复方扶正养肝颗粒定性鉴别研究
陈凌云 陈坤 王华宁
摘要：目的 建立复方扶正养肝颗粒的定性鉴别方法。方法 采用薄层色谱法对处方茵陈、白芍、郁金、甘草进行定性鉴别。结果 薄层鉴别色谱斑点清晰、专属性强，阴性对照无干扰。结论 该方法专属性强、重现性好、操作简便，可用于复方扶正养肝颗粒的定性鉴别。
关键词：复方扶正养肝颗粒;薄层鉴别;茵陈;白芍;郁金;甘草
中图分类号：R286.0 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2018）08-0075-03
扶正养肝汤由黄芪、白术、柴胡、白芍、土茯苓等11味药物组成，具有扶正固本，清热利湿、解毒化浊之功效。该方为云南省中医医院脾胃病科用于治疗病毒性肝炎的协定处方，前期临床及实验研究表明，扶正养肝方对病毒性肝炎患者肝功能具有较好改善作用，明显降低Con A诱导免疫性肝损伤模型小鼠血清ALT和AST，下调细胞因子IFN-γ表达[1-2]，其作用机制可能与下调Fas mRNA基因表达，抑制肝细胞凋亡有关[3]。该方原为汤剂，为使患者服用方便，便于携带，本研究拟将其开发成医疗机构制剂。为更好的对该制剂进行质量控制，本研究采用薄层色谱法，建立了扶正养肝颗粒中茵陈、白芍、郁金、甘草的薄层鉴别方法，为扶正养肝的的质量标准的完善、充实提供了依据。
1 仪器与试药
KMDOS-SK250H超声仪（上海科导超声仪器有限公司），SartoriusBT25S电子分析天平（Xs25A瑞士普利赛斯仪器公司，d=0.00001 g）;双槽展开缸（20cm × 10cm）;硅胶G薄层板;茵陈对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：120950-201608）;白芍对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：120905-201109）;郁金对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：120949-201407）;甘草对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：120904-201519）;院内自制扶正养肝颗粒（编号：20170801、20170802、20170803）。
2 方法与结果
2.1 茵陈薄层鉴别[4-5] 取本品粉末5 g，加石油醚30 mL，超声处理10 min，滤过，弃去石油醚，药渣挥干，加稀盐酸1 mL与乙酸乙酯30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加2 mL甲醇溶解，作为供试品溶液。另取茵陈对照药材2 g及缺茵陈药材的阴性对照样品5 g，同法制成对照药材溶液及阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取阴性对照溶液和供试品溶液各20 μL，对照品溶液4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-氯仿-丙酮（40：75：25）为展开剂，展开，取出，晾干，氨熏后置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点，且阴性无干扰。结果见图1。
1.阴性对照;2.茵陈对照药材;3.扶正养肝颗粒 20170801;4.扶正养肝颗粒 20170802;5.扶正养肝颗粒 20170803;吸附剂：硅胶G;展开剂：甲苯-氯仿-丙酮（40：75：25）;显色方法：氨熏;检视条件：紫外灯下365nm
图1 郁金TLC色谱图
2.2 白芍薄层鉴别[6-8] 取本品粉末5 g，加乙醇25 mL，振摇5 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取白芍对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取阴性样品5 g，同法制成阴性对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015版四部附录0502）试验，吸取上述3种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点，且阴性无干扰。结果见图2。
1.白芍对照药材;2.扶正养肝颗粒 20170801;3.扶正养肝颗粒 20170802;4.扶正养肝颗粒 20170803;5.阴性对照;吸附剂：硅胶G板;展开剂：三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇：甲酸（40：5：10：0.2）;显色条件：5%香草醛硫酸溶液;检视条件：日光
图2 白芍TLC色谱图
2.3 郁金薄层鉴别[9-10] 取本品粉末5 g，加石油醚（60-90℃）50 mL，超声10 min，过滤，滤液挥干，残渣加甲醇2mL使
1.郁金对照药材;2.扶正养肝颗粒 20170801;3.扶正养肝颗粒 20170802;4.扶正养肝颗粒 20170803;5.阴性对照;吸附剂：硅胶G板;展开剂：石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯（9：1）;显色条件：10%硫酸乙醇溶液;检视条件：紫外灯下365nm
图3 郁金TLC色谱图
溶解，作为供试品溶液。另取郁金药材2 g，加石油醚（60-90℃）20 mL，同法制成对照药材溶液。再取阴性样品5 g，同法制成阴性对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015版四部附录0502）试验，吸取对照品溶液20 μL、供试品溶液和阴性对照溶液各10μL，点于同一硅胶G板上，以石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯（9：1）为展开剂，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点，阴性无干扰。结果见图3。
2.4 甘草薄层鉴别[11] 取本品粉末1 g，加乙醚40 mL，加热回流1 h，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇30 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水40 mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材lg，同法制成对照药材溶液。再取阴性样品1 g，同法制得为阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015版四部附录0502）试验，吸取上述三种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15：1：1：2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色淸晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，顯相同的颜色荧光斑点，且阴性对照无干扰。
1.甘草對照药材;2.扶正养肝颗粒 20170801;3.扶正养肝颗粒 20170802;4.扶正养肝颗粒 20170803;5.阴性对照;吸附剂：硅胶G板;展开剂：乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15：1：1：2）;显色条件：10%硫酸乙醇溶液;检视条件：紫外灯下365nm
图4 甘草TLC色谱图
3 讨论
本品由黄芪、茵陈、牡丹皮、土茯苓等11味药组成，成分较为复杂，本次质量标准研究中对黄芪、茵陈、牡丹皮、土茯苓、垂盆草、甘草、郁金、丹参、薏苡仁、牡丹皮等10味药的TLC鉴别方法进行了研究，其中垂盆草、丹参、牡丹皮、薏苡仁、土茯苓未能找到合适的TLC鉴别方法，而黄芪因测定了其含量，因此，选取了茵陈、白芍、郁金、甘草4味药的进行TLC鉴别。在茵陈的薄层鉴别中，先后采用乙酸乙酯-甲酸-水（16：3：6）、甲苯-醋酸乙酯-甲酸（10：3：0.2）、石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯-丙酮（6：3：0.5）为展开系统，但结果显色供试品斑点不明显且不清晰，或阴性有干扰，经摸索，用调整后的方法结果斑点清晰、重复性好。
参考文献：
[1]王华宁，余泽云，王宇静，等.扶正养肝方治疗慢性乙型肝炎60例[J].中国中医药现代远程教育，2010，8（12）：236.
[2]王华宁，何小林，余泽云，等.扶正养肝方对免疫性肝损伤小鼠的保护作用及作用机制[J].中国中西医结合消化杂志，2013，21（8）：400.
[3]万春平，祁燕，张兴宗，等.扶正养肝方对急性免疫性肝损伤抗肝细胞凋亡及凋亡相关分子表达的研究[J].时珍国医国药，2015，26（12）：2820-2822.
[4]付延伟，纪松岗，李明春，等.复方茵陈颗粒的质量标准研究[J].解放军药学学报，2015，31（01）：53-56.
[5]沈洪宽，宋岳，刘晓凤，等.茵陈降黄胶囊质量标准研究[J].黑龙江医药科学，2012，35（05）：88.
[6]祁红，刘传统.百合健脾润肺胶囊质量标准研究[J].云南中医中药杂志，2011，32（07）：68-70.
[7]刁娟娟，李小玲，李新霞.益肤丸的薄层色谱鉴别[J].中国现代中药，2016，18（10）：1335-1340.
[8]程艳芹，纪松岗，马燕，等.内消颗粒的质量标准研究[J].解放军药学学报，2016，32（01）：35-38+73.
[9]李婷，叶豆丹，鲍慧玮，等.治郁颗粒的成型工艺及质量控制[J].中国实验方剂学杂志，2014，20（06）：19-22.
[10]赵颖，李文，刘永年，等.欢天安神饮的质量标准研究[J].中国医院用药评价与分析，2016，16（05）：633-635.
[11]国家药典委员会.中国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：87.
（收稿日期：2018-03-19）
摘要：目的 建立复方扶正养肝颗粒的定性鉴别方法。方法 采用薄层色谱法对处方茵陈、白芍、郁金、甘草进行定性鉴别。结果 薄层鉴别色谱斑点清晰、专属性强，阴性对照无干扰。结论 该方法专属性强、重现性好、操作简便，可用于复方扶正养肝颗粒的定性鉴别。
关键词：复方扶正养肝颗粒;薄层鉴别;茵陈;白芍;郁金;甘草
中图分类号：R286.0 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2018）08-0075-03
扶正养肝汤由黄芪、白术、柴胡、白芍、土茯苓等11味药物组成，具有扶正固本，清热利湿、解毒化浊之功效。该方为云南省中医医院脾胃病科用于治疗病毒性肝炎的协定处方，前期临床及实验研究表明，扶正养肝方对病毒性肝炎患者肝功能具有较好改善作用，明显降低Con A诱导免疫性肝损伤模型小鼠血清ALT和AST，下调细胞因子IFN-γ表达[1-2]，其作用机制可能与下调Fas mRNA基因表达，抑制肝细胞凋亡有关[3]。该方原为汤剂，为使患者服用方便，便于携带，本研究拟将其开发成医疗机构制剂。为更好的对该制剂进行质量控制，本研究采用薄层色谱法，建立了扶正养肝颗粒中茵陈、白芍、郁金、甘草的薄层鉴别方法，为扶正养肝的的质量标准的完善、充实提供了依据。
1 仪器与试药
KMDOS-SK250H超声仪（上海科导超声仪器有限公司），SartoriusBT25S电子分析天平（Xs25A瑞士普利赛斯仪器公司，d=0.00001 g）;双槽展开缸（20cm × 10cm）;硅胶G薄层板;茵陈对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：120950-201608）;白芍对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：120905-201109）;郁金对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：120949-201407）;甘草对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：120904-201519）;院内自制扶正养肝颗粒（编号：20170801、20170802、20170803）。
2 方法与结果
2.1 茵陈薄层鉴别[4-5] 取本品粉末5 g，加石油醚30 mL，超声处理10 min，滤过，弃去石油醚，药渣挥干，加稀盐酸1 mL与乙酸乙酯30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加2 mL甲醇溶解，作为供试品溶液。另取茵陈对照药材2 g及缺茵陈药材的阴性对照样品5 g，同法制成对照药材溶液及阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取阴性对照溶液和供试品溶液各20 μL，对照品溶液4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-氯仿-丙酮（40：75：25）为展开剂，展开，取出，晾干，氨熏后置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点，且阴性无干扰。结果见图1。
1.阴性对照;2.茵陈对照药材;3.扶正养肝颗粒 20170801;4.扶正养肝颗粒 20170802;5.扶正养肝颗粒 20170803;吸附剂：硅胶G;展开剂：甲苯-氯仿-丙酮（40：75：25）;显色方法：氨熏;检视条件：紫外灯下365nm
图1 郁金TLC色谱图
2.2 白芍薄层鉴别[6-8] 取本品粉末5 g，加乙醇25 mL，振摇5 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取白芍对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取阴性样品5 g，同法制成阴性对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015版四部附录0502）试验，吸取上述3种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点，且阴性无干扰。结果见图2。
1.白芍对照药材;2.扶正养肝颗粒 20170801;3.扶正养肝颗粒 20170802;4.扶正养肝颗粒 20170803;5.阴性对照;吸附剂：硅胶G板;展开剂：三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇：甲酸（40：5：10：0.2）;显色条件：5%香草醛硫酸溶液;检视条件：日光
图2 白芍TLC色谱图
2.3 郁金薄层鉴别[9-10] 取本品粉末5 g，加石油醚（60-90℃）50 mL，超声10 min，过滤，滤液挥干，残渣加甲醇2mL使
1.郁金对照药材;2.扶正养肝颗粒 20170801;3.扶正养肝颗粒 20170802;4.扶正养肝颗粒 20170803;5.阴性对照;吸附剂：硅胶G板;展开剂：石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯（9：1）;显色条件：10%硫酸乙醇溶液;检视条件：紫外灯下365nm
图3 郁金TLC色谱图
溶解，作为供试品溶液。另取郁金药材2 g，加石油醚（60-90℃）20 mL，同法制成对照药材溶液。再取阴性样品5 g，同法制成阴性对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015版四部附录0502）试验，吸取对照品溶液20 μL、供试品溶液和阴性对照溶液各10μL，点于同一硅胶G板上，以石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯（9：1）为展开剂，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点，阴性无干扰。结果见图3。
2.4 甘草薄层鉴别[11] 取本品粉末1 g，加乙醚40 mL，加热回流1 h，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇30 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水40 mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材lg，同法制成对照药材溶液。再取阴性样品1 g，同法制得为阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015版四部附录0502）试验，吸取上述三种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15：1：1：2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色淸晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，顯相同的颜色荧光斑点，且阴性对照无干扰。
1.甘草對照药材;2.扶正养肝颗粒 20170801;3.扶正养肝颗粒 20170802;4.扶正养肝颗粒 20170803;5.阴性对照;吸附剂：硅胶G板;展开剂：乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15：1：1：2）;显色条件：10%硫酸乙醇溶液;检视条件：紫外灯下365nm
图4 甘草TLC色谱图
3 讨论
本品由黄芪、茵陈、牡丹皮、土茯苓等11味药组成，成分较为复杂，本次质量标准研究中对黄芪、茵陈、牡丹皮、土茯苓、垂盆草、甘草、郁金、丹参、薏苡仁、牡丹皮等10味药的TLC鉴别方法进行了研究，其中垂盆草、丹参、牡丹皮、薏苡仁、土茯苓未能找到合适的TLC鉴别方法，而黄芪因测定了其含量，因此，选取了茵陈、白芍、郁金、甘草4味药的进行TLC鉴别。在茵陈的薄层鉴别中，先后采用乙酸乙酯-甲酸-水（16：3：6）、甲苯-醋酸乙酯-甲酸（10：3：0.2）、石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯-丙酮（6：3：0.5）为展开系统，但结果显色供试品斑点不明显且不清晰，或阴性有干扰，经摸索，用调整后的方法结果斑点清晰、重复性好。
参考文献：
[1]王华宁，余泽云，王宇静，等.扶正养肝方治疗慢性乙型肝炎60例[J].中国中医药现代远程教育，2010，8（12）：236.
[2]王华宁，何小林，余泽云，等.扶正养肝方对免疫性肝损伤小鼠的保护作用及作用机制[J].中国中西医结合消化杂志，2013，21（8）：400.
[3]万春平，祁燕，张兴宗，等.扶正养肝方对急性免疫性肝损伤抗肝细胞凋亡及凋亡相关分子表达的研究[J].时珍国医国药，2015，26（12）：2820-2822.
[4]付延伟，纪松岗，李明春，等.复方茵陈颗粒的质量标准研究[J].解放军药学学报，2015，31（01）：53-56.
[5]沈洪宽，宋岳，刘晓凤，等.茵陈降黄胶囊质量标准研究[J].黑龙江医药科学，2012，35（05）：88.
[6]祁红，刘传统.百合健脾润肺胶囊质量标准研究[J].云南中医中药杂志，2011，32（07）：68-70.
[7]刁娟娟，李小玲，李新霞.益肤丸的薄层色谱鉴别[J].中国现代中药，2016，18（10）：1335-1340.
[8]程艳芹，纪松岗，马燕，等.内消颗粒的质量标准研究[J].解放军药学学报，2016，32（01）：35-38+73.
[9]李婷，叶豆丹，鲍慧玮，等.治郁颗粒的成型工艺及质量控制[J].中国实验方剂学杂志，2014，20（06）：19-22.
[10]赵颖，李文，刘永年，等.欢天安神饮的质量标准研究[J].中国医院用药评价与分析，2016，16（05）：633-635.
[11]国家药典委员会.中国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：87.
（收稿日期：2018-03-19）
