来说，C、AB、AC、BC、A2、B2、C2为显著影响因素；在各影响因素中，料液比（C）的影响最大，其次是乙醇浓度（A）、超声时间（B）；在总的作用因素中，交互项和平方项的影响较大，而1次项影响相对较小，乙醇浓度和超声时间、乙醇浓度和料液比、超声时间和料液比均具有交互作用。
以朝藿定C和淫羊藿苷提取量为响应值，采用Design-Expert软件对表2试验数据进行三元二次多项式逐步回归拟合，得回归方程Y=1.608+0.0025A+0.08125B+0.06125C-0.0175AB-0.0425AC+0.0150BC-0.0965A2-0.1390B2-0.0990C2、Y=0.7460+0.0200A+0.0175B+0.0275C-0.0500AB-0.0350AC-0.0300BC-0.0855A2-0.0705B2-0.0805C2。由表3可知，该模型高度显著，失拟项相对于绝对误差不显著。模型确定系数（R2）为0.993 7，说明此模型与实际试验拟合较好，能很好地描述试验结果。图1响应面分析更为直观地表现了各因素与朝藿定C和淫羊藿苷提取量的相互关系，表明各因素对朝藿定C交互作用不显著，而对淫羊藿苷含量交互作用显著。
2.4 验证试验
通过Design Expert 8.0.6.1软件进行响应面设计优化，确定朝藿定C的最佳提取工艺为乙醇体积分数76.24%、提取时间22.64 min、料液比1∶31.95 g/mL，朝藿定C理论提取量为1.58%；淫羊藿苷的最佳提取工艺为乙醇体积分数70%、提取时间21.14 min、料液比1∶31.51 g/mL，淫羊藿苷理论提取量为0.75%。结合实际操作考虑，将工艺条件修正为乙醇体积分数73%、提取时间22 min、料液比1∶32 g/mL。按该工艺进行5次验证试验，结果巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷提取量分别为（15.90±0.12）%和（0.75±0.05）%，与预测值基本一致，表明该三元二次方程与实际情况拟合较好，充分验证了所建模型的正确性。
3 讨论
超声波提取方法可较好地用于巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷有效成分的提取，其主要药效成分可较好保留。在整个提取过程中温度较低，有利于巫山淫羊藿中的有效成分不被破坏。
本研究在单因素试验基础上，确定乙醇体积分数、提取温度、液固比对巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷提取率影响显著，采用响应面法对超声辅助提取的工艺条件进行优化，结果预测值与实测值基本一致，说明建立的工艺条件可靠，能有效提高巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷的提取率，对巫山淫羊藿资源的综合利用及工业化生产具有指导意义。
本研究采用响应面法优化了提取巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷的4个关键因子，得到二次项回归模型，并对交互项作用进行分析。确定最佳工艺条件为：乙醇体积分数73%，提取时间22 min，料液比1∶32 g/mL。
参考文献：
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[10] 谢娟平，孙文基.梯度洗脱法同时快速分离测定不同品种不同部位淫羊藿中7种异戊烯基黄酮类成分的研究[J].天然产物研究与开发， 2010，22（5）：820-825.
[11] 谢娟平，王忠东，孙文基.淫羊藿属9种淫羊藿叶中朝藿定C和淫羊藿苷量的考查[J].中草药，2007，38（4）：613-614.
[12] 裴利宽，郭宝林，黄文华.淫羊藿属主要资源种类的HPLC指纹图谱特征和种类鉴定[J].中国中药杂志，2008，33（14）：1662-1668.
（收稿日期：2015-05-07）
（修回日期：2015-06-01；编辑：陈静）
摘要：目的 应用响应面法优化巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷的超声辅助提取工艺。方法 在单因素试验基础上，采用Box-Behnken试验设计和响应面分析法考察乙醇体积分数、超声提取时间、液固比对巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷含量的影响。结果 最佳超声辅助提取工艺为乙醇体积分数73%、超声提取时间22 min、料液比为1∶32，巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷得率分别为（15.90±0.12）%和（0.75±0.05）%。结论 本研究所建立的提取工艺能够提高巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷的提取率，与模型预测值相符。
关键词：巫山淫羊藿；朝藿定C；淫羊藿苷；超声辅助提取；响应面法
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.03.023
中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）03-0085-04
Abstract： Objective To optimize ultrasonic-assisted extraction Epimedin C and Icariin from Epimedii Wushanensis Herba by response surface methodology. Methods On the basis of single factor tests， Box-Behnken experimental design and response surface methodology were adopted to optimize extraction conditions with the concentration of ethanol， ultrasonic time and solid-liquid ratio as factors. HPLC was used to determine the content of Epimedin C and Icariin from Epimedii Wushanensis Herba. Results Optimal ultrasound-assisted extraction technology was as following： the concentration of ethanol was 73%； the ultrasonic time was 22 min； the ratio of liquid to material was 1：32. The contents of Epimedin C and Icariin from Epimedii Wushanensis Herba were 15.90% and 0.75%， respectively. Conclusion This extraction technology can improve the extraction efficiency of Epimedin C and Icariin from Epimedii Wushanensis Herba， which is in accordance with predicted value.
Key words： Epimedii Wushanensis Herba； Epimedin C； Icariin； ultrasound-assisted extraction； response surface method
巫山淫羊藿为小檗科淫羊藿属植物巫山淫羊藿Epimedium wushanense T.S.Ying的干燥叶，具有补肾阳、强筋骨等功效。巫山淫羊藿中的主要活性成分是淫羊藿苷、朝藿定C，其中朝藿定C的含量较高，因此巫山淫羊藿有区别于其他淫羊藿的药效特性[1-4]。2010年版《中华人民共和国药典》（一部）将其单列，表明巫山淫羊藿有其独特之处。近年来，我国学者就淫羊藿的主要成分提取工艺开展了很多研究工作[1-2，4]，但迄今对巫山淫羊藿的研究较少。超声波辅助提取法是利用超声波产生的强烈振动、高加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，加速有效成分进入溶剂，从而提高浸出率，缩短提取时间，具有操作方便、品质稳定等优点[5-8]。为了进一步优化巫山淫羊藿提取工艺，根据有关文献和预试验结果[2，9-12]，本研究采用乙醇作为溶剂，结合超声波辅助提取巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷，并通过Box-Behnken试验和响应面分析法优选提取工艺，为巫山淫羊藿的开发利用提供试验依据。
1 仪器与试药
美国Agilent1260智能柱温箱及VWD紫外检测器；KQ5200E型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；BSA224S电子天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；DGX-9143B-1型数显鼓风干燥箱，上海福玛实验设备有限公司；HH.SYZ1-NI型电热恒温水浴锅，北京市长风仪器仪表公司；SHB-IV双A循环式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司；Millipore纯水系统。
朝藿定C、淫羊藿苷对照品，中国食品药品检定研究院，批号分别为111780-200801、110737-200415）；乙醇、甲醇等均为分析纯，乙腈、甲醇为色谱纯；水为去离子水，其他试剂均为分析纯。巫山淫羊藿，采集野生植物，经西南大学王海洋教授鉴定为小檗科淫羊藿属植物巫山淫羊藿Epimedium wushanense T.S. Ying的干燥叶。
2 方法与结果
2.1 朝藿定C和淫羊藿苷含量测定
2.1.1 色谱条件 色谱柱为Agilent-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈和水，采用梯度洗脱（乙腈：0～10 min，20%；10～20 min，45%；20～25 min，55%；25～30 min，20%），流速为1.0 mL/min，温度25 ℃，检测波长270 nm，进样量20 μL[10-12]。
2.1.2 标准曲线的建立 取朝藿定C和淫羊藿苷对照品10 mg，精密称定，置于25 mL容量瓶中，加乙醇溶解，得朝藿定C和淫羊藿苷储备液，将朝藿定C和淫羊藿苷储备液配制成质量浓度均为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、200.00 mg/L的系列标准溶液，按“2.1.1”项下色谱条件分析，以峰面积对质量浓度进行线性回归，得朝藿定C回归方程Y=52.90X+82.25（r2=0.999 1），淫羊藿苷回归方程Y=22.37X+28.37（r2=0.999 6），朝藿定C和淫羊藿苷线性范围均为6.25～200.00 mg/L。
2.1.3 样品测定 将巫山淫羊藿叶片清洗、阴干、粉碎、过筛（孔径0.355 mm），在60 ℃干燥4 h。称取各试验设计的恒重后的巫山淫羊藿粉末0.2 g，精密称定，置具塞三角瓶中，按照设计的试验条件进行提取，过滤，滤液过微孔滤膜，即得样品溶液，进样。
2.2 单因素试验考察
2.2.1 乙醇体积分数 取巫山淫羊藿粉末1.0 g，精密称定，固定超声时间20 min，提取温度50 ℃，料液比1∶30，分别用体积分数为30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%的乙醇溶液提取，测定朝藿定C和淫羊藿苷得率。结果朝藿定C含量分别为（1.25±0.24）%、（1.34±0.45）%、（1.42±1.03）%、（1.46±0.67）%、（1.50±0.56）%、（1.49±0.94）%、（1.37±1.34）%，淫羊藿苷含量分别为（0.42±0.23）%、（0.48±1.07）%、（0.54±0.37）%、（0.68±0.62）%、（0.71±0.71）%、（0.67±0.92）%、（0.65±1.18）%，故综合考虑选择70%乙醇。
2.2.2 超声时间 取巫山淫羊藿粉末1.0 g，精密称定，固定乙醇体积分数70%，提取温度50 ℃，料液比1∶30，分别超声提取10、15、20、25、30、35、40 min，测定朝藿定C和淫羊藿苷得率。结果朝藿定C的含量分别为（1.32±0.57）%、（1.43±1.95）%、（1.52±0.75）%、（1.50±0.08）%、（1.48±0.24）%、（1.47±0.14）%、（1.45±0.46）%，淫羊藿苷含量分别为（0.57±1.04）%、（0.63±0.73）%、（0.70±0.26）%、（0.68±0.73）%、（0.66±0.26）%、（0.65±0.87）%、（0.67±0.21）%，故综合考虑选择超声提取20 min。
2.2.3 提取温度 取巫山淫羊藿粉末1.0 g，精密称定，固定乙醇体积分数70%，超声提取时间20 min，料液比1∶30，分别于30、40、50、60、70、80 ℃进行提取，测定朝藿定C和淫羊藿苷得率。结果朝藿定C含量分别为（1.42±0.25）%、（1.44±0.31）%、（1.49±0.58）%、（1.47±0.29）%、（1.48±0.27）%、（1.51±0.81）%，淫羊藿苷的含量分别为（0.62±1.01）%、（0.65±0.82）%、（0.68±0.54）%、（0.68±0.37）%、（0.65±0.64）%、（0.63±0.71）%，说明提取温度对朝藿定C的提取率影响不大，故综合考虑选择提取温度为50 ℃。
2.2.4 料液比 取巫山淫羊藿粉末1.0 g，精密称定，固定乙醇体积分数70%，超声提取时间20 min，超声温度为50 ℃，料液比（g/mL）分别为1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40进行提取，测定朝藿定C和淫羊藿苷得率。结果朝藿定C含量分别为（1.38±0.25）%、（1.41±0.78）%、（1.45±0.92）%、（1.48±0.17）%、（1.51±0.11）%、（1.50±0.28）%、（1.41±0.15）%，淫羊藿苷的含量分别为（0.48±0.28）%、（0.52±0.09）%、（0.58±0.17）%、（0.64±0.47）%、（0.69±0.28）%、（0.67±0.17）%、（0.65±0.58）%，故综合考虑选择料液比为1∶30。
2.3 响应面试验
根据单因素试验考察的结果，采用三因素三水平的Box-Behnken试验设计，以乙醇浓度、超声时间、料液比为自变量，以朝藿定C和淫羊藿苷的得率为因变量，研究响应值及最佳变量的组合。试验因素水平见表1。共设计17个试验，重复3次。根据响应面试验，按照“2.1”项下方法测定朝藿定C和淫羊藿苷含量，试验安排及结果见表2，响应面分析见图1，方差分析结果见表3。
从表3方差分析可知，对朝藿定C来说，B、C、A2、B2、C2为显著影响因素；在各影响因素中，超声时间（B）的影响最大，其次是料液比（C）、乙醇浓度（A）；在总的作用因素中，1次项和平方项的影响较大，而交互项影响相对较小。对淫羊藿苷来说，C、AB、AC、BC、A2、B2、C2为显著影响因素；在各影响因素中，料液比（C）的影响最大，其次是乙醇浓度（A）、超声时间（B）；在总的作用因素中，交互项和平方项的影响较大，而1次项影响相对较小，乙醇浓度和超声时间、乙醇浓度和料液比、超声时间和料液比均具有交互作用。
以朝藿定C和淫羊藿苷提取量为响应值，采用Design-Expert软件对表2试验数据进行三元二次多项式逐步回归拟合，得回归方程Y=1.608+0.0025A+0.08125B+0.06125C-0.0175AB-0.0425AC+0.0150BC-0.0965A2-0.1390B2-0.0990C2、Y=0.7460+0.0200A+0.0175B+0.0275C-0.0500AB-0.0350AC-0.0300BC-0.0855A2-0.0705B2-0.0805C2。由表3可知，该模型高度显著，失拟项相对于绝对误差不显著。模型确定系数（R2）为0.993 7，说明此模型与实际试验拟合较好，能很好地描述试验结果。图1响应面分析更为直观地表现了各因素与朝藿定C和淫羊藿苷提取量的相互关系，表明各因素对朝藿定C交互作用不显著，而对淫羊藿苷含量交互作用显著。
2.4 验证试验
通过Design Expert 8.0.6.1软件进行响应面设计优化，确定朝藿定C的最佳提取工艺为乙醇体积分数76.24%、提取时间22.64 min、料液比1∶31.95 g/mL，朝藿定C理论提取量为1.58%；淫羊藿苷的最佳提取工艺为乙醇体积分数70%、提取时间21.14 min、料液比1∶31.51 g/mL，淫羊藿苷理论提取量为0.75%。结合实际操作考虑，将工艺条件修正为乙醇体积分数73%、提取时间22 min、料液比1∶32 g/mL。按该工艺进行5次验证试验，结果巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷提取量分别为（15.90±0.12）%和（0.75±0.05）%，与预测值基本一致，表明该三元二次方程与实际情况拟合较好，充分验证了所建模型的正确性。
3 讨论
超声波提取方法可较好地用于巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷有效成分的提取，其主要药效成分可较好保留。在整个提取过程中温度较低，有利于巫山淫羊藿中的有效成分不被破坏。
本研究在单因素试验基础上，确定乙醇体积分数、提取温度、液固比对巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷提取率影响显著，采用响应面法对超声辅助提取的工艺条件进行优化，结果预测值与实测值基本一致，说明建立的工艺条件可靠，能有效提高巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷的提取率，对巫山淫羊藿资源的综合利用及工业化生产具有指导意义。
本研究采用响应面法优化了提取巫山淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷的4个关键因子，得到二次项回归模型，并对交互项作用进行分析。确定最佳工艺条件为：乙醇体积分数73%，提取时间22 min，料液比1∶32 g/mL。
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（收稿日期：2015-05-07）
（修回日期：2015-06-01；编辑：陈静）
